红细胞血型检测课件

1、红细胞血型检测输输 血血 前前 检检 查查 第一页，共四十二页。红细胞血型检测主要(zhyo)内容u输血前免疫血液学检查输血前免疫血液学检查u盐水介质盐水介质(jizh)试验技术试验技术u酶处理试验技术酶处理试验技术u抗球蛋白试验技术抗球蛋白试验技术u聚凝胺介质试验技术聚凝胺介质试验技术u微柱凝集试验技术微柱凝集试验技术u吸收放散试验吸收放散试验u凝集抑制试验凝集抑制试验第二页，共四十二页。红细胞血型检测第一节 输血前免疫(miny)血液学检查 一、受血者标本处理一、受血者标本处理 二、受血者和供血者二、受血者和供血者ABOABO和和RhRh定型定型 三、不规则抗体的筛选和鉴定三、不规则抗体的

2、筛选和鉴定 四、交叉配血试验四、交叉配血试验 五、实验五、实验(shyn)(shyn)结果的规范化报告结果的规范化报告第三页，共四十二页。红细胞血型检测输血前检查输血前检查(jinch)的主要程序的主要程序第四页，共四十二页。红细胞血型检测受血者病史和血样的检查受血者病史和血样的检查(jinch)、核对及处理、核对及处理受血者血样本受血者血样本(yngbn)第五页，共四十二页。红细胞血型检测为什么输血前检查用血清为什么输血前检查用血清(xuqng)比血浆更好？比血浆更好？第六页，共四十二页。红细胞血型检测ABO正反定型不符分析(fnx)基本程序u重复试验重复试验u重新采集献血者与受血者血液标本

3、重新采集献血者与受血者血液标本u查询受血者既往病史及输血史和用药史等查询受血者既往病史及输血史和用药史等u多次洗涤多次洗涤(xd)(xd)标本红细胞标本红细胞u应用抗应用抗-AB-AB、抗、抗-A-A1 1、抗、抗-H-H检测红细胞检测红细胞u分析分析O O型筛选细胞检测结果型筛选细胞检测结果第七页，共四十二页。红细胞血型检测l 复检正定型血型结果的准确性，纠正漏检、误报复检正定型血型结果的准确性，纠正漏检、误报l 亚型亚型l 能够纠正因疾病原因造成的红细胞抗原减弱造成的血型错误能够纠正因疾病原因造成的红细胞抗原减弱造成的血型错误(cuw)(cuw)l 排除获得性抗原（如类排除获得性抗原（如类

4、B B抗原）和冷凝集现象对红细胞定型的抗原）和冷凝集现象对红细胞定型的干扰干扰l 不规则抗体不规则抗体ABO正反定型(dng xng)的临床意义第八页，共四十二页。红细胞血型检测错加试剂错加试剂(shj)或标本或标本技术技术(jsh)和操作和操作受血者红受血者红细胞或血细胞或血清清(xuqng)(xuqng)ABO正反定型不一致的原因试剂失效或污染试剂失效或污染细胞与血清间比例细胞与血清间比例不适当不适当溶血现象未能识别溶血现象未能识别漏加试剂漏加试剂结果记录或判断错结果记录或判断错误误l血清异常血清异常l红细胞致敏红细胞致敏l近期输血近期输血l疾病导致抗原减疾病导致抗原减弱弱l抗体减弱抗体减

5、弱l不规则抗体不规则抗体l年龄年龄l近期进行大量血近期进行大量血浆置换治疗浆置换治疗第九页，共四十二页。红细胞血型检测(1) 假凝集假凝集(nngj)（串钱状凝集（串钱状凝集(nngj)）较多见，本身不是较多见，本身不是(b shi)抗原与抗体的反应。抗原与抗体的反应。原因：原因： A 某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球蛋白的某些肝病、肾病等所致的纤维蛋白原及球蛋白的增高。增高。 B 玻片法实验长，水分蒸发。玻片法实验长，水分蒸发。 C 右旋糖酐、输注某些造影剂等右旋糖酐、输注某些造影剂等处理：用生理盐水洗涤多次，重新配制悬液。处理：用生理盐水洗涤多次，重新配制悬液。第十页，共四十二页。红细

6、胞血型检测(2) 冷凝集（自身冷凝集（自身(zshn)凝集）凝集） 冷凝集素正常人血清中存在，但效价不高，冷凝集素正常人血清中存在，但效价不高，1：16以以下，室温不反应。冷凝集素综合征是免疫球蛋白下，室温不反应。冷凝集素综合征是免疫球蛋白M(IgM)抗体引起的自体免疫性疾病，又叫抗体引起的自体免疫性疾病，又叫“冷血凝集冷血凝集素病素病”或或“冷凝集素病冷凝集素病”。原因：。原因：（1）自身免疫性溶血性贫血）自身免疫性溶血性贫血(pnxu)、病毒性肺炎等、病毒性肺炎等（2）室温过低）室温过低 处理：处理：37生理盐水洗涤，并在生理盐水洗涤，并在37做凝集实验。做凝集实验。第十一页，共四十二页。

7、红细胞血型检测 高效价冷凝集素患者的血型鉴定及配输血的高效价冷凝集素患者的血型鉴定及配输血的处理处理1 临床资料患者，女，56岁，贫血，Hb30g/L，该患皮肤苍白，呈极度贫血貌，需输血治疗，血型鉴定为AB型，但与AB型交叉配血分歧。2 ABO定型重新血型鉴定，正定型为AB型，反定型ABO均凝集，该患者无输血史，考虑可能为冷凝集素所致。 逐将做血型之玻片置于37温箱，10min后观察可见：抗B侧凝集颗粒变小，抗A侧不变；升温至45，抗B侧凝集消失，抗A测不变。取出室温1min后，抗B侧复又出现凝集，初步(chb)定型为A型；用37盐水将患者RBC洗涤3次，做正定型为A型；将洗涤RBC 1份加患

8、者血清内的冷凝集素用自家吸收后的血清做反定型，也为A型。第十二页，共四十二页。红细胞血型检测 3 血清冷凝集效价测定患者不同稀释浓度的血清与洗涤后的O型RBC做玻片凝集试验，室温时测得冷凝集效价为1:2000。4 配血及输血用A型血按常规方法做盐水配血试验，主侧出现凝集次侧因该患RBC自家凝集成颗粒状，不能进行。用37盐水洗涤后的RBC配成0.05L/L的RBC悬液与A型血清做次侧交叉，无凝集及溶血。用前述自家吸收后的血清与A型RBC做次侧交叉，无凝集及溶血。交叉显示可以输血，考虑该患冷凝集素效价太高，要求临床保温输血，室温控制在2530。输A型血200ml，无不良反应。后按同样方法两次继续输

9、A型血800ml 。患者均无不良反应。因本地缺免疫抑制药，患者自行出院往北京，在中日友好医院诊断为冷凝集素引起的免疫性溶血性贫血(pnxu)。经北京红 十字中心血站鉴定冷凝集素为抗I。第十三页，共四十二页。红细胞血型检测5 讨论多数正凡人的血清中有低效价冷凝集素，但效价一般不超过1:16，且在20时凝集即可消失。本例患者由于病理变化，血清中出现高效价冷凝集素抗-I，在37还能与自身RBC发生明显凝集，使血型鉴定出现误判，并影响交叉配血。 碰到此种情况(qngkung)应该留意：血型鉴定时先用37盐水洗涤被检RBC 23次，以消除冷凝集素造成的鉴定错误。交叉配血时，次侧RBC也应该用37盐水洗3

10、次，主侧血清先做自家吸收试验吸收冷凝集素，以防冷凝集素造成的配血困难。冷凝集素效价太高时，提高室温2530下反应是行之有效的方法。第十四页，共四十二页。红细胞血型检测(3)类类B 现象现象(xinxing)：原因：原因： 被肠道杆菌感染的病人（被肠道杆菌感染的病人（O、A型），其红细胞获得一种型），其红细胞获得一种“类类B”抗原抗原（变成（变成B、AB型），但血清中含有正常的抗型），但血清中含有正常的抗B。现象：现象： 凝集较疏松，游离凝集较疏松，游离RBC多，不受温度的影响，唾液中无多，不受温度的影响，唾液中无B型血型物型血型物质，与质，与AB血清不凝集，只与抗血清不凝集，只与抗B反应病情好

11、转，类反应病情好转，类B消失。消失。处理：用唾液定血型处理：用唾液定血型 吸收放散试验（吸附的抗体通过吸收放散试验（吸附的抗体通过(tnggu)加热等从加热等从RBC上释放上释放出来）出来） 第十五页，共四十二页。红细胞血型检测RhD定型(dng xng)及其常见问题1.Rh1.Rh定型定型(dng xng)(dng xng)RhDRhD定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡定型，试管法最经典，多使用微柱凝胶卡2.2.RhD阴性确认阴性确认IgM抗抗-D阴性阴性三个厂家三个厂家IgGIgG抗抗- -D进行进行(jnxng)确认确认l抗人球蛋白法进行确认抗人球蛋白法进行确认l三种三种IgG抗抗-D

12、试剂均为阴性，报试剂均为阴性，报RhD阴性阴性l一种或一种以上一种或一种以上IgG抗抗-D试剂为阳性，报弱试剂为阳性，报弱D第十六页，共四十二页。红细胞血型检测三三. 交叉交叉(jioch)配血（配血（Crossmatching）目的：验证血型、发现不规则抗体目的：验证血型、发现不规则抗体 输血前必做，是安全输血前必做，是安全(nqun)输血的根本保证。输血的根本保证。主侧：检测病人血清中有无破坏供者主侧：检测病人血清中有无破坏供者RBC的的 抗体存在。（抗体存在。（受血者血清受血者血清+供血者供血者RBC）次侧：检测供者血清中有无破坏病人次侧：检测供者血清中有无破坏病人RBC的的 抗体存在。

13、（抗体存在。（供血者血清供血者血清+受血者受血者RBC ）第十七页，共四十二页。红细胞血型检测交叉交叉(jioch)(jioch)配血的主次侧配血的主次侧第十八页，共四十二页。红细胞血型检测接收接收(jishu)申请单和血标本申请单和血标本 核对无误核对无误(ww)（如有错误与医生（如有错误与医生/护士联系）护士联系）进行进行(jnxng)交叉配血交叉配血 相合相合结果输入微机结果输入微机不相合不相合打印发血单打印发血单血液中心血液中心交叉配血工作流程交叉配血工作流程第十九页，共四十二页。红细胞血型检测交叉交叉(jioch)配血的要求配血的要求第二十页，共四十二页。红细胞血型检测试验试验(sh

14、yn)方法方法第二十一页，共四十二页。红细胞血型检测盐水介质盐水介质(jizh)凝集试验凝集试验l 悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。交叉联结形成肉眼可见的凝集。l 主要检测主要检测IgM类抗体（类抗体（ABO系统、抗系统、抗E）。）。l 抗抗A抗抗B特异性特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目(shm)和抗原决定和抗原决定簇位置有关。簇位置有关。 第二十二页，共四十二页。红细胞血型检测盐水介质盐水介质(ji

15、zh)凝集试验凝集试验l 方法：玻片法方法：玻片法- -便于显微镜观察结果便于显微镜观察结果 试管法试管法- -适用于不同温度适用于不同温度(wnd)(wnd)、便于洗涤、便于洗涤l 反应温度：反应温度：4 42222l 临床意义：盐水凝集试验阳性，并在临床意义：盐水凝集试验阳性，并在3737也有活性的抗体有意也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，3737无活无活性者临床意义不大。性者临床意义不大。 第二十三页，共四十二页。红细胞血型检测 试验记录试验记录 4+4+（+）：一个大凝集块，背景透明，无游离）：一个大凝集块，背

16、景透明，无游离细胞细胞(xbo)(xbo) 3+3+（+）：数个大凝集块，背景透明，无游离）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞细胞 2+2+（+）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞细胞 1+1+（+ +）：细小的凝集块，背景浑浊）：细小的凝集块，背景浑浊 W+W+（）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果（）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果 0 0（- -）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态 PHPH：部分溶血：部分溶血 H H：完全溶血：完全溶血第二十四页，共四十二页。红细胞血型检测试管法结果试管法结果(ji g

17、u)判判定定红细胞凝集红细胞凝集(nngj)强度判断标强度判断标准准第二十五页，共四十二页。红细胞血型检测盐水介质凝集盐水介质凝集(nngj)试验试验结果分析：阳性结果分析：阳性- -凝集或溶血凝集或溶血 阴性阴性- -无凝集或溶血无凝集或溶血先观察有无溶血、再观先观察有无溶血、再观察有无凝集察有无凝集注意事项：细胞浓度注意事项：细胞浓度2 25%5%（严格按说明（严格按说明书操作）书操作）、血清与细胞比例、反应温度、弱凝集分析、血清与细胞比例、反应温度、弱凝集分析优点：优点：第二十六页，共四十二页。红细胞血型检测酶介质酶介质(jizh)凝集试验凝集试验 原理：原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，

18、带有负电红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。荷，使红细胞相互排斥。 蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使红细胞之间的距离，使IgGIgG分子能与有相应抗原分子能与有相应抗原的红细胞产生的红细胞产生(chnshng)(chnshng)凝集。凝集。第二十七页，共四十二页。红细胞血型检测酶介质凝集酶介质凝集(nngj)试验试验 常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶。酶。方法：方法：期法期法

19、- -酶液直接加入血清和细胞的混合酶液直接加入血清和细胞的混合物中。物中。 期法期法- -用酶处理细胞再与血清进行反用酶处理细胞再与血清进行反应。应。两种方法比较两种方法比较(bjio)(bjio)：期法期法 操作方便操作方便 期法期法 敏感敏感第二十八页，共四十二页。红细胞血型检测 优点优点： 成本低，快速。成本低，快速。 缺点缺点：（：（1）破坏某些抗原（如）破坏某些抗原（如MN，Duffy） （2）酶批次不同，活性不同，难以标）酶批次不同，活性不同，难以标 准化。准化。 （3）需确定最适孵育时间，处理）需确定最适孵育时间，处理(chl)过度过度 则会降解则会降解IgG。 （4）假阳性高。

20、）假阳性高。 应用应用：现已少用，主要用于：现已少用，主要用于ABO新生儿溶血病新生儿溶血病 检查，检查，Rh抗体筛检。抗体筛检。酶介质酶介质(jizh)法法第二十九页，共四十二页。红细胞血型检测 用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体(kngt)(kngt)。 用不完全抗体测定红细胞血型，如用不完全抗体测定红细胞血型，如RhRh血型。血型。 交叉配血。交叉配血。3抗人球蛋白法抗人球蛋白法：又称Coombs试验。是最早用于检查不完全抗体的方法。主要用于检测IgG、IgA等抗体参与(cny)的抗原-抗体反应，也可测定补体组分C3、C4片段参与的免疫反应第三十页，

21、共四十二页。红细胞血型检测第三十一页，共四十二页。红细胞血型检测抗球蛋白试剂抗球蛋白试剂(shj)不纯不纯假阳性假阳性(yngxng)假阴性假阴性(ynxng)(ynxng)红细胞洗涤已凝集红细胞洗涤已凝集红细胞质量红细胞质量不抗凝标本不抗凝标本漏加试剂漏加试剂离心过度离心过度l红细胞、血清及红细胞、血清及试剂质量试剂质量l洗涤不充分洗涤不充分l操作过程不连续操作过程不连续l离心过度离心过度l红细胞过多或过红细胞过多或过少少l血清浓度过大血清浓度过大l孵育时间和温度孵育时间和温度不当不当l前带现象前带现象间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验盐水保存不当盐水保存不当红细胞直抗阳性红细胞直抗阳性第三十

22、二页，共四十二页。红细胞血型检测 优点优点：经典，特异（金标准），可测补体致：经典，特异（金标准），可测补体致 敏，受冷凝集素影响相对少。敏，受冷凝集素影响相对少。 缺点缺点：烦琐（需两次三洗），孵育时间长，不适用于急：烦琐（需两次三洗），孵育时间长，不适用于急诊和血库存的大批量工作。且易受残留血清蛋白影响。诊和血库存的大批量工作。且易受残留血清蛋白影响。 注意事项注意事项：每次试验要设有阴性和阳性对照；实验器每次试验要设有阴性和阳性对照；实验器材清洁；注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件，材清洁；注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件，严格按照实验方法操作严格按照实验方法操作(cozu)(

23、cozu)；排除自身抗体干扰；排除自身抗体干扰抗人球蛋白法抗人球蛋白法第三十三页，共四十二页。红细胞血型检测低离子低离子(lz)聚凝胺技术聚凝胺技术第三十四页，共四十二页。红细胞血型检测1 1 红细胞间有一定间距红细胞间有一定间距2 2 加入加入(jir)(jir)聚凝胺后，聚凝胺后，可以缩短红细胞之间可以缩短红细胞之间的距离，使其非特异的距离，使其非特异性凝集性凝集3 3 加入枸橼酸钠，可以中加入枸橼酸钠，可以中和聚凝胺和聚凝胺4 4 红细胞的非特异性凝集红细胞的非特异性凝集消失消失聚凝胺聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠第三十五页，共四十二页。红细胞血型检测1 1 红细胞上已有不完全红细胞上已有不完全

24、(wnqun)(wnqun)抗体致敏抗体致敏2 2 加入聚凝胺后，缩短红加入聚凝胺后，缩短红细胞之间的距离，让不细胞之间的距离，让不完全完全(wnqun)(wnqun)抗体可以同抗体可以同时与两个红细胞结合使时与两个红细胞结合使其特异性凝集其特异性凝集3 3 加入加入(jir)(jir)枸橼酸钠中和枸橼酸钠中和聚凝胺聚凝胺4 4 由于不完全抗体的结合，由于不完全抗体的结合，红细胞的特异性凝集不消红细胞的特异性凝集不消失失聚凝胺聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠不完全抗体不完全抗体第三十六页，共四十二页。红细胞血型检测优点优点：快速，方便：快速，方便(fngbin)，适于急诊，试剂易保存，适于急诊，试剂易保存， 可测可测IgG、 IgM。缺点缺点：易受冷凝集素和肝素等多价阴离子的干扰，且作：易受冷凝集素和肝素等多价阴离子的干扰，且作效价测定时易造成溶血；不能检测补体致敏。效价测定时易造成溶血；不能检测补体致敏。对无对无唾液酸的红细胞无作用（多凝集红细胞）。唾液酸的红细胞无作用（多凝集红细胞）。注意事项注意事项：抗原抗体比例适当；：抗原抗体比例适当；实验步骤过程中聚凝实验步骤过程中聚凝胺应去除干净胺应去除干净。 聚凝胺法聚凝胺法第三十七页，共四十二页。红细胞血型检测微柱凝胶试验微柱凝胶试验(sh