金属鳌离子使用说明

1、金属鳌合填料镍柱料说明书固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。全部容量：24-30um的含有zn的干胶柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖柱料大小：45-165um平均微粒：90um直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米最大压强：0.

2、3MPaPH变化：长期3-13       短期2-14化学稳定：通用含水缓冲液0.01M盐酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。处理金属螯和柱料：1 平衡所有用到的材料于室温。2 搅拌金属螯和柱料3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连

3、接上泵。6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱苯甲脒琼脂糖凝胶6B1 填料的准备苯甲脒琼脂糖凝胶6B可用20%的乙醇预胀。在包装前，将浆状混合物中的乙醇慢慢倒出，然后再倒入结合缓冲液至占总体积的25%（固定介质占75%）。结合缓冲液中不能够含有明显增加粘性的试剂。在包装完成以后，柱子可以使用含有较少的粘性试剂的缓冲液平衡。2琼脂糖凝胶6B填料的包装 1平衡所有的物质至色谱将被使用的温度 2填料的脱色 3用缓冲液冲洗柱子的每部分从而排尽里面的空气。确保整个系统中没有空气。用几厘米的缓冲液封闭柱子的排出口。 4连续地

4、将填料浆注入柱中。在装料时使用玻璃棒引流可以最少地减少气泡的进入。 5然后立即用缓冲液填满柱子的剩余部分，标记下柱子的顶段，并连接柱子和蠕动泵。 6打开柱子的出口，设置合适的（蠕动泵）转速。在随后的层析操作中，流速最小应为该速度的133%。但包装中的最大流速是typically employed （参考表1） 备注：如果在最大线性流速时包装，那么在随后的层析操作中不能超过最大流速的75%。 7在达到恒定柱床高度时，维持3倍柱床体积的流速。如果想详细了解柱子的包装过程，可以参考我们的色谱分析手册，原则和方法（18-1022-29），可以从3连接器的使用连接器应该符合以下要求： 1在填料按照上述方

5、法包装之后，关闭柱子的出口和从柱子上移动上端。小心地用缓冲液将柱子的剩余部分填满，在上端形成一个新月面。 2将连接器按照一定角度插进柱子中，并确保没有带进空气。 3使这一阶段处于管状连接状态，柱子和泵、柱子和样品装置阀之间不能够有气泡存在。 4慢慢拧开活塞，以便于空气排出柱子系统，洗脱液慢慢进入毛习管。柱子入口内侧的阀门应该处于正确的方向，从而确保在此操作中空气能够顺利的排出。 5在填料的表面将连接器固定一个合适的位置，打开柱子的出口和开始洗脱。用过柱洗脱液，以包装流速洗脱柱子，直到柱床平衡。必要时重置连接器。此时柱子已经平衡，可以使用。4蛋白结合一个合适的结合缓冲液是由50mMTris-HC

6、l（pH8.0）和0.5M NaCl组成。尽管理想的结合温度是4°C，但是室温条件下也可以获得良好的结果。在上样之后，用结合缓冲液冲洗填料直到基线稳定为止。5蛋白洗脱结合物被特异或者非特异性洗脱。为了特异性洗脱结合物，可以使用类似于P-氨基苯甲脒的竞争剂。竞争性洗脱缓冲液：20mM P-氨基苯甲脒/结合缓冲液 非特异性洗脱结合物的方法：1. 根据结合为点带点基团的离子化程度不同而改变离子强度。洗脱液通常在NaCl浓度为1M左右时能够竞争性结合。在梯级梯度和连续梯度中都可以使用。2. 根据结合为点带点基团的离子化程度不同而改变pH值。在梯级梯度和连续梯度中都可以使用。3. 调节洗脱缓冲

7、液的极性，增加二氧杂环乙烷到10%或者乙二醇到50%可以用于结合物的洗脱。4. 使用变性剂，比如尿素或者盐酸胍，都可以用于结合物的洗脱。6 再生 依据样品的特性，选用高pH缓冲液（0.1M Tris-HCl+.05MNaCl，pH8.5）和低pH缓冲液（0.1M NaAc+.05MNaCl，pH4.5），通过用2-3倍柱床体积的缓冲液洗脱，苯甲脒琼脂糖6B就可以重复使用。然后用3-5倍柱床体积的结合缓冲液重平衡，重复三次洗脱。在色谱中使用过的去垢剂或者变性剂，也可以被用于冲洗缓冲液。赖氨酸琼脂糖凝胶4B说明书赖氨酸琼脂糖凝胶4B，是通过CNBr方法将L-Lys固定在琼脂糖凝胶4B上。L-Lys

8、通过-氨基相互连接，空下的-氨基和-羧基在色谱层析中就可以与样品物资相互结合。通过生物学特异性或L-Lys的电荷依赖性，从而用来纯化分子。赖氨酸琼脂糖凝胶4B含有一群特异性吸附物资，可以用来分离血纤维蛋白溶酶原和血纤维蛋白溶酶原活性物资，分离rRNA和纯化双链DNA。虽然其分离纯化的具体机制还没有完全明白，但是究其用途，分离可能运用其静电性和立体异构化效应。表一配体密度4-7umol Lys/ml干料结合能力0.6mg人血纤维蛋白溶酶原/ ml干料 0.6-0.7mg rRNA/ ml干料柱床结构4琼脂糖平均颗粒大小90um一、填料的准备赖氨酸琼脂糖凝胶4B目前是压缩冻干成添加物。在中性pH中

9、，这些添加物必须被洗掉。称取所需量的填料冻干粉（1g干粉可形成4ml最终调料浆）并悬浮在蒸馏水中。调料将会立刻胀大，此时应在高压过的烧杯中用蒸馏水冲洗15分钟（孔隙率 G3），用大约200ml蒸馏水/g冻干粉，添加到整数。将冻干粉制成浆，结合缓冲液占75%，填料占25%？。结合缓冲液中不能够含有明显增加粘性的试剂。在包装完成以后，柱子可以使用含有较少的粘性试剂的缓冲液平衡。二、琼脂糖凝胶4B的包装（略）三、连接器的使用连接器应该符合以下要求： 1在填料按照上述方法包装之后，关闭柱子的出口和从柱子上移动上端。小心地用缓冲液将柱子的剩余部分填满，在上端形成一个新月面。 2将连接器按照一定角度插进柱

10、子中，并确保没有带进空气。 3使这一阶段处于管状连接状态，柱子和泵、柱子和样品装置阀之间不能够有气泡存在。 4慢慢拧开活塞，以便于空气排出柱子系统，洗脱液慢慢进入毛习管。柱子入口内侧的阀门应该处于正确的方向，从而确保在此操作中空气能够顺利的排出。 5在填料的表面将连接器固定一个合适的位置，打开柱子的出口和开始洗脱。用过柱洗脱液，以包装流速洗脱柱子，直到柱床平衡。必要时重置连接器。此时柱子已经平衡，可以使用。四、蛋白结合与赖氨酸琼脂糖凝胶4B结合的蛋白应该处于生理pH下状态。推荐的结合缓冲液是：50mM，pH7.5的磷酸盐缓冲液。对于血纤维蛋白溶酶原的纯化，推荐以下操作方法：1用2-3倍柱床体积

11、的推荐结合缓冲液平衡填料上样。最多使用10倍柱床体积的血清。上样后，用结合缓冲液冲洗填料，直到基线稳定为止。向结合缓冲液中添加NaCl至终浓度为0.5M和能够宽松地洗脱，或成为非特异性结合物。用0.2M -氨基己酸的蒸馏水溶液洗脱血纤维蛋白溶酶原。用至少倍柱床体积的结合缓冲液重平衡填料。推荐使用pH7.5磷酸盐缓冲液（0.2M的-氨基己酸/50ml）, 并且每五次循环含有1M NaCl-氨基己酸可以使用交联葡聚糖G-25从血纤维蛋白溶酶原去除。五、蛋白洗脱赖氨酸琼脂糖凝胶4B是一个含有亲和多种生物分子的特异吸附剂。一些蛋白分子间相互作用的生物学特异性主要取决于它们配体的特异性结构，而其他分子则

12、通过静电作用这种非特异方式结合。l 特异性结合生物分子，像血纤维蛋白溶酶原，可以用竞争性洗脱液进行洗脱。使用含有配基或者目的分子的竞争性试剂。例如：含有-氨基己酸的缓冲液，能够洗脱特异性结合物资。血纤维蛋白溶酶原通常使用0.2M-氨基己酸。在梯级梯度和连续梯度中都可以使用。l 非特异性结合生物分子能够通过逐步增加离子强度的方法进行洗脱。洗脱液通常在NaCl浓度为M左右时就能够完全洗脱。在梯级梯度和连续梯度中都可以使用。l 也可以使用温度梯度法进行洗脱。例如rRNA和赖氨酸琼脂糖凝胶4B亲和力受温度的影响，随着温度的降低，rRNA分离就需要一个较高的盐浓度。六、再生依据样品的特性，选用高pH缓冲液（0.1M Tris-HCl0.5MNaCl，pH8.5）和低pH缓冲液（0.1M NaAc0.5MNaCl，pH4.5），通过用2-3倍柱床体积的缓冲液重复洗脱，赖氨酸琼脂糖凝胶4B就可以重复使用。然后用至少5倍柱床体积的结合缓冲液重平衡，至少重复三次。在色谱中使用过的去垢剂或者变性剂，也可以被用于冲洗缓冲液。在血纤维蛋白溶酶原纯化之后，填料再生的方法，用几倍柱床体积的pH7.5 50mM磷酸