葛花对酒精性肝损伤保护作用的研究

1、葛花对酒精性肝损伤保护作用的研究        【摘要】  目的研究葛花对急性酒精性肝损伤的作用机理。方法取昆明种小鼠40只，随机分成两组。对照组生理盐水0.20 ml/10g灌胃，给药组葛花水提液0.20 ml/10 g灌胃，30 min后均灌酒0.24 ml/10 g，90，150 min后每组各取小鼠10只眼眶采血测定血中乙醇浓度；取雄性昆明种小鼠30只，随机分成空白对照组、模型对照组、给药组，前二组生理盐水0.20 ml/10 g灌胃，后一组葛花水提液0.20 ml/10 g灌胃，30 min后前

2、一组灌生理盐水0.24 ml/10 g，后两组灌酒0.24 ml/10 g，如此反复，连续9 d，第9天灌胃30 min后处死小鼠，用1.15%预冷KCl制作肝匀浆液，测定肝中丙二醛（MDA）的含量、谷胱甘肽转移酶（GST）的活性。结果给药组90，150 min血中乙醇浓度均显著低于对照组（P<0.05）。给药组MDA值较模型对照组明显降低（P<0.01）、GST值较模型对照组明显升高（P<0.05）。结论葛花水提液可通过促进乙醇代谢，减少MDA，增加GST而护肝。 【关键词】  酒精性肝损伤葛花 丙二醛 谷胱甘肽转移酶急性酒精中毒又称醉酒，是指一次饮酒过量而导致的

3、中枢神经系统、消化系统、呼吸系统、心脑血管系统等的损伤过程。当前酒滥用(alcohol abuse)和酒依赖性(Alcoholism)已成当今世界范围内最严重的社会和公共卫生问题之一1。传统医学对酒早有认识，李时珍在本草纲目中指出“酒，天之灵禄也，少饮则和血、行气、壮神、御寒、消愁，痛饮则伤神、耗血、损胃、亡精、生痰、动火”。医学认为脂质过氧化反应对酒精中毒所致肝损伤的形成和起着十分重要的作用2。本次实验观察了葛花水提液对急性酒精中毒所致肝损伤的保护作用并对葛花水提液护肝的作用机理作了初步研究。1  材料与方法1.1  药品与试剂葛花水提液(本实验室自配)；无水乙醇(天津市

4、化学试剂有限公司)，批号：20061118，密度0.79；仲丁醇(天津化学试剂有限公司)，批号：20051129，密度0.81；肝素钠注射液(常州千红制药有限公司)，批号：20060131。1.2  动物及分组取小鼠40只，体质量1822 g，实验前12 h禁食不禁水随机分成两组，对照组和给药组，每组20只，分别灌服生理盐水0.2 ml/10 g，葛花水提液0.2 ml/10 g，30 min后灌服56度白酒二倍稀释液0.24 ml/10 g，于酒后90，150 min每组各取10只小鼠经眼眶采血0.5 ml，放入EP管中(肝素抗凝)备测。取雄性昆明种小鼠30只，随机分成3组。空白对

5、照组生理盐水0.20 ml/10 g 灌胃，30 min后给生理盐水0.24 ml/10 g；模型对照组生理盐水0.20 ml/10 g 灌胃，30 min后给酒0.24 ml/10 g；给药组葛花水提液0.20 ml/10 g灌胃，30 min后给酒0.24 ml/10 g，连续9 d，第9天给酒30 min后处死小鼠，用1.15%预冷KCl制作肝匀浆液，测定丙二醛（MDA）的含量、谷胱甘肽转移酶（GST）的活性。1.3  仪器上海天美GC7890型检测器，电恒温加热器，SHZ88式水浴恒温振荡器，UV-1601双光束紫外分光光度计，低温高速离心机，85超低温冰箱，DY891型电动

6、玻璃匀浆机，250 l气密型注射器。1.4  乙醇浓度的测定取仲丁醇标液1 ml和血样0.25 ml放入顶空瓶中，用内衬聚四氟乙烯膜的硅胶垫密封，置电热恒温器中60加热30 min，然后用250 l气密型注射器吸100 l进样，用气相色谱法测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面积比(Ai/As)，根据公式Ci = 3.686×(Ai/As)×0.81血中乙醇浓度3。1.5  MDA、GST含量的测定用双光束紫外分光光度计用TBA比色法4测定MDA，Habig介绍的方法5，测定CDNB与GSH之间的非酶结合反应（即非酶管OD340）。  

7、  计算方法    MDA含量 =（OD535 nmOD520 nm）/（e×D）=     OD×10-2 /（1.56×D）（mmol/g liver）   D：每克肝重   e：1.56×105 M-1cm-1     肝GST活性计算方法    GST(mmol·min-1·g-1) =    （酶管OD340-非酶管OD340）

8、×1000×肝蛋白量（mg）    e：即克分子消光系数，为9.6 cm-1·mmol·g-1。1.6  统计学处理结果均用t检验统计。1         2  结果2.1  血中乙醇浓度的变化结果见表1。由表1可见，给药组90，150 min乙醇血药浓度均小于对照组（P0.01）。表1  复方解酒药对小鼠乙醇浓度变化的影响（略）2.2  小鼠肝中MDA、GST的变化结果见表2。表2 

9、葛花水提液对肝MDA含量和GST活性的影响（略）    与空白对照组比较，模型对照组MDA的量明显增加（P<0.01）、GST活性显著降低（P<0.01），与模型对照组比较，给药组MDA含量显著降低（P<0.01），GST活性升高（P<0.05）。3  讨论    生理状态下乙醇在乙醇脱氢酶作用下产生乙醛，乙醛可继续被氧化成乙酸。乙醇转变成乙醛及乙醛转变成乙酸盐或乙酰辅酶A的过程中都可产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)，NADH穿梭于线粒体，NADH与NAD的比值增高，甚至可高达正常的23倍

10、，使肝内的氧化还原状态发生改变。长期或大量饮酒可引起滑面内质网增生以及诱发CYP2E1活性增高，从而导致肝细胞内乙醛浓度的显著增高，这可能是引起酒精性肝损伤的重要原因6。CYP2E1 还能引起酒精性肝损伤的脂质过氧化作用7，这也是引起酒精性肝损伤的主要原因。由此可见促进乙醇的代谢，减少乙醇进入血液循环是避免肝损伤的首要环节。本实验结果表明，给药组给药后90和150 min小鼠体内乙醇浓度均低于对照组,说明葛花水提液可增强乙醇的代谢，减少乙醇进入血液循环，能有效防治酒精性肝损伤。乙醇的代谢物乙醛能显著损害肝脏利用氧的能力，并加速细胞内的清道夫分子还原型谷胱甘肽(GSH)耗竭，加剧自由基介导的毒性

11、作用和脂质过氧化作用。体内依赖于谷胱甘肽（GSH）的抗氧化系统在抵抗乙醇所致肝损伤中起关键的防护作用8 。本实验结果表明，模型组GST活性较空白对照组明显降低，MDA含量明显升高，证明乙醇削弱了谷胱甘肽（GSH）抗氧化系统，肝内脂质过氧化反应增强。MDA是脂质过氧化的主要降解产物，MDA含量是反映肝细胞损伤的程度及后肝细胞的修复情况的重要指标，因此减少MDA的生成，抑制脂质过氧化是避免肝损伤的另一个重要环节。本次实验结果显示给药后肝中MDA的含量显著降低、GST活性明显升高。由此表明葛花水提液能够抑制脂质过氧化反应，减少MDA的含量，提高GST活性，增强谷胱甘肽（GSH）的抗氧化系统的抗氧化作

12、用，减轻急性酒精性肝损伤。综上所述葛花水提液促进乙醇的体内代谢，减少MDA的生成，增强谷胱甘肽（GSH）的抗氧化系统的抗氧化作用是其保护酒精性肝损伤的重要机理。【】  1张秀明,李健斋,魏明竟,等. 临床生化检验学M. 北京:人民军医出版社,2001：1.2苗颜妮,钟赣生.葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究J.科技导报,2008,26 (15)：59.3雷红伟,高铁祥,田先翔，等. 顶空气相色谱测定小鼠血液中乙醇的浓度J. 湖北中医学院学报,2007,9(2):37. 4吴庚香,王 斐,文 静，等.人参皂甙对阿魏酸钠急性酒精中毒小鼠保护作用的影响J.医学新知杂志,2008,18 (6)：346.5张 春,汪 晖,郭 喻. 阿魏酸钠对乙醇损伤性大鼠肝切片的保护作用及机制J.武汉大学学报（医学版）,2005,26（4）: 477.6梁赅,詹 莉,汪 晖,等.人参和枳椇子对小鼠乙醇急性中毒保护作用及其机制研究J. 医学新知杂志,2006,16 (2)：82.7Oneta CM, Lieber CS, Li JJ, et al