白酒中甲醇超标的快速检测方法 - 国家质检总局

1、假劣葡萄酒现场快速检测及实验室检测方法（国家食品质量监督检验中心）一、现场快速检测方法1 范围该方法是一种识别假劣葡萄酒的快速目视比色方法,适用于葡萄酒样品中多酚含量的检测,可对劣质葡萄酒进行现场识别。该方法的最低检测限为0.1g/L。2 原理正常发酵生产的葡萄酒中富含多酚类化合物。试样中的多酚类化合物在碱性条件下下，与Folin-Ciocalteu(磷钨酸磷钼酸)试剂形成蓝紫色物质，颜色深浅与多酚类化合物含量有关，由此可对葡萄酒中多酚类化合物进行半定量检测，多酚类化合物含量少的葡萄酒为劣质葡萄酒。3 试剂和溶液3.1 12乙醇溶液（v/v） 取12.6mL95（v/v）的分析纯乙醇，定容至1

2、00 mL。3.2 4.25%(w/v)碳酸钠溶液 称取42.5g无水碳酸钠（分析纯）,用水溶解并定容至1000mL，有效期6个月；3.3 Folin-Ciocalteu(磷钨酸磷钼酸)试剂 Sigma试剂，低温避光保存；3.4 配制400mg/L没食子酸标准溶液 称取0.10g没食子酸，用12（v/v）乙醇溶液溶解并定容至250 mL，移入棕色瓶中，避光，低温保存，有效期为6个月；4 仪器设备4.1 精度0.01g的天平1台；4.2 25mL容量瓶数个；4.3 移液管数支；4.4 吸耳球一个。5 分析步骤6 结果判定6.1 如果葡萄酒样品显色浅于400mg/L没食子酸标准溶液，则该样品可能为

3、劣质葡萄酒；6.2 现场初步判定为劣质葡萄酒的样品还需抽样送法定质检机构检验确认。7 注意事项7.1 酒精度对显色影响较大，故要严格控制空白和没食子酸标准溶液的酒精度含量；7.2 溶液温度对显色有影响，应注意保持样品和没食子酸标准溶液处于相同温度状态进行颜色比较。二、实验室检测方法1 原理顺、反白藜芦醇及顺、反白藜芦醇苷作为天然酿造的红葡萄酒中的特有成分，四种异构体总是或多或少地存在于葡萄酒中，而由色素、酒精、香精等原料人工兑制而成的“红葡萄酒”则完全不含这四种物质，因此通过对葡萄酒中四种白藜芦醇异构体的同时检测可以对天然酿造葡萄酒和人工配制而成的假劣葡萄酒加以识别。本方法采用固相萃取对葡萄酒

4、样品进行前处理，固相萃取是一种吸附剂萃取，当样品通过填充吸附剂的固相萃取柱后，目标组分和杂质被吸附在萃取柱上，用选择性溶剂去除杂质后，再用少量溶剂将待测组分洗脱出来，从而达到目标组分与干扰组分分离的目的。再利用样品中各种组分在液相色谱柱的液固两项中分配系数的不同，将样品中的顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷、反式白藜芦醇苷与其他组分分离。利用紫外检测器检测，外标法定量。2 试剂2.1 乙腈：色谱纯2.2 三乙胺：色谱纯2.3 乙酸乙酯：色谱纯2.4 无水乙醇：色谱纯2.5 四种白藜芦醇及其异构体标准溶液的配制：a. 反式系列标准溶液的配制：取反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷标准样品，以乙酸

5、乙酯作稀释溶剂，分别制备100、60、20、5、1 mg/L的系列标准溶液。b. 含有四种异构体的系列标准溶液的配制：取以上反式系列中的两标准溶液各适量，分别置于干燥、洁净的透明塑料离心管中，将白藜芦醇系列溶液置365 nm紫外光下照射2h，白藜芦醇苷系列溶液置365 nm紫外光下照射1h后分别获得含各自的顺式标准溶液，分别取顺式白藜芦醇和顺式白藜芦醇苷标准溶液，按1:1比例混合制成含四种异构体的系列标准溶液。3 仪器、设备3.1 C18固相萃取柱（500mg,6mL）。3.2 高效液相色谱仪（配有双泵、在线脱气及数据处理装置）。3.3 双波长紫外检测器。3.4 色谱柱：Hypersil C1

6、8色谱柱（4.6mm250mm,5mm）。4 分析步骤4.1 试样处理 C18固相萃取柱的活化在使用前依次用3mL乙酸乙酯活化一次、3mL95%乙醇活化一次、5mL12%乙醇活化二次。 样品过柱准确吸取葡萄酒样品5.00mL,以小于等于0.4mL/min的速度通过活化好的C18固相柱。样品过柱后淋洗用去离子水淋洗五次，5mL/次；再用pH=8.0（用1mol/L K2HPO4: 1mol/L KH2PO4=94:6的磷酸盐溶液调节）的12%乙醇溶液淋洗五次，5mL/次。 目标产物洗脱抽真空除去柱中水分后，以5mL乙酸乙酯溶液将吸附于固相柱内的白藜芦醇及其糖苷异构体洗脱，将洗脱液用旋转蒸发仪蒸发

7、浓缩至体积小于等于1.0 mL后，用乙酸乙酯定容至1.0 mL，即为测试样品液。4.2 测定流动相：A液为含0.1%三乙胺、7.5%乙腈的水溶液，B液为100%乙腈。线性梯度洗脱：20min内由100%A液变为100%B液。流速：0.6mL/min。检测波长：306nm和288nm双波长检测。进样量：10mL。 试样测定准确吸取处理后的葡萄酒样品10L,在上述液相色谱条件下进样，以保留时间定性，以外标法定量。根据标准曲线分别求得葡萄酒样品中四种异构体的含量（mg/L）。a. 取反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷系列标准溶液，按色谱条件测定，以峰面积对组分相应的质量浓度 (mgL)进行线性回归分析，得到反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷的标准工作曲线。 b. 取含四种异构体的系列标准溶液，按色谱条件测定，由反式异构体浓度的减少求出相应溶液中顺式异构体的浓度，以顺式异构体的峰面积，对相应的质量浓度(mgL)进行线性回归分析，得到顺式白藜芦醇和顺式白藜芦醇苷的标准工作曲线。5 结果计算 X试样中白藜芦醇的含量，单位为毫克每升（mg/L）。C从标准曲线上查得的白藜芦醇的浓度，单位为毫克每升（mg/L）。V1定容后测试样品液的体积，单位为毫升（mL）,本实验为1.