食品中防腐剂苯甲酸钠和山梨酸钾的测定

1、实验9.3食品中防腐剂苯甲酸（钠和山梨酸（钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。学会制备聚酰胺薄层板。二、仪器吹风机层析缸玻璃板10X8cm玻璃板50*0cm微量注射器10仙L喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉200目乙醴可溶淀粉无水硫酸钠盐酸溶液6mol?L-14%氯化钠酸性溶液于4%氯化风俗溶液中加入少量mol?L-1盐酸溶液展开剂：（1正丁醇:氨水:无水乙醇=7:1:2（2异丙醇:氨水:无水乙醇=7:1:2显色剂:0.04%澳甲酚紫的50%乙醇溶液用0.1mol?L-1氢氧化钠调至PH=8苯甲酸标准溶液：精密称取苯甲酸0.2000g用少量乙醇溶解后移入100mL

2、容量瓶中，并用乙醇稀释至刻度摇匀，此溶液每亳升相当于2mg苯甲酸。山梨酸标准溶液：精密称取山梨酸0.2000g用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中，并用乙醇稀释至刻度摇匀，此溶液每亳升相当于2mg山梨酸。试样酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取一试样溶液的制备称取2.5g混合均匀的试样，置于25mL带塞量筒中，力口0.5mL,6mol?L-1盐酸酸化，用乙醴提取两次（15mL、10mL每次振摇1min,将上层乙醴提取液吸入另一25mL带塞量筒中，合并乙醴提取液。用3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次，静置15min，乙醴层通过无水硫酸钠脱水后过滤于25mL容量瓶中。加乙醴稀释至刻度，摇匀

3、。吸取10.00mL乙醴提取液分两次置于10mL离心管中，在约40c水浴上除去乙醴,加入0.1mL乙醇溶解残渣，制成试样测定液备用。2、聚酰胺粉板的制备称取1.6g聚酰胺粉加4g可溶性淀粉，力口15mL水，研磨35min,使其均匀即可涂10M8cm厚度0.3mm的薄层板两块。涂好的薄层板置于水平大玻璃板上，于室温干燥后，于80C干燥1h取出，置于干燥器中保存。3、点样在薄层板下端2cm的基线处，用10ul微量注射器，分别点1仙L、2仙L试样溶液和1仙L、2小邛甲酸、山梨酸标准溶液。4、展开与显色层析缸内倒入适量展开剂，在层析缸周围贴上滤纸彳寺滤纸湿润后，展开剂液层厚约0.50.7cm让展开剂在

4、层析缸内饱和10min，将点样后的薄层板放入层析缸内，使薄层下端浸入展开剂中约0.5cm,迅速盖紧缸盖，进行展开，如图812。待展开剂前沿上展至10cm时，取出吹干，喷显色齐1J,斑点呈黄色，背景为蓝色。5、定性和半定量测定把试样斑点与标准斑点比较，以比移值（Rf值定性，在此实验条件下苯甲酸和山梨酸的比移值分别为0.73、0.82。比较试样斑点与标准斑点面积大小及颜色深浅进行含量计算。根据测定结果按下式计算试样中苯甲酸、山梨酸含量。计算：式中:X试样中苯甲酸（山梨酸的含量,g?kg-1;A测定用试样溶液中苯甲酸（山梨酸的质量，mg;m试样的质量，g;V1溶解苯甲酸（山梨酸时，加乙醇体积，mL;

5、V2测定时点样的体积，mL;25试样乙醴提取液的总体积，mL;10测定时吸取乙醴提取液的体积，mL0五、说明和注意事项1、此方法用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸含量的测定。苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是食品常用防腐剂，主要用于酸性食品的防腐。国家规定在不同食品中其最大使用量为0.21.0g?kg10如碳酸饮料中苯甲酸或山梨酸的最大使用量为0.2g?kg-10酱油、食醋中苯甲酸钠或山梨酸钠最大使用量为1.0g?kg-10因此，测定食品防腐剂的含量以控制其用量，对保证食品质量，保障人民健康具有十分重要的意义。2、本方法测定原理为：试样经酸化，使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸、山梨酸，再用乙醴提取，乙醴提取液经氯化钠酸性溶液洗涤，并用无水硫酸钠脱水后，将乙醴蒸出，残渣用乙醇溶解后，点样于聚酰胺薄层板上，经展开，显色后,根据比移值与标准比较定性，根据斑点面积和颜色深浅进行半定量测定。3、试样中如含有二氧化碳、酒精时应加热除去，富含脂肪和蛋白质的试样应除去脂肪和蛋白质，以防用乙醴萃取时发生乳化。4、本方法灵敏度高，但操作繁琐，重现性差，现今多用气相色谱法测定，试样经酸化后，用乙醴提取苯甲酸、山梨酸后，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离和测定，与标准系列比较定量。也可采用高效液相色谱法测定，利用被分离组分在固定相和移动相中分配系数的不同，使被测组分分离