血、尿液淀粉酶AMS两点法测定-检验科生化室作业书

1、【实用】检验科SOP文件血、尿液淀粉的AMS两点法测定1 .实验原理VitrosAMS试剂是一种干燥，多涂层的，在聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。将一滴10ul的患者样品滴于干片上，样品就被分布层均匀地分布 并渗透到下面的试剂层。分布层含有反应所需的染色淀粉底物 （与支 链淀粉共价化合），样品中的淀粉酶催化该染色淀粉水解成更小的有 色糖。随后这些有色糖进入下面的试剂层。分别在孵育2.3分钟和5分钟时用反射仪测定试剂层中有色糖的反射强度，两次读数间的差值与样品中的淀粉酶活性成正比。测定方式：两点法波长：540nm测试时间和温度：37c约5分钟反应过程：淀粉酶染色支链淀粉> 有色糖2

2、标本：1.1 病人准备：无特殊。1.2 样品类型：血清；肝素锂/钠抗凝血浆。定时收集的，稀释后的 尿样。1.3 标本采集与处理：1.3.1 血清和血浆样品药海无涯学无止境专注医学领域【实用】检验科SOP文件血浆中淀粉酶活性约比血清中高 20U/L。不能使用钙螯合物作抗凝剂，如草酸，枸椽酸和 EDTA样品采集后4小时内要离心标本，吸 出血清。处理样品时要将其当成生物污染品。1.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液，特别要注意的是：含有冰醋酸，浓盐酸或者防腐剂中有乙二羟化四甲镂和氧化汞的样品不能测淀粉酶。尿液样品在测试前要冷藏在28C。处理样品时要将其当成生物污染品。3 .标本的存放：血清、血浆、

3、尿液室温下最多 7天；48c冷藏最 多1个月；样品不可冷冻保存。4 .标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。5 .标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置 时间过长。6 .试验材料：6.1 测试AMS所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit3; Vitros特 制质控液；Vitros7%BSAffi释液。强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称， 试 剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份是染色支链淀粉。其它成份有染色剂，粘合剂，缓冲剂， 表面活性剂，稳定剂和媒染剂。干片标记：试剂盒外包装上标明了测 试项目名称，试

4、剂标签代码，有效期限和储藏温度。6.1.2 试剂准备从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态1828c。因此从药海无涯 学无止境 专注医学领域冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。6.1.3 试剂稳定性与贮存未开封的干片盒：存储在-18C或低于该范围。在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过 2周， 否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒 留在储藏器中。出现以下情

5、形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小 时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确，VitrosAMS干片可保质到包装盒上标明的有效期限。参见VITROS25阡化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打 干片盒；不要让尖利物刺入内包装。6.2 校准品：用Vitros化学定标物Kit3。血清、血浆、尿液都用相 同的定标液，不过各自的 SAVs值不同。有关标准液的配制，使用及 保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS25阡化学分析仪校 准品和质控品.SOP文件。6.3

6、质控品：使用Vitros特制的质控物品；若使用其它的一些质控 物品，当与别的AMS测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/ 血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它 化学添加剂的质控物品；猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低， 还会药海无涯 学无止境 专注医学领域【实用】检验科SOP文件因测试方法不同而变化；酶的活性可能会由于酶源，稀释温度和复溶 活化时间不同而发生变化；乙烯乙二醇作稳定剂质控物品不能使用。有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS25阡化学 分析仪校准品和质控品.SO找件。7 .仪器美国强生厂家VITROS25Qir自动干式生化分析仪。具体测试程

7、序请 参阅操作手册的介绍。8 .操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器 5分后 自动打印结果。具体测试程序请参阅 VITROS25臊作手册.SOR具体 定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。何时进行定标：一一在维 护和保养时更换了仪器的重要部件。一一质控结果持续超出线性范围 内时，详情参阅操作手册。一一管理条例上指定的时间，在美国，CLIA 要求至少每6个月定标一次。9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将 质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运 行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性； 其它详情参阅操作手 册

8、质控章节的有关内容。有关质控操作的常规性条例可参照国际质控 检测（IQCT1的内容。在每一批标本中都应把质控血清作为未知标本 进行分析，以2s为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是 否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程 .SOPt件。11 .计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可 报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以 U/L报告。12 .参考值范围国际单位（U/L）血清30-11013 比血清高约20尿液（随机尿样）32-64114 以下儿童比成人低。此参考范围是测试98位健康成人，然后取靶值附近 95%的结果计 算所得。参考值因性别、年龄、饮食和地域

9、的不同而有所差别。根据 好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：淀粉酶是淀粉分解和消化酶，由胰腺和唾液腺产生。 急性胰腺炎，胰腺溃疡或假（性）囊肿，胰腺创伤，淀粉样变，胆总 管阻塞和胸部手术后，会使淀粉酶增加。流行性腮腺炎和肾功能不全 也可能导致淀粉酶活性升高。14 .操作性能14.1 线性范围：血清/尿液：30-1200U/L。14.2精密度：在Vitros250生化仪上用质控液来测精密度。结果反 映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质 控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。日间精密度血清x(U/L)s(U/L)CV(%)室间

10、精密度n=20 天x(U/L)s(U/L)CV(%)样 品1n=79822.3样品1822.73.3样 品4504.6样品24508.11.82n=78日间精密度尿液x(U/L)s(U/L)CV(%)室间精密度n=22 天x(U/L)s(U/L)CV(%)样 品1n=88500.7样品1501.12.2样 品2n=841211.6样品21211.61.3*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对 测试结果进行统计计算。*室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。1.3 3方法学比较：用Vitros700仪器和对硝基苯酚法参考方法分别 测试相同血清样

11、品，对比结果显示Vitros方法的准确度良好。用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果 显示Vitros250方法的准确度良好，血清：Y=0.99X+5.4（r=1.0, N=85, 检测范围 20-1039U/L）;尿液：Y=1.01X+7.6（r=0.998, N=39,检测范 围 25-1103U/L）。1.4 4灵敏度：本试剂的检测下限为血清、尿液均为30U/L。1.5 5特异性：经测试，以下物质对 VitrosAMS干片法均无干扰（偏 差9U/L）。阿司匹林30mg/Dl、维生素C3mg/d、胆红素20mg/dL、胆 固醇500mg/dL、葡

12、聚糖1000mg/dL、乙醇300mg/dL、5-氟尿喀咤 125mg/L 等等。1.6 6病人结果可报告范围：血清、尿液：30-1200U/L。15 .超出范围结果处理：本法线性上限为血清、尿液为1200U/L。如果样品中AMS浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀 释：血清和血浆：如果是脂血标本或淀粉酶的活性超出系统的测试线 性范围，可按下列步骤进行稀释：淀粉酶活性低的脂血标本用Vitros特制稀释液或生理盐水配制的2%牛血清白蛋白（PH7.4）进行稀释。 说明：用Vitros特制稀释?时先按1:1的比例稀释样品，结果乘以 2。重新测试。必要时，校正稀释液的淀粉酶活性。测试结果乘以

13、稀 释倍数就得到原始样品中淀粉酶的活性。尿液：如果样品中淀粉酶的活性超出系统的线性范围，请按下列步骤进行稀释：用生理盐水稀释 样品。重新测试。说明：稀释液的量要尽可能少。由于稀释样品会产 生一个正偏差，因此结果只是近似值。16 .病危报警值的处理当血清 AMS>300U/L时，在经过复查等确认手 段处理后应及时向临床主管医生汇报。17 .方法局限性17.1 本法线性上限血清、尿液为1200U/L。血清和血浆：如果是脂 血标本或淀粉酶的活性超出系统的测试线性范围，可按下列步骤进行 稀释：淀粉酶活性低的脂血标本用 Vitros特制稀释液或生理盐水配制 的2%牛血清白蛋白（PH7.4）进行稀释。说明：用Vitros特制稀释液 时先