发酵豆粕常见指标检测方法

1、实用标准文档粗蛋白含量检测(GB/T6432)一、原理：凯氏法测定样中的含氮量、即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸俊。加入强碱进行蒸储使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。二、仪器设备：1.高速粉碎机，粉碎时间1分钟。2.分样筛；0.45mm、40目3.分析大平；感量0.0001g4.消化炉5.滴定管；酸式50mL6.锥形瓶；250mL7.定氮仪；以凯氏原理制造的半自动蛋白测定仪三、试剂1.硫酸：含量98%2.氢氧化钠：40咻溶液（m/V）3. 硼酸：2咻溶液（m/V）混合催化剂：0.4g硫酸铜（5个结晶水），6g硫酸

2、钾或硫酸钠，磨碎混匀。混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，漠甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。4. 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000mL蒸储水中。标定：减量法称取0.8g左右在270-300C灼烧2h的无水NaCQ,加水50mL溶解，加10滴混合指示剂，用配好的盐酸滴定成暗红色，煮沸2min,冷却（水中）后再滴至暗红色，同时作空白试验（不加Na2C6）。计算：m<1000C=（VV2）M硫代硫酸钠标准溶液之物质的量浓度（mol/L）式中：C文案大全1. m无水碳酸钠的质量，gi盐酸溶液的用量，mL2空白试验盐酸溶液的用量，mLM无水

3、碳酸钠的摩尔质量数值，单位为克每摩尔（g/mol）M（1/2NaCQ）=52.994蔗糖硫酸俊：分析纯，干燥四、分析步骤：（国标推荐法）试样的消煮称取试0.5g（含氮量580m,准确至0.0002g，放入消化管中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸，于420C消化炉中消化3小时。冷却后，加入蒸储水20ml,待用。氨的蒸储；采用半自动定氮仪，将带消化液的消化管插在蒸储装置上，以25mL硼酸为吸收液，加入2-3滴混合指示剂，蒸储装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入氢氧化钠溶液，以溶液变黑为宜，即当生成黑色的氢氧化铜时，加碱量已够。若加碱量不足或过量

4、，分解液呈蓝色而不显黑色，若加碱不够，需再增加氢氧化钠用量，直到分解液呈黑色为止。蒸偏，蒸储时间以吸收液体积达到150mL以上时为宜，降下锥形瓶，用蒸储水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。2. 滴定：用0.1mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变淡紫色为终点。3. 空白测定：称取蔗糖0.5g,代替试样，按以上分析步骤进行测定，消耗0.1mol/L的标准盐酸溶液的体积不得超过0.2mL,消耗0.02mol/L的标准盐酸溶液的体积不得超过0.3mL。五、计算：粗蛋白（%）SV。)Chci6.25m0.014100式中：V-滴定试样时所需标准酸溶液体积，mLV)-滴定空白时所需标准酸

5、溶液体积，mLCHcl盐酸标准溶液浓度，mol/Lm,试样质里,g0.014每毫克当量氮的克数6.25氮换算成蛋白质的平均系数水分检测（GB/T64352006）一、适用范围：本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和各种单一饲料中水分的测定，但用作饲料的奶制品、动物和植物油脂、矿物质除外。二、原理：试样在105C烘箱内，在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。三、试剂和仪器设备：1.高速粉碎机，粉碎时间1分钟。2. 分析筛孔径0.25mm（60目）。分析夭平感量0.0001g电热恒温箱（烘箱）可控制温度在105±2C称样皿玻璃或铝质，直径40mnO上，高25mml下6.干燥器以氯化钙或变

6、色硅胶为干燥剂四、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样，其原始样量应在1000g以上，用四分法缩减至500g，风干后粉碎至全部通过40目筛，再用四分法缩减至200g,装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。如试样为多汁的鲜样，或无法粉碎时，应预先干燥处理，称取试样200300g，在105C烘箱中烘15min,立即降至65C,烘干56h。取出后，在室内空气中冷却4h,称重，即得风干试样。分析步骤：洁净称样皿，在103C烘箱内烘1h,取出，在干燥器中冷却30min,称准至0.0002g,再烘干30min,同样冷却，称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。1. 用已恒重称样皿称取两份平行

7、试样，每份22.5g（含水重0.1g以上，样品厚度4m也下）。准确至0.0002g，不盖称样皿盖，在105C烘箱内烘3.5h，取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min,称重。五、计算水分含量（%）按下式计算：WW水分（=X100%WW式中：W105C烘干前试样及称样皿重，gW105C烘干后试样及称样皿重，gW已恒重的称样皿重，g粗灰分检测(GB/T6438)一、原理：饲料样品在550C灼烧后所得残渣，用质量百分率表示。残渣中主要是氧化物、盐类等矿物质,也包括混入饲料中的砂石、土等，故称粗灰分。二、仪器设备：1.高速粉碎机：粉碎时间1分钟。2.分样筛：孔径0.25mm（60目）3.分析大平：

8、感量0.0001g4.高温炉：有高温计且可控制炉温在550土20C5.土甘蜗：瓷质，容积50mL6.干燥器：用氯化钙（干燥试剂）或变色硅胶作干燥剂三、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。四、分析步骤：将干净土甘蜗放入高温炉，在550±2C下灼烧30min。取出，在空气中冷却约1min,放入干燥器冷却30min,称其质量。再重复灼烧、冷却、称量，直至两次质量之差小于0.0005g为恒质。在恒质的土甘蜗中称取22.5g试料（灰分质量在0.05g以上），准确至0.0002g,在电炉中碳化至无烟状态（

9、夏季和冬季，可适当延长时间20min），于550土20C下灼烧3.5h至灰白色，冷却到200C。取出，在空气中冷却约1min,放入干燥器中冷却至室温，称取质量。五、计算：粗灰分含量（%）按下式计算：mm粗灰分（=x100mm式中：m为灰化后土甘蜗加灰分的的质量，gm为塔蜗加试料的质量，gm为恒质空土甘蜗，g所得结果应表示至0.01%酸溶蛋白（肽）含量的测定（据QB/T2653-2004制定）一、原理大分子蛋白质和肽链较长的多肽用三氯醋酸溶液进行沉淀，并将其中的短链小肽用酸溶解出来，其中包括小肽和部分a-氨基酸。然后经离心、过滤、消化、蒸储，测定其蛋白质含量即酸溶蛋白。二、试剂及仪器100ml烧

10、杯、10ml和25ml移液管、半微量粗蛋白质测定试剂和装置、40目标准筛、15%三氯醋酸溶液（TCA溶液）、4500转/分钟的离心机、定性滤纸等。三、试验方法（1）准确称取样品4.0000g样品，加入15%TC溢液20ml，混合均匀，静置5分钟。用定性滤纸过滤，取滤液约5ml,4500转/分钟离心10分钟，取上清液4ml注入干燥的消化管中，加入硫酸铜0.2g,硫酸钠3g,再加浓硫酸10ml,消化方法及蒸储方法与蛋白的测定方法相同。（2）计算公式：肽绝对含量（X1）V1V0Chcl0m01406.255N100%X1样品中肽含量（Chcl标准盐酸摩尔/当量浓度V样品消耗盐酸体积V）试剂空白消耗盐

11、酸体积m-一样品重量（精确到0.0001）N为微量法测定粗蛋白时的稀释倍数，若全量法测定则为1X,肽相对含量（%L100%X0-一样品中的粗蛋白含量X。不良寡糖定性检测（薄层层析法）一、原理薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。一般层析操作包括薄板活化、点样、展层、显色和结果分析等步骤。二、试剂配制（注意：须在通风橱中进行）1、展层剂正丁醇：异丙醇：乙酸：蒸储水=14:10:4（8）:8（如有拖尾现象，可适当加大乙酸的量）展层剂混匀后倒入展层缸。2、显色剂苯胺1ml,二苯胺1g,浓磷酸5ml，丙酮50ml先将二苯胺溶于丙酮中，最后加浓磷酸。因为二苯

12、胺不溶于水。显色剂避光保存，有毒，小心操作。三、操作步骤1、样品处理：称取5g试样溶于40mL蒸储水，于70C水浴1h。2、离心（8000rpm,20min）取上清，放入4C冰箱保存。3、硅胶板的活化：将硅胶板置于烘箱中，110C活化1h备用。4、点样，用水苏糖、棉籽糖和蔗糖做标准（5mg/mD。配制方法：称取5mg的水苏糖或棉籽糖、蔗糖，加入1mL蒸储水。在硅胶板底部留两厘米，用铅笔划一直线，隔开间距画上点样孔，用毛细管点样，干了再点第二次，干透后展层。（注意：点样时若发现上清已变浑浊，则必须重新离心。）6、展层：将点好样的薄层板放入预先饱和的展层装置内，让点样一端浸入展层剂中，其深度约0.

13、5cm（切记：样品点不能浸入展层剂中）。当展层剂上升到离硅胶板的顶端0.5-1.0cm时，停止展层，迅速吹干。7、显色：将显色剂喷雾，95C烘箱显色6min。8、拍照：关闭闪光灯，微距拍摄。挥发性盐基氮检测(GB/T5009.452003)一、原理：由于酶和细菌的作用，样品腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性物质。此类物质具有挥发性，在碱性溶液蒸出后，用标准酸溶液滴定计算含量。二、试剂和仪器设备：1. 盐酸溶液(0.01mol/L):取测蛋白用的0.1mol/L盐酸溶液100.0mL于1000mL溶量瓶中，加水定容至刻度。2.氧化镁混悬液(10g/L):称取1.0克氧化镁，加100m

14、L水，振摇成混悬液。2. 指示剂：甲基红乙醇指示剂(2g/L)，次甲基蓝指示剂(1g/L)。硼酸吸收液(20g/L),可用蛋白测定用的硼酸吸收液半微量定氮仪三、分析步骤：称取10克试样(准确至0.0001g)于碘量瓶中，加100.0mL水，放入振荡器中振荡30分钟,再倒入离心机中离心5-10分钟。取上清液倒入锥形瓶中。上清液置冰箱中备用。蒸储滴定：将盛有20mL吸收液及5-6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取10.0mL上述离心清液于蒸储器反应室内，加10mL氧化镁混悬液，迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸气，进行蒸储5分钟即停止，吸收液用盐酸标液滴定，至

15、终点蓝紫色,同时做试剂空白试验。四、计算：(VM)X14XCX10X(mg/100g)=x100m式中：X一试样中挥发性盐基氮的含量，单位为毫克每百克(mg/100g)V一测定用样液消耗盐酸溶液体积，单位为毫升(mD:V)一试剂空白消耗盐酸溶液体积，单位为毫升(ml):C一盐酸标准溶液的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L)：14-与1.00mL盐酸标准滴定溶液C(HCl)=1.000mol/L相当的氮的质量，单位为毫克(mg)mL试样质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。蛋白溶解度检测（GB/T195412004）一、方法原理氢氧化钾蛋白溶解度可以反映大豆粕加热过度的情况，不同加热程度的大豆粕，氢氧化钾蛋白溶解度不同。先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；再测定同一大豆粕样品中总的粕蛋白质含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。1. 二、试剂0.2%氢氧化钾溶液，相当于0.04N,pH=12.5（2.44gKOH配成1L）凯氏定氮所需的标准试剂三、仪器高速粉碎机，粉碎时间1分钟。样品筛：孔径0.25mm磁力搅拌器离心机：转速为2700r/min以上四、试样的选取和制备取具有代表性的大豆粕样品，用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过0.25mm孔径的样品筛，充分混匀，装于密封容器中备用。五、操作步骤称取大豆粕试样1.0