淀粉的国标测定方法()

1、淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法(酶-直接法)一、酶水解法1 .原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖,最后按还原糖测定,并折算成淀粉.2 .适用范围GB5009.9-85,适用于所有含淀粉的食物.3 .仪器(1)回流冷凝器(2)水浴锅4 .试齐I除特殊说明外,实验用水为蒸储水,试剂为分析纯.(1)乙醛(3)碘溶液：称取3.6g碘化钾溶于20ml水中,参加1.3g碘,溶解后加水稀释至100ml.(4)85%乙醇.(5)其余试剂同?蔗糖测定方法?5 .操作方法5.1 样品处理称取25g样品,

2、置于放有折叠滤纸的漏斗内,先用50ml乙醛分5次洗除脂肪(注：如果脂肪含量少,此步骤可免),再用约100ml85归醇洗去可溶性糖类(注：此步骤目的是去除可溶性糖),将残留物移入250ml烧杯内,并用50ml水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15min,使淀粉糊化,放冷至60C以下,力口20ml淀粉酶溶液,再5560C保温1h,并时时搅拌(注：温度过高,淀粉酶的活性破坏).然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不现兰色,假设显兰色,再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液,继续保温,直至加碘不显兰色为止.加热至沸,冷后移入250ml容量瓶中,并加水至刻度,混匀,过滤.(注：此时淀粉已水解成双糖

3、,过滤可去除残渣和纤维素)弃去初滤液,取50ml滤液,置于250ml锥形瓶中,加5ml6mol/L盐酸,装上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100ml容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液并入100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀备用.(淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反响,然后在淀粉酶的作用下,分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖,所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖.)5.2 测定按?复原糖的测定方法?操作.同时量取50ml水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液,按同一方法做试剂空白试验.6 .计算(A1-A2)X1=X

4、0.9m1xV1V3X100(1)V2100X1000式中：X1-样品中淀粉的含量,%A1-测定用样品中复原糖的含量.MgA2-试剂空白中复原糖的含量,mg0.9-复原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数；ml-称取样品质量,g；V1-水解用样品溶液体积,ml；V2-样品定容总体积,ml;V3-测定用样品处理液的体积,ml.二、酸水解法1 .原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用酸水解成具有复原性的单糖,然后按复原糖测定,折算成淀粉.2 .适用范围本法适用于含淀粉的食物3 .仪器(1)水浴锅.(2) 高速组织捣碎机：1200rpm.(3)皂化装置并附250ml锥形瓶.4 .试剂除特殊说明

5、外,实验用水为蒸储水,试剂为分析纯.(1)乙醴.(2) 85%乙醇溶液.(3) 6mol/L盐酸溶液.(4) 10mol/L氢氧化钠溶液.(5) 2.5mol/L氢氧化钠溶液.(6)甲基红指示液：0.2%乙醇溶液.(7)精密pH试纸.(8) 20%乙酸铅溶液,(9) 10%硫酸钠溶液.(10) 其余试剂同复原糖的测定.5 .操作方法5.1 样品处理洗液合并于容量瓶中,加水稀释至刻度.过滤,弃去初滤液20ml,滤液供测定用.5.2 测定按复原糖的测定步骤操作.6 .计算(A3-A4)1001)X0.9X2=mx50xvx1000250100式中：X2-样品中淀粉的含量,%A3-测定用样品中复原糖

6、的含量.mg;A4-试剂空白中复原糖的含量,mgm2-称取样品质量,g;V2-测定用样品处理液的体积,ml.500-样品液总体积,ml;0.9-复原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数;(注：酸水解能分解局部半纤维素,形成具有复原力的单糖,如木糖、阿拉伯糖等,可影响分析结果.为了比拟正确地测定食物中淀粉含量,建议采用淀粉酶糖化淀粉,除去不可溶性的残渣后,再用酸水解使之成为葡萄糖,然后测定其含量,最后换算成淀粉.三、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法(酶-直接法)1 .原理样品先在37c下经a-淀粉酶水解,使可消化淀粉转化成葡萄糖,用80浓醇提取,未水解的抗性淀粉部分经沸水浴凝胶化后,在淀粉葡萄糖普

7、酶转化成葡萄糖,用葡萄糖氧化酶法分别测定葡萄糖含量,再换算成可消化淀粉和抗性淀粉含量.2 .适用范围参考Englyst和Champ的方法.适用于所有含淀粉食物的测定.3 .仪器(1)恒温水浴箱(2)温箱3 3)分光光度计4 .试齐I除特殊说明外,实验用水为蒸储水,试剂为分析纯.(1)0.1mol/L乙酸缓冲液(pH5.0):称取14.28g乙酸钠(CH3COONa3H2O溶于水中,参加2.7ml冰乙酸,并调节pH5.0,用水定容至1L.(2)酶溶液：分别称取4g“-淀粉酶溶液(a-amylase,Sigma公司)、1g淀粉葡萄糖普酶溶液(amyloglucosidase,Sigma公司)和0.

8、3g转换酶(invertase,Sigma公司)溶液于研钵中,用0.1mol/L乙酸缓冲液研磨制成匀浆,并调节体积为100ml.3000rpm离心5min,取上清液.(3) 淀粉葡萄糖普酶溶液：称取2g淀粉葡萄糖普酶(amyloglucosidase,Sigma公司),加100ml0.1mol/L乙酸缓冲液研磨成匀浆.3000rpm离心5min,取上清液.(4) 80%乙醇：800ml乙醇加水至1L.(5) 4mol/L氢氧化钾溶液：称取224g氢氧化钾,用水溶解并加至1L.(6) 2mol/L乙酸溶液：量取冰乙酸118ml,加水至1L,混匀.7其它试剂同?葡萄糖测定方法?5 .操作步骤5.1

9、 样品处理：测定RS1时,直接称取样品0.2g1g；测定RS2时,选用生的样品,先研磨打碎后再称取样品0.2g1g,.测定RS3时,那么先将样品加水煮沸至少15min,使之凝胶化,然后取出放入4c冰箱冷藏过夜,再混匀后称取样品0.2g1g需折合水分.参加10ml酶溶液,轻轻混匀.37C温箱或水浴中酶解16ho参加40ml无水乙醇,使乙醇含量终浓度为80%,充分摇匀.静置30min,3000rpm离心15min,上清液转移至100ml容量瓶中.用80叱醇反复洗涤沉淀23次.合并上清液并用乙酸缓冲液定容,供测定可消化淀粉用.5.2 水解抗性淀粉：将经反复洗涤的沉淀置于100c枯燥,然后用15ml水

10、将沉淀转移至锥形瓶中,沸水浴中加热30min.冷却至室温.参加1倍体积的4mol/L氢氧化钾溶液,使氢氧化钾终浓度为2mol/L,室温下混合30min.注：在样品凝胶化后,2mol/L氢氧化钾的作用是进一步破坏淀粉结构,如果氢氧化钾的浓度过高或过低,不利于结构破坏,操作中需注意.参加约30ml2mol/L乙酸溶液,调节pH为5.0,再参加淀粉葡萄糖普酶溶液5ml,65C70c水浴90min.冷却后将水解液转移至100ml容量瓶中,用乙酸缓冲液定容至刻度.过滤.5.3 测定：吸取0.5ml上清液5.1和抗性淀粉水解液5.2,根据葡萄糖氧化酶法分别测定葡萄糖含量从测定步骤开始.同时做葡萄糖标准曲线

11、.6 .计算根据葡萄糖标准曲线得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖浓度,再根据稀释定容体积和称样量分别计算出可消化淀粉和抗性淀粉含量.0.1X0.9(As-Ab)XVXFX=XX0.5Xm式中：X-样品中可消化淀粉/抗性淀粉含量,g/100g;As-由标准回归方程求出的样品测定管中葡萄糖含量,mg；Ab-由标准回归方程求出的样品空白管中葡萄糖含量,mgV-样品定容体积,ml;F-稀释倍数0.5-测定时吸取样品提取液的体积,ml;m-样品质量,g；0.1-将mg/g转换成g/100g的系数7 .考前须知7.1 Eglyst根据抗性淀粉的分类,对样品处理采用不同的处理方法.读者可根据实验需要选择相应的方法.7.2 Eglyst测定抗性淀粉时,模拟胃肠道内环境,根据a-淀粉酶水解时间长短,将20min时已水解的淀粉称为快消化淀粉,20min120min水解的淀粉称为慢消化淀粉,120min后仍没有水解的淀粉称为抗性淀粉.有的学者指出在体内实验中,肠道对淀粉的消化水平可能超过6h,认为120min的水解时间过于