化妆品微生物标准检验方法总则及注解

1、精选优质文档-倾情为你奉上化妆品微生物标准检验方法总则及注解中华人民共和国国家标准化妆品微生物标准检验方法 UDC 668：576 .85.07总则 (GB7918.187)Standard methods of microbiological examination for cosmetics General rules1 样品的采集及注意事项1.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。包装量小的样品，取样量可酌减。1.2 供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不

2、得启开，以防再污染。1.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放不室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。1.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其他分析。1.5 在检验过程中，从开封到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行。或在相应条件下，按无菌操作规定进行。1.6 如检出烘大肠菌群或其他致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。2 供检样品的制备2.1 培养基和试剂2.1.1 生理盐水氯化钠  

3、60;                                     8.5g蒸馏水             

4、                       1000ml溶解后，分装到加玻璃珠的锥形瓶内，每瓶90ml，121(15 1b)20min高灭菌。2.1.2 SCDLP液体培养基成分： 酪蛋白胨               17g大豆蛋白胨  

5、;                   3g氯化钠                         5g磷酸氢二钾       &

6、#160;           2.5g葡萄糖                       2.5g卵磷脂                &

7、#160;        1g吐温80                         7g蒸馏水                 

8、0;  1000ml 制法：将上述成分混合后，加热溶解，凋pH为7.27.3分装，121(15 1b)20min高压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25左右使用。注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用日本多胨代替。2.1.3 灭菌液体石蜡。2.1.4 灭菌吐温80。2.2 仪器2.2.1 天平。2.2.2 灭菌锥形瓶：内含玻璃珠及90ml稀释液。2.2.3 灭菌刻度吸管：10ml、5ml。2.2.4 水浴箱。2.2.5 灭菌研钵及灭菌研棒。2.2.6 均质器。2.3 不同类型样品的检样制备2.3.1 液体样品2.3.1.1 水溶性的液体样品，可量取10ml加到90

9、ml灭菌生理盐水中，如样品少于10ml。仍按10倍稀释法进行。如为5ml则加45ml灭菌生理盐水，混匀后，制成1:10稀释液。2.3.1.2 油性液体。取样品10ml，先可加5ml灭菌液体石蜡混匀，再加10ml灭菌的吐温80，在4044水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐水75ml(在4044水浴中预温)，在4044水浴中乳化，制成1:10的悬液。2.3.2 膏、霜、乳剂半固体状样品2.3.2.1 亲水性的样品，称取10g，加到灭菌的带玻璃珠加有90ml灭菌生理盐水的锥形瓶中，充分振荡混匀，放32水浴静置15min。用其上清液作为1:10的稀释液。2.3.2.2 疏水性的样品，称取10g

10、，放到灭菌的研钵中，加10ml灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10ml灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70ml灭菌生理盐水，在4044水浴中充分混合，制成1:10稀释液。2.3.2.3 固体样品，称取10g，加到灭菌的生理盐水稀释瓶中，振荡混匀，使其分散混悬后，放3032水浴中，15min后取出，充分振荡混合，再放到3032水浴中静置15min，取上清液作为1:10的稀释液。如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g样品加90ml灭菌生理盐水，均质12min；疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10g样品加90mlSCDLP液体培养基，或1g样品加1ml灭菌液体石蜡、1ml灭菌吐温80、7ml灭

11、菌生理盐水，均质35min。附加说明：本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口。本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草。本标准主要起草人周淑玉。本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负责解释。注解：（1）在化妆品中通常都加入防腐剂，使化妆品能较长时间使用而不腐败变质，因此在进行化妆品卫生细菌学检验时，必须消除化妆品中的防腐剂，使长期处于濒死状态或半损伤状态的细菌被检出，从而得出正确的检验结果。SCDLP培养基中的卵磷脂和吐温80是中和防腐剂的。消除防腐剂抑菌作用的方法，常用的有以下几种：稀释法：用稀释液和培养基将样品稀释到一定浓度，使其抑菌成分的浓度减少到无抑菌作用的程度，再进

12、行检验。按规定正常取样制成1:10的稀释液，可加大稀释液量如1:20或1:40，也可加大培养基的用量或减少供试液的用量。通常是将10ml供试液加到90ml增菌液中，如改为5ml供试液加到l00ml增菌液中，可以达到稀释抑菌成分浓度的作用，此方法对于加防腐剂量少的化妆品可适用，操作简便易行，无论加何种防腐剂均可用。离心沉淀：将1:10供试液先用低速（500r/min）离心沉淀5min，使不溶物沉于管底，再吸出上清液用高速（300Or/min）离心沉淀30min，使绝大部分的待检菌沉降于管底，取出用以培养检验，可排除大量抑菌成分的干扰。但此法只适用于完全溶解或绝大部分溶解的化妆品。操作时应严格按无

13、菌操作。薄膜过滤法：利用微孔滤膜将供试液过滤，过滤后用稀释液冲洗后再培养，本法手续较繁琐，适用范围仍受到一定限制。中和法：在供试液或培养基中加入中和剂，以中和防腐剂的抑菌效果。防腐剂种类不同所用的中和剂亦不同。下表为一些防腐剂的常用中和剂。表 1 常用防腐剂的中和剂防腐剂中和剂对羟基苯甲酸酯类（尼泊金酯）布郎诺醇（Bronopol）（2-溴-2-硝基-1。3-丙二醇苯甲酸洗必泰甲醛六氯酚吐温-80盐酸半光氨酸吐温-80吐温80+卵磷酯胺离子吐温-80在标准检验方法中采用中和法来消除其防腐剂的抑菌作用。所用中和剂为吐温-80和卵磷酯。这是考虑到化妆品应用最多的防腐剂是尼泊金酯类，随着化妆品工业的迅猛发展，防腐剂使用的种类也越来越多，如何选用中和剂，有待进一步探讨。（2）化妆品供试液制备方法将各包装的样本外表消毒后送入操作室，在开盖前将瓶内样品振