HPLC测定紫玉米中花青素的含量

1、HPLC测定紫玉米中花青素的含量 仪器与设备有：Agilent 1200液相色谱仪美国Agilent公司，赛多利斯BAS124S电子天平精度0.0001 g，纯水机法国Millipore公司，高速旋风研磨机德国IKA公司，MS3 basic涡旋混匀器德国IKA公司，水浴锅上海博迅实业进展有限公司，超声波清洗器上海生析超声仪器有限公司。 1.2 试验方法1.2.1 标准溶液制备。分别周密称取锦葵色素、牵牛花色素、芍药色素、飞燕草色素、天竺葵色素、矢车菊色素6种标准物质各1.0 mg，分别用10%盐酸甲醇溶液溶解，并定容至5 mL，充分摇匀，配制成200 mg/L标准储备液，在-18 条件下，贮存

2、于密闭的棕色玻璃瓶中。1.2.2 样品前处理。将紫玉米用高速旋风谷物研磨机粉碎，精确称取5.000 0 g，置于50 mL具塞比色管中，加入酸化乙醇，定容至刻度，摇匀，超声提取30 min，然后置于沸水浴中水解1 h，取出冷却后，用酸化乙醇提取液再次定容。静置，取上层清液，用0.45 m水相滤膜过滤，封入2 mL棕色进样瓶中，于4 条件下保存待测5-6。1.2.3 色谱条件。色谱柱：Agilent-ZORBAXSB-C184.6 mm×250.0 mm，5 m;流淌相为1%甲酸水溶液A和1%甲酸乙腈溶液B;流速为0.8 mL/min;柱温为35 ;检测波长530 nm;进样体积20

3、L。梯度洗脱条件见表1。2 结果与分析2.1 标准曲线与检出限分别用10%盐酸甲醇溶液配制6种花色素的混标溶液，以峰面积y为纵坐标，以标准溶液质量浓度x为横坐标绘制标准曲线。如表2所示，6种花色素标准溶液的浓度在0.2100.0 mg/L范围内与相应的响应信号呈现良好的线性关系。依据称样量1 g，定容体积50 mL，以3倍信噪比计算仪器检出限。依据标准物质的色谱分别定性，保存时间9.600 min的为飞燕草色素，保存时间11.550 min的为矢车菊色素;保存时间12.069 min的为矮牵牛色素，保存时间14.692 min的为天竺葵色素，保存时间15.529 min的为芍药色素，保存时间1

4、5.826 min的为锦葵色素图17-8。2.2 稳定性试验取同一紫玉米样品提取液，按同样的色谱条件，将样品分别放置0、2、4、6、8、12、24 h后进行分析，结果发觉，RSD值在0.4%3.1%，这说明供试品溶液在24 h内稳定性良好，在24 h以上时部分花青素降解9。2.3 回收率和周密度分别向紫玉米空白试样中添加6种花色素的标准溶液，每种花色素的添加质量浓度各不相同，分别设计3个浓度水平，每个水平设计3个重复，与空白试样一同进行测定。结果说明，6种花色素的平均回收率为88%106%，相对标准偏差为0.5%3.9%，回收率、周密度均能满足检测要求10。2.4 样品测定应用以上1.2.2方

5、法对紫玉米样品进行检测分析，结果见图2。结果说明，被检样品中含有4种花色素，分别为飞燕草色素28 mg/kg、矢车菊色素830 mg/kg、芍药色素253 mg/kg、锦葵色素395 mg/kg。其他2種色素未检出，所检测的紫玉米样品中总花青素的含量可达1 506 mg/kg。3 结论与商量本讨论建立了高效液相色谱法对紫玉米中6类花青素定量的方法。方法接受酸化乙醇溶液经沸水浴水解提取花青素。由于花青素在光照条件下易降解，因此在样品制备和检测过程中应尽量避光，以保证样品稳定性。样品接受安捷伦液相色谱仪，以1%甲酸水溶液和1%甲酸乙腈溶液为流淌相进行梯度洗脱，在20 min内样品中花青素与干扰物有效分别，从而到达精确定量。通过添加不同水平的6种花色素标准溶液，证