大二下免疫16检测技术防治

1、 第二十二章 免疫学检测技术的基本原理第一节 体外抗原抗体反应（血清学反应） 1、 高度特异性：高度特异性： 抗原抗体反应的特点：抗原抗体反应的特点： 2、表面化学基团之间的可逆结合：、表面化学基团之间的可逆结合： 结合：非共价键结合：非共价键 氢键氢键, 静电引力，范德华力静电引力，范德华力, 疏水疏水键键 解离：抗体亲和力解离：抗体亲和力 受温度、酸碱度和离子强度的受温度、酸碱度和离子强度的影响影响 亲亲 和和 力（力（affinity）Keq =104AffinityAbAgHigh AffinityAbAgLow Affinity亲亲 和和 力力1010Avidity106Avidit

2、y亲亲 合合 力力Ab excessAg excessEquivalence Lattice formation3、适宜的抗原抗体浓度和比例、适宜的抗原抗体浓度和比例4、抗原抗体反应的两个阶段、抗原抗体反应的两个阶段 抗原抗体特异性结合阶段抗原抗体特异性结合阶段 可见反应阶段可见反应阶段 抗原抗体反应的影响因素：抗原抗体反应的影响因素： 电解质电解质 温度温度: 37 酸碱度酸碱度: pH 6 8 之间之间 第二节 检测抗原和抗体的体外实验 检测抗原或抗体的方法：检测抗原或抗体的方法：凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的 条件下结合，出现肉眼

3、可见的凝集团块条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块直接凝集反应：颗粒性抗原直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体相应抗体 间接凝集反应：可溶性抗原间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体颗粒载体+相应抗体相应抗体1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/512直接凝集反应直接凝集反应+间接凝集反应间接凝集反应沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体结合出现肉眼肉眼 可见的沉淀物。可见的沉淀物。速率散射比浊法速率散射比浊法/ /免疫比浊法：可检测样品中多种分子，免疫比浊法：可检测样品中多种分子， 并进行精确定量并进行精确定量单向琼脂扩散：可用于检测血清中单

4、向琼脂扩散：可用于检测血清中IgIg或其他可溶性抗或其他可溶性抗原的定原的定 量测定量测定双向琼脂扩散：抗原抗体的定性分析双向琼脂扩散：抗原抗体的定性分析免疫电泳：分析样品的成分及其性质，常用于血清蛋免疫电泳：分析样品的成分及其性质，常用于血清蛋白的组分白的组分 分析分析Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel单向琼脂扩散单向琼脂扩散双向琼脂扩散双向琼脂扩散补体参加的反应补体参加的反应原理：原理： 抗体抗体+ +红细胞红细胞 补体补体 红细胞裂解红细胞裂解免疫标记技术免疫标记技术 将抗原抗体反应与标记技术结合，将抗原抗体反应与标记技术结合，提高了抗原

5、抗体反应的灵敏度，可定性、提高了抗原抗体反应的灵敏度，可定性、定量、定位。定量、定位。酶免疫测定法（酶免疫测定法（enzyme immunoassay, EIA) 酶标记抗体进行的抗原抗体反应酶标记抗体进行的抗原抗体反应 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)： （enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反使抗原抗体反 应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高异性与酶的高 效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显

6、效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。色来判定结果。 直接法直接法 间接法间接法 双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法（双抗体夹心法（sandwich ELISA)免疫荧光法：荧光素与抗体连接免疫荧光法：荧光素与抗体连接 荧光荧光抗体抗体 直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色作标本染色 间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧合，再用荧 光素标记的二抗染色。既光素标记的二抗染色。既可检测抗可检测抗 原，也可检测抗体。原，也可检测抗体。AgFluorochromeLabeled AbTissue Sec

7、tion直接免疫荧光直接免疫荧光AgFluorochromeLabeled Anti-IgTissue SectionUnlabeledAb间接免疫荧光间接免疫荧光 放射免疫测定法：用放射性核素标记抗原或抗体放射免疫测定法：用放射性核素标记抗原或抗体进行的进行的 免疫测定免疫测定 化学发光免疫技术：将化学发光分析和免疫反应相化学发光免疫技术：将化学发光分析和免疫反应相结合结合免疫胶体金技术：用胶体金颗粒标记抗体或抗原，免疫胶体金技术：用胶体金颗粒标记抗体或抗原，以以 测未知抗原或抗体的方法。测未知抗原或抗体的方法。Marker Sample+-SDS-PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝

8、胶电泳)浓缩胶浓缩胶分离胶分离胶M Sample+-PAGE：PolyAcrylamide Gel Electrophoresis免疫印迹技术免疫印迹技术 （Western blotting)M转转 印印8KD胶胶膜膜转膜转膜硝硝酸酸纤纤维维膜膜一抗（特异性抗体）一抗（特异性抗体）洗涤，辣根过氧化物酶标记的二抗洗涤，辣根过氧化物酶标记的二抗底底 物物免疫学检测免疫学检测第三节 免疫细胞功能的检测免疫细胞的分离与类型鉴定免疫细胞的分离与类型鉴定 外周血单个核细胞的分离：外周血单个核细胞的分离： 密度密度梯度离心梯度离心 淋巴细胞及其亚群的分离：淋巴细胞及其亚群的分离： 磁珠分离：抗体与磁珠交联磁

9、珠分离：抗体与磁珠交联 流式细胞术（流式细胞术（FACSFACS） Cytofluorimetry磁珠分离法磁珠分离法免疫细胞功能测定：免疫细胞功能测定：T T细胞功能测定细胞功能测定B B细胞功能测定细胞功能测定T T细胞功能测定细胞功能测定T T 细胞增殖试验细胞增殖试验细胞毒试验细胞毒试验细胞因子检测细胞因子检测迟发型超敏反应迟发型超敏反应(DTH)(DTH)的检测的检测淋巴细胞转化淋巴细胞转化杀杀 伤伤 实实 验验产生细胞因子的细胞频数的检测：产生细胞因子的细胞频数的检测： ELISPOT Assay迟发型超敏反应的检测迟发型超敏反应的检测DTH (Delayed-Type Hyper

10、sensitivity)检测抗原肽特异的检测抗原肽特异的T T细胞频数细胞频数-Tetramer (-Tetramer (四聚体四聚体) )BiotinB B细胞功能测定细胞功能测定B B细胞增殖试验细胞增殖试验抗体形成细胞测定抗体形成细胞测定: : 溶血空斑试验溶血空斑试验第二十三章第二十三章 疫苗及预防接种疫苗及预防接种第一节第一节 免免 疫疫 预预 防防 特异性免疫的获得：自然免疫和人工免疫特异性免疫的获得：自然免疫和人工免疫人工免疫：人工免疫： 人工主动免疫人工主动免疫 人工被人工被动免疫动免疫 种类：抗毒素种类：抗毒素 ，免疫球蛋白，细胞因子与单克隆抗体，免疫球蛋白，细胞因子与单克隆

11、抗体人工主动免疫人工主动免疫 （artificial passive artificial passive immunization)immunization) 用疫苗接种机体使之产生特异性免疫用疫苗接种机体使之产生特异性免疫, ,从而预从而预防感染的措防感染的措 施。施。 人工被动免疫（人工被动免疫（artificial active immunization)artificial active immunization) 给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂因子等制剂, , 以治疗或紧急预防感染的措施。以治疗或紧急预防感染的措施。 Edwa

12、rd Jenner1749-1823 1796 - Local milkmaid, Sarah Nelmes, diagnosed with cowpox. Jenner scratched material from pocks onto the arm of 8-year-old James Phipps. Showed mild symptoms & recovered.Six weeks later, Jenner inoculated James with smallpox he developed no symptoms of disease!疫苗的起源Edward Jen

13、ner inoculating James Phipps with cowpox （1796）天花的流行情况：天花的流行情况：The principle behind the smallpox vaccine安全：灭活疫苗应彻底灭活，避免无关蛋白安全：灭活疫苗应彻底灭活，避免无关蛋白和和 毒素污染；活疫苗无回复突变，毒素污染；活疫苗无回复突变，无致癌性。无致癌性。有效有效: 疫苗具有很强的免疫原性，在大多数疫苗具有很强的免疫原性，在大多数人引起人引起 保护性免疫。保护性免疫。 保护性免疫的类型保护性免疫的类型 免疫记忆免疫记忆 实用：接种程序简化，价格低廉实用：接种程序简化，价格低廉疫苗的基本

14、要求疫苗的基本要求: :疫苗种类：疫苗种类： 现代疫苗种类：现代疫苗种类： 减毒活疫苗：脊髓灰质炎、麻疹、减毒活疫苗：脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗风疹、腮腺炎疫苗 灭活疫苗（死疫苗）：狂犬病、灭活疫苗（死疫苗）：狂犬病、伤寒、流感疫苗伤寒、流感疫苗 亚单位疫苗：有效免疫原成分制亚单位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型成的疫苗，如乙型 肝炎病毒表面抗原制成的肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗乙型肝炎疫苗 类毒素疫苗：细菌的外毒素经类毒素疫苗：细菌的外毒素经0.3%-0.4%0.3%-0.4%甲醛处甲醛处理理 白喉类毒素、破伤风类毒素疫白喉类毒素、破伤风类毒素疫苗苗 结合疫苗：细菌夹膜多

15、糖结合疫苗：细菌夹膜多糖+ +白喉类毒素白喉类毒素 （脑膜（脑膜 炎球菌、肺炎球菌疫苗已获准使炎球菌、肺炎球菌疫苗已获准使用）用） 联合疫苗：白百破三联疫苗联合疫苗：白百破三联疫苗 重组载体疫苗：病毒载体疫苗重组载体疫苗：病毒载体疫苗疫苗的现状：疫苗的现状： 常规使用的疫苗的成功率：常规使用的疫苗的成功率： 脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮脊髓灰质炎、麻疹、风疹、腮腺炎疫苗腺炎疫苗 BCG 百日咳疫苗百日咳疫苗 年龄疫苗种类基础接种 出生卡介苗 乙型肝炎疫苗 1个月乙型肝炎第二针 2个月小儿麻痹疫苗初服 3个月小儿麻痹疫苗复服，百白破第一针 4个月小儿麻痹疫苗复服，百白破第二针 5个月百白破第三针

16、6个月乙型肝炎第三针 流脑多糖疫苗第一针（到6月龄后12月接种 8个月麻疹疫苗初种 1岁乙脑疫苗免疫2针，间隔7-10天（到1岁后5月份接种）加强接种 1岁半百白破加强1针，麻疹疫苗复种，小儿麻痹疫苗加服，流脑多糖疫苗第二针。 2岁乙脑疫苗加强1针（到2岁后5月份接种） 3岁乙脑疫苗加强1针 (到3岁后5月份接种) 4岁小儿麻痹疫苗加强1次 5岁百白破加强1针,麻疹疫苗复种,乙脑疫苗加强1针,卡介苗复种我国计划免疫程序我国计划免疫程序 许多疾病无有效疫苗：许多疾病无有效疫苗： 病毒：病毒：HIV， 疱疹病毒疱疹病毒 细菌：葡萄球菌，细菌：葡萄球菌，A组链球菌组链球菌 真菌：假丝酵母真菌：假丝酵母 原生动物：疟疾，利什曼病原生动物：疟疾，利什曼病 蠕虫感染：血吸虫病蠕虫感染：血吸虫病新新 疫疫 苗苗 的的 研研 制制 合成肽疫苗：生产方便，安全，多价疫苗合成肽疫苗：生产方便，安全，多价疫苗 DNADNA疫苗：用编码有效免疫原的基因与细菌质疫苗：用编码有效免疫原的基因与细菌质粒构粒构 建重组体直接免建重组体直接免疫机体。疫机