常用pH缓冲溶液的配制和pH值

1、  （一）溶液配制注意事项 1药品要有较好的质量  试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，GR）、分析试剂（Antalytical reagent，AR）化学纯（Chemical pure，CP）和实验试剂（Laboratory reagent，LR）等等。工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。 2药品称量要精确。 3配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.57.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注

2、意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。 配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。 （二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液 11/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）。 2/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏

3、水稀释至刻度（1 000ml）。 3按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。 附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升） pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4  5.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.4  5.9 9.9 90.1 7.2 72.0

4、60;28.0  6.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.2  6.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.2  6.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.9  6.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.0  6.4 26.7 73.3 7.7 89.4 10

5、.6  6.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.5  6.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.8  6.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.3  6.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.2  6.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.0  7

6、.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0  （三）0.15Mol/L PB液 附表2  0.15Mol/LPB液配制法 pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml）  6.4 26.5 73.5  6.6 37.5 62.5  6.8 49.0 51.0  7.0 61.0 39.0

7、0; 7.2 72.0 28.0  7.4 81.0 19.0  7.6 87.0 13.0  Na2HPO4·2H2O分子量=175.05   0.15Mol/L溶液含26.7g/L。 Na2HPO4·12H2O分子量=358.22  0.15Mol/L溶液含53.7g/L。 NaH2PO4·H2O分子量=138.00    0.15Mol/L溶液含20.7g/L。 NaH2PO4&#

8、183;2H2O分子量=156.03   0.15Mol/L溶液含23.4g/L。 （四）0.2Mol/L PB缓冲液 附表3  0.2mol/L PB缓冲液配制法 pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml）  5.8 8.0 92.0  6.0 12.3 87.7  6.2 18.5 81.5  6.4 26.5

9、60;73.5  6.6 37.5 62.5  6.8 49.0 51.0  7.0 61.0 39.0  7.2 72.0 28.0  7.4 81.0 19.0  7.6 87.0 13.0  7.8 91.5 8.5  8.0 94.7 5.3      0.2Mol/L Na2HPO4·2&

10、#160;H2O溶液35.61g/L             Na2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L     0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/L            NaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L 欲配0.1Mol/L&#

11、160;PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85的NaCl溶液即可。 （五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS） （0.15Mol/L PH 7.2）   NaCl                          8.0g

12、   KCl                           0.2g   Na2HPO4                &#

13、160;     1.15g  （如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）   KH2PO4                        0.2g 将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115高压灭菌10min15min，存在4冰箱

14、中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。 （六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer）  文章来自： 医药园  ()   整理：zfg 1硼酸（3BO3） 0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml。 2硼砂（Na2B4O7） 0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml。 附表4  不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法 pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.

15、2Mol/L硼酸（ml） pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml）  7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.5  7.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.5  7.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.0  8.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0  （七）巴比妥缓冲液 1p

16、H8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液    巴比妥钠                 47.6g    蒸馏水                   3 000m

17、l    1.17N  HCl               55.0ml   （1.17 N  HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）  将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。  加1.17 N  HCl 55ml。  用HCl调节pH到8

18、.2，并加蒸馏水至4 265ml。     2pH8.4  0.06Mol/L巴比妥缓冲液         巴比妥                   1.84g         

19、巴比妥钠                 10.30g         加蒸馏水至               1 000.00ml     3pH8

20、.6  0.06Mol/L巴比妥缓冲液         巴比妥                   1.66g         巴比妥钠        

21、;         12.76g         加蒸馏水                 1 000.00ml （八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液  见表附表5 附表5  0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法

22、pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml） pH 0.2Mol/L Tris（ml） 0.1Mol/L HCl（ml）  23 37 23 37  9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.5  8.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0  8.75 

23、8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.5  8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0  8.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.5  8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0  8.

24、32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5  （九）三羟甲基甲烷盐酸缓冲液（TrisHCl缓冲液） 不同pH，0.05Mol/L 25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加ml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表） 附表6  TrisHCl缓冲液配制法     pH 0.2Mol/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml)     pH 0.

25、2Mol/L Tris(ml) 0.1NHCl (ml)  23 37 23 37  9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.5  8.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.0  8.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.5 

26、8.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.0  8.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.5  8.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.0  8.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.

27、5  8.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.0  8.14 8.00 25 25.0     25    三羟甲基氨基甲烷（Tris）  分子量=121.14  0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。  0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml。 （十）0.5Mo

28、l/L pH9.5碳酸盐缓冲液  NaHCO3                 3.70g  Na2CO3                  0.60g 溶于600.00ml蒸馏水中即得。 不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中

29、二氧化碳使PH下降。最好小量配制。 （十一）甘油磷酸缓冲液 1配制pH8.0磷酸缓冲液    0.1Mol/L Na2HPO4       94.50ml    0.1N NaH2PO4           5.50ml    混合即可 29份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。 

30、0;用途：用于免疫荧光试验。 （十二）Hanks液 1贮存液    NaCl                   80.00g    KCl                 

31、60;  4.00g    Na2HPO4·12 H2O        1.52g    KH2PO4                 0.60g    葡萄糖     

32、             4.00g    0.4酚红液             50.00ml    双馏水加至             100.0

33、0ml  115高压灭菌15min，冰冻保存。 2工作液    贮存液                 1份    双馏水                 9份  115高压灭菌1

34、5min。临用时用灭菌的5.6NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。 （十三）萘（钠）氏试剂（Nesslers reagent） 配方1：氯化汞             6.0g        碘化钾              12.4

35、g        20NaOH           30ml        加蒸馏水至          100ml 配方2：碘化汞          

36、;    11.5g        碘化钾               8g        蒸馏水              &#

37、160;50ml     （完全溶解后）过滤，加20NaOH 50ml。   用途：检测溶液中氨离子。 （十四）阿氏（Alsevers）液        葡萄糖               2.05g        柠檬酸钠 &#

38、160;           0.80g        氯化钠              0.42g        蒸馏水       &#

39、160;      100ml   溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4保存。 （十五）青、链霉素混合液（简称SP液或双抗液）        青霉素（40万U）    5支        链霉素（200万g）  1支   分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同

40、溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10-20冰箱保存备用（1万单位g/ml）。   临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。 （十六）洗液（清洁液） 配方1：重铬酸钾            150g         蒸馏水       

41、      300ml         浓硫酸             3 000ml 将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。此为强洗液。 盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶

42、皮手套，以保安全。 洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。 配方2：浓硫酸              50%         蒸馏水              50% &

43、#160;       重铬酸钾            5% 此为中等强度洗液。 配方3：重铬酸钾             100g         蒸馏水   

44、0;          1 000ml         加热溶解，冷却后缓慢加入       工业硫酸             100ml 此液为弱洗液，为棕红色。使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效缓冲溶液（英文：buffer solution）是一种能在加入少量酸或碱和水时大大减低pH变动的溶液。pH缓冲系统对维持生物的正常pH值和正常生理环境起到重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是蛋白质缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及磷酸盐缓冲系统。每种缓冲体系所占