大容量注射液密封性验证

1、大容量注射液密封系统完好性验证方案1. 概述 本次容器密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为2组，A组为正常微生物侵入试验，B组为微生物挑战试验，检查产品无菌可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。2. 试验流程3. 验证内容3.1 目的证明灌装培养基的容器经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验后，保证无菌以确认大容量注射液密封系统的完好性。3.2 试验样品的制备3.2.1 在生产线上取足够量的输液瓶，灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，使用自动压塞和压盖设备将容器密封。3.2.2 将灌装好的容器经115、20分钟灭菌。3.2.3 从灭菌柜中

2、取出试样，冷却，将每一试样倒转，使培养基与容器内表面充分接触，在3035下竖放培养14天。小心拧松至少50个试样的铝盖，注意不要破坏其密封口。将拧松铝盖时不慎损坏容器密封性的所有试样剔除。按培养样品。3.2.5 挑选至少10个封口处缺损的容器，按培养样品。3.3 确定培养基促菌生长能力营养性试验3.3.1 所有试样培养14天均不长菌时，随即取20个带盖试样，每个试样内接种1ml的铜绿假单胞菌ATCC9027，菌液浓度：10100CFU/1ml。3.3.2 3035下培养7天，或培养至所有试样都呈阳性结果。3.3.3 若7天内，所有接种铜绿假单胞菌的试样中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生

3、长能力可判为合格。3.3.4 使用革兰染色和紫外灯下肉汤呈蓝绿色荧光的性质，来签订并确认试样容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌。3.4 挑战菌悬浮液的制备3.4.1 从铜绿假单胞菌ATCC9027的新鲜斜面上取一整环培养基，分别接入含10ml无菌培养基的试管中，在3035下培养1618h。3.4.2 将每管的培养物分别转入含1000ml相同培养基（SCDM/2）的容器中，于3035下培养2224h。在培养结束时，能明显见容器内培养基出现浑浊。3.4.3 培养结束后的菌悬液即可用来作容器/密封系统完好性试验。3.5 微生物侵入试验操作步骤3.5.1 本试验须在生物安全柜或其他不影响生产环境的地方

4、进行。3.5.2 将新鲜的铜绿假单胞菌ATCC9027的菌悬液倒入合适的盆中，用金属丝架固定试样容器，使试验样品倒置在菌悬液中。3.5.3 将50个经最长灭菌程序灭菌的试样倒置，并侵入菌悬液中，该组试样为A组。试样容器内的无菌培养基应充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全泡在菌悬液中，见图：3.5.4 同时将25个拧松铝盖与10个容器封口缺损的试样容器倒置入菌悬液中，该组试样为B组。3.5.5 实验开始时取一份菌悬液，平均计数每毫升所含活菌数。按确认试验用微生物是铜绿假单胞菌。3.5.6 将A组和B组试样容器在菌悬液中持续浸泡约4小时。3.5.7 浸泡结束时，再用平板计数菌悬液的浓

5、度。3.5.8 从菌悬液中取出试样，擦干试样容器外残余的菌悬液，然后用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒容器外表面。3.5.9 取装满培养基未拧松铝盖与拧松铝盖的试样各2个，作阳性对照。阳性对照用样品制备方法同试样，但不经菌悬液浸泡，其外表面用含0.5%过乙酸的70%异丙醇消毒。此后，接种入10100CFU铜绿假单胞菌ATCC9027，按步骤3.3进行培养基的营养试验。3.5.10 将消毒后的容器放在塑料袋中，置3035培养7天，操作中应特别注意不要损坏B组无铝盖试样胶塞的密封性。3.5.11 挑战试验用菌悬液经灭菌后丢弃。3.5.12 将挑战试验用的试样培养7天，观察检查试样容器内培养基中微

6、生物的生长情况。3.5.13 对每一试样进行观察检查，有生长的记作十，无生长的记作一。3.5.14 如果试样容器长菌，按3.3.4方法确认生长菌是挑战微生物铜绿假单胞菌。3.5.15 如果所有容器都不长菌，则从浸过菌悬液的A组取10个试样，B组5个试样，分别按3.3进行培养基的营养检查。3.5.16 试验注意事项3.5.16.1 步骤3.3、步骤3.5.9、步骤3.5.15中进行的营养试验都合格，试样的挑战试验才有效。3.5.16.2 在挑战试验开始时，挑战用菌悬液浓度（活菌数）必须达到1106CFU/ml。3.5.16.3 挑战试验中A组和B组如有长菌，需记录长菌的试样数。在A组中如出现长菌

7、试验，则需按下述需求进一步调查。第一，仔细去除微生物生长的容器盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。第二，将观察到试样容器封口的缺陷，采用拍照或及其他适当详细记录。3.5.16.4 如果任何挑战试验中长菌的容器不是由于容器封口明显的物理性缺损所致，即判定容器/密封系统挑战试验作失败。3.6 检验方法与可接受标准3.6.1 培养基无菌检查取样方法：生产线上罐装100ml SCDM/2(大豆胰蛋白胨肉汤)培养基，经过最长灭菌程序灭菌，从灭菌釜中取出试样，冷却，将每一试样倒转，在3035C下竖放培养14天。检测方法：可接受标准：3.6.2 营养试验取样方法：随机抽取经检验过的20个带盖试样

8、。检测方法：每个试样内接种0.1ml铜绿假单胞菌ATCC9027，菌液浓度：10100CFU/0.1ml。在3035C 下培养7天，或者培养到所有试样都呈阳性结果。可接受标准：若7天内，所有接种的铜绿试样，微生物都生长良好，则培养基的促进生长能力判断合格。3.6.2 菌种鉴别试验取样方法：取接种铜绿的试样，经革兰氏染色实验鉴别待检试样存在铜绿假单胞菌。检测方法：革兰氏染色实验可接受标准：镜检结果应呈红色，并观察细胞形态结构符合铜绿假单胞菌特征，证明是铜绿假单胞菌。3.6.1 计算菌悬液浓度铜绿假单胞菌：【ATCC9024】第5代菌号：9024-4-5-2铜绿假单胞菌斜面培养物少许至10ml营养

9、肉汤35 24小时培养。铜绿假单胞菌新鲜肉汤培养物1ml 9ml0.9%无菌NaCl溶液至 10 -11含菌量 10100 cfu/ml 10倍系列稀释大容量注射液密封系统完好性验证报告1. 概述 本次容器密封系统的完好性试验采用灌装大豆胰蛋白胨肉汤培养基，经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验，试验分为2组，A组为正常微生物侵入试验，B组为微生物挑战试验，检查产品无菌可靠性是否达到要求，并对试验结果进行分析研究。2. 试验流程3. 验证过程3.1 目的证明灌装培养基的容器经压塞、扎盖、灭菌、微生物侵入试验后，保证无菌以确认大容量注射液密封系统的完好性。3.2 验证样品的制备3.2.1 验证样品培

10、养基输液瓶规格胶塞厂家规格灌封数灭菌条件大豆胰蛋白胨肉汤100ml博生胶塞130115、30分钟3.2.2 无菌检查结果：培养基没有出现浑浊现象，证明无菌落生长。3.3 确定培养基促菌生长能力营养性试验3.3.1 营养试验检查结果统计：编号有菌生长无菌生长编号有菌生长无菌生长1+/11+/2+/12+/3+/13+/4+/14+/5+/15+/6+/16+/7+/17+/8+/18+/9+/19+/10+/20+/结论：从上面统计结果可以看出，培养基的营养实验合格，说明培养基有效，证明试验可以继续。3.3.1 鉴别培养基生长的菌是否为铜绿假单胞菌，检查结果统计：编号是否铜绿假单胞菌编号是否铜绿

11、假单胞菌1是11是2是12是3是13是4是14是5是15是6是16是7是17是8是18是9是19是10是20是结论：符合规定3.4 挑战菌悬浮液的制备侵入前菌悬液浓度统计：取试验菌悬液1ml注入3个平皿，立即倾注琼脂培养基，培养、计数。菌浓度：110-11CFU/ml含菌量10100cfu/ml。结论：菌悬液浓度符合规定，说明菌悬液可用。3.5 微生物侵入试验3.5.1 侵入后菌悬液浓度统计：取试验菌悬液1ml注入3个平皿，立即倾注琼脂培养基，培养。菌浓度：1106CFU/ml；结论：从统计可以看出，侵入试验后菌悬液浓度符合浓菌液要求，说明侵入试验具有有效性。3.5.2 A组2只与B组2只阳性

12、对照营养试验检查结果统计：A组编号有菌生长无菌生长B组编号有菌生长无菌生长1+/3+/2+/4+/结论：2组营养试验均阳性，说明培养基符合规定。3.2.1 鉴别培养基生长的菌是否为铜绿假单胞菌，检查结果统计：编号是否铜绿假单胞菌编号是否铜绿假单胞菌1是3是2是4是结论：符合规定3.2.2 微生物侵入检查结果统计：编号有菌生长无菌生长编号有菌生长无菌生长1/-26/-2/-27/-3/-28/-4/-29/-5/-30/-6/-31/-7/-32/-8/-33/-9/-34/-10/-35/-11/-36/-12/-37/-13/-38/-14/-39/-15/-40/-16/-41/-17/-

13、42/-18/-43/-19/-44/-20/-45/-21/-46/-22/-47/-23/-48/-24/-49/-25/-50/-结论：从上面的统计可以看出侵入后样品经过培养7天以后，均无菌生长，说明大容量注射液密封系统在现有的工艺生产条件下符合规定。3.5.5 B组微生物侵入检查结果统计：编号有菌生长无菌生长编号有菌生长无菌生长1/-6/-2/-7/-3/-8+/4+/9/-5+/10/-结论：从上面的统计可以看出侵入后样品经过培养7天以后，有3瓶有菌生长， 分析其原因应该是去铝盖过程中破坏容器的密封性所致。3.5.5 A组10只与B组5只营养试验检查结果统计：A组编号有菌生长无菌生长B组编号有菌生长无菌生长1+/11+/2+/12+/3+/13+/4+/14+/5+/15+/6+/7+/8+/9+/10+/3.1