药物的含量测定

1、药物分析实验武汉大学药学院2021.2.21目录第一章药物分析实验须知 2第一节药物分析实验的性质和根本要求 2第二节实验室平安知识 3第三节原始记录与实验报告 5第四节 实验考核方式 5第二章 药物的鉴别试验 6实验一 典型药物的鉴别试验 6第三章 药物的杂质检查 12实验二药物的一般杂质检查-五种无机杂质的检查 13实验三 药物的一般杂质检查-残留溶剂的检查 18实验四药物的特殊杂质检查-色谱分析法检查药物中的有关物质 22第四章 药物制剂的常规检查 27实验五药物制剂的含量均匀度和溶出度检查 28第五章 药物的含量测定 36实验六 双相滴定法测定水溶性有机酸盐类药物的含量37实验七 亚硝

2、酸钠滴定法测定含芳伯氨基药物的含量 39实验八非水溶液滴定法测定化学原料药含量 42实验九旋光法、折光法和剩余滴定法测定葡萄糖注射液含量 44实验十紫外分光光度法测定复方磺胺嘧啶片含量 50实验一 高效液相色谱法测定复方磺胺甲噁唑片含量 54实验十二 气相色谱法测定维生素 E胶丸含量 60第六章综合性实验 63实验十三化学原料药及其制剂的全质量检验 63实验十四 中药制剂的全质量检验 68第七章设计性实验 72实验十五 药物制剂的 HPLC含量测定方法建立与验证 72实验十六 药物制剂的毛细管电泳含量测定方法建立与验证 74实验十七 药品质量标准的制订 76实验十八 血浆或尿液中药物色谱分析方

3、法的建立与验证 76参考文献83第一章 药物分析实验须知第一节 药物分析实验的性质和根本要求1药物分析实验的性质?药物分析实验? 是药学专业本科生必修的主要实验课程之一， 独立设课。 学生通过该 课程的学习， 可以加深和稳固对药物分析理论知识的理解， 正确掌握药物分析中的各种分析 方法和根本操作技能， 熟练使用各种分析仪器， 全面了解药品检验工作的根本程序； 具备独 立开展药品质量控制的能力， 并初步具有建立药物分析新方法、 新技术的能力； 树立高度的 责任意识、质量意识和平安意识，培养严肃认真、实事求是的科学态度和工作作风。 2药物分析实验的根本要求1进入实验室应穿白色工作服，保持实验室安静

4、及室内卫生和整洁，不得将与实验 无关的任何物品带入实验室。不迟到、不早退。2实验室禁止吃东西、吸烟。3实验课前做好预习，明确每次实验的目的要求，熟悉原理和操作要点，预先安排 好实验进程，估计实验中可能发生的问题及处理方法。4认真掌握操作技术，细心观察实验现象。在严格按实验规程操作、虚心接受教师 指导的同时，鼓励大胆创新，善于发现问题、提出问题和分析问题。5为防止试剂、药品污染，取用时应仔细观察标签和取用工具上的标志，杜绝错盖 瓶盖或不随手加盖的现象发生。当不慎发生试剂污染时，应及时报告任课教师。公用试剂、 药品应在指定位置取用。取出的试剂、药品不能再倒回原瓶。未经允许不得擅自动用实验室 任何物

5、品。6保护仪器和公物，节约试剂、药品和水电；破损仪器应及时登记报损、补发。使 用精密仪器，需经教师同意，用毕登记签名。 7可回收利用的废溶剂应回收至指定的容器中；有毒、腐蚀性等物质，按教师要求 存放，不可任意丢弃；滤纸、火柴棒、碎玻璃等应投入废物篓，切勿丢入水池内。8实验完毕应认真清理实验台，仪器洗净后放回原处，擦净台面，晾好抹布、毛刷、 放齐凳子、锁好柜子，经教师同意后，方可离开。值日生还应负责整理公用试剂台、清扫地 面卫生、去除垃圾及废液篓中污物，并检查水、电、门、窗等平安事宜。9认真处理数据、总结实验结果，按要求撰写实验报告，并在规定时间内上交。10各组及同学之间应相互协作，合理安排实验

6、时间、实验内容和后续工作。第二节 实验室平安知识在药物分析实验中常接触到有腐蚀性、毒性、易燃烧或易爆炸的化学试剂和药品，以 及各种电器设备，如使用不慎易发生危险。为了防止事故的发生， 操作前应对各种药品、试 剂的性质、 仪器的性能和正确操作方法有充分的了解， 熟悉一般平安知识； 必须严格遵守实 验室的各种平安操作守那么。要时刻注意防火、 防爆， 发现事故苗头及时报告， 不懂时不要擅 自动手处理。下面介绍一般实验室中可能发生的危险及预防处理措施。1防火实验室中失火原因通常是使用或蒸馏易燃液体不谨慎或电器电线有故障。下面是预防 失火的措施：1易燃烧物质不宜大量存放于实验室中，应贮存在密闭容器内并放

7、于阴凉处。 2加热低沸点或中等沸点等易燃液体，例如乙醚、二硫化碳、丙酮、苯、酒精等最 好是用水蒸气加热，至少用水浴加热，并时时观察检查，不得离开操作岗位。切不能用直火 或油浴加热，因为它们的蒸气极易着火。3在实验中使用或倾倒易燃物质时，注意要远离火源。4身上或手上沾有易燃物质时，应立即清洗干净，不得靠近火源。5易燃液体的废液应倒入专用贮存器，不得倒入下水道，以免引起燃烧、爆炸等事 故。6磷与空气接触，易自发着火，宜贮存在水中；金属钠暴露于空气中能自发着火， 与水能起猛烈反响着火，应贮存于煤油中。2防爆1乙醚在室温时的蒸气压很高，乙醚和空气或氧气混合时能产生爆炸性极强的过氧 化物，在蒸馏乙醚时应

8、特别小心，切勿蒸干。2无水过氯酸与复原剂接触能引起爆炸，无水过氯酸也能自发爆炸，常用的60%-70浓度的过氯酸的水溶液，那么没有危险。 3以下物质混合，都可能发生爆炸。金属钠或钾与水；高锰酸钾与浓硫酸、硫磺或甘油；过氯酸与乙醇；过氯酸盐或氯酸盐与浓硫酸；硝酸钾与醋酸钠； 氧化汞与硫磺；磷与硝酸、硝酸盐、氯酸盐。4易发生爆炸的操作不得对着人进行。 5使用可燃性气体如氢气、乙炔等作为仪器的气源时，气瓶及仪器管道的接头处不 能漏气，以免漏气后与空气混合发生爆炸。3有腐蚀性、毒性的试剂和药品 1硫酸、盐酸、硝酸、冰醋酸、氢氟酸等酸类物质腐蚀性很强，能烫伤皮肤产生剧 烈的疼痛，甚至发炎腐烂，酸也能损坏衣

9、物。应特别注意勿使酸溅入眼中，严重的能使眼睛 失明。盐酸、硝酸、氢氟酸的蒸气对呼吸道粘膜及眼睛有强烈的刺激作用，因此在倾倒上述 酸类时应在毒气橱中进行，或戴上经水或苏打溶液浸湿的口罩及防护眼镜。稀释硫酸时，应 谨慎地将浓硫酸渐渐倾注水中，切不可把水倾注浓硫酸中。被酸烫伤时可用大量水冲洗，然 后用 20苏打溶液洗拭。被氢氟酸烫伤时，先用大量冷水冲洗，后用5苏打溶液洗拭，再以甘油与氧化镁糊2 : 1的湿纱布包扎或到医院处理。 2氢氧化钠、氢氧化钾等碱类物质，均能腐蚀皮肤及衣服，浓氨水的蒸气能严重刺 激粘膜及伤害眼睛，使流泪并可能引发各种眼疾。被碱类烫伤时，应立即用大量水冲洗，然 后再用 2硼酸或醋

10、酸溶液冲洗。 3浓过氧化氢能引起烫伤，可用热水或硫代硫酸钠溶液敷治。苯酚有腐蚀性，使皮 肤呈白色烫伤，应立即将其除去，否那么引起局部糜烂，治愈极慢。 4溴能刺激呼吸道、眼睛及烧伤皮肤。烧伤处用25氨溶液 - 松节油 -95乙醇1 : 1 : 10的混合液涂敷处理。 5氰化钾、三氧化二砷、升汞、黄磷或白磷皆有剧毒，应严格按毒剧物有关规定保 存、取用，切勿误入口中，使用后应及时洗手。4用电平安 实验室中由于电线、电气设备损坏，或线路安装不妥，或使用不慎，或实验人员缺少用 电常识，易发生触电事故或火灾。实验室用电一般应注意： 1 定期检查电线、电器设备有无损坏，绝缘是否良好，电线和接头有无损坏。 2

11、使用电器时，先应认真阅读使用说明书，明确使用方法，不可盲目地接入电源。 3使用烘箱和高温炉时，必须确认自动控制温度装置的可靠性，同时还需人工定时 监测温度。 4不要将电器放在潮湿处，禁止湿手或沾有食盐溶液和无机酸的手接触电器，也不宜站在潮湿的地方使用电器。5正确操作闸刀开关，使闸刀处于完全合上或完全拉断的位置，不能假设即假设离，以 防接触不良造成漏电。禁止将电线头直接插入插座内使用。5. 玻璃仪器洗涤玻璃器皿， 应注意平安，以防划伤； 破损的玻璃器皿和碎片应放入平安的地方，切 勿乱丢乱放。第三节 原始记录与实验报告进入实验室要随身携带一本预先编好页码的实验记录本，用于及时、完整、确切地记录 原

12、始实验数据和现象，称为 “原始记录 。实验过程中应尊重实验事实，应直接将原始记录记 于实验记录本上，绝不允许记于纸条上、手上或其他地方再誉写，也不允许暂记在脑子里等 下一个数据一起记录。原始记录是实验报告的一局部，尊重原始记录是必要的科学作风。记 录本不准撕页， 如记录有误， 只能将写错处用双线划去 但要求仍能看清原来写错的数值 在其旁写上正确数据，千万不得涂改，涂改的原始记录无效。记录内容一般包括供试药品名 称、来源、批号、数量、规格、外观性状、包装情况、实验中观察到的现象、检验数据等。 记录实验数据时，保存几位有效数字应和所用仪器的准确程度相适应。学生结束实验时，应向教师出示有关实验结果和

13、原始记录，教师在原始记录本上签字认 可后，实验才能真正完毕。应根据原始记录，写出实验报告。实验报告应包括实验名称、实 验日期、实验目的、实验原理、操作步骤、实验数据的处理及结果、问题及讨论、结论等。第四节 实验考核方式?药物分析实验?课程主要考核学生是否具有：1良好的实验习惯，严谨求实的科学态度和工作作风， 大胆创新和积极发现问题、 提出问题、 分析问题和解决问题的精神和能 力； 2团结协作精神； 3良好的实验动手能力； 4数据处理与文字表达能力。平时成绩占 70%，期末考试成绩占 30%。平时成绩根据多元素给定，包括实验素养、实 验预习、 实验前答复以下问题、 原始记录、 实验操作能力、 设

14、计性实验的设计方案、 实验报告等； 期末考试包括笔试、 口试、实际操作，采取学生随机抽取实验内容，当堂完成实验并写出实 验报告， 当堂公布评分标准和实验成绩的方式。 具体实施细那么可参考 ?武汉大学药学院实验 课考核规定?。第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验是根据药物的分子结构、 理化性质， 采用化学、 物理化学或生物学方法 来判断药物的真伪。 它是药品质量检验工作的首要任务， 只有在药物鉴别无误的前提下， 药 物的杂质检查和含量测定才有意义。 中国药典和世界各国药典所收载的各药品项下的鉴别方 法，均是用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为标签所标示的药物， 而不是对未知药物 进行定性分析。

15、药物的鉴别试验工程包括性状、 一般鉴别试验和专属鉴别试验。 一般鉴别试验是以某些 类别药物的共同化学结构为依据。 根据其相同的物理化学性质来进行药物真伪的鉴别， 以区 别不同类别的药物。 而专属鉴别试验， 那么是在一般鉴别试验的根底上， 利用各种药物的化学 结构差异， 来鉴别药物， 以区别同类药物或具有相同化学结构局部的各个药物单体，到达最终确认药物真伪的目的。药物的鉴别方法可以分为化学法、光谱法、色谱法和生物学法。前两者最为常用，化学法主要包括呈色反响、沉淀生成反响、荧光反响、 气体生成反响等鉴别方法，而光谱法常用 的是紫外光谱鉴别法和红外光谱鉴别法。常常采用化学法与光谱法相结合来同时鉴别药

16、物。 每种药品一般选用 24 种方法进行鉴别，相互取长补短。实验一 典型药物的鉴别试验一、实验目的1了解药物鉴别试验的目的和特点。2掌握药物的常用化学鉴别方法及其影响因素。3掌握紫外光谱鉴别法和红外光谱鉴别法。4判断有标签容器中的苯巴比妥、 对氨基水杨酸钠、 维生素 B1 片和注射用硫酸链霉素 的真伪。二、根本原理一苯巴比妥的化学鉴别1银盐反响： 巴比妥类药物在适当的碱性溶液中，遇过量硝酸银试液，即产生白色的二银盐沉淀。2. 铜盐反响：因巴比妥类药物分子中含有 -CONHCONHCO-基因，可互变异构成烯醇型，与铜盐在碱性溶液中作用，产生类似双缩脲的颜色反响。与硫酸铜、吡啶的反响式如下:RR+

17、 CuSO2NNH2+CuHO NR1R2NHN o-OORR+ SO42-Cu2 RiR2HO N3.亚硝酸钠-硫酸反响:含芳环取代基的巴比妥类药物，与亚硝酸钠-硫酸反响后，显橙黄色，其反响原理，可能是苯环上的亚硝基化反响。4甲醛-硫酸反响：含芳环取代基的本类药物，与甲醛 -硫酸反响显玫瑰红色，其反响 产物不明。二对氨基水杨酸钠的化学鉴别对氨基水杨酸钠水溶液加稀盐酸酸化后，在中性或弱酸性pH46条件下能与三氯化铁反响而显紫红色。OHpH 4-6+ 4FeCI3 -三维生素B1的化学鉴别硫色素反响为维生素 Bi所特有的专属反响，其反响式如下:NaOH开环*2OH-H2O环合h3c0-2 HCH

18、3CH2CH2OH硫色素四硫酸链霉素的化学鉴别1.坂口反响：系链霉素水解产物链霉胍的特征反响。硫酸链霉素水溶液加氢氧化钠试液，水解生成链霉胍；链霉胍、8-羟基喹啉分别与次溴酸钠的反响产物缩合生成橙红色化合物。反响式如下：nh2/2 BrO-N = CNH链霉胍NH2Br8-羟基喹啉NH 2NHBrOH -橙红色化合物2 .麦芽酚反响：系硫酸链霉素的特征反响。链霉素在碱性溶液中，链霉糖经分子重排形成六元环后，消除 N-甲基-L-葡萄糖胺及链霉胍生成麦芽酚a甲基-3羟基-y吡喃酮，麦芽酚与三价铁离子在微酸性溶液中形成紫红色配位化合物。反响式如下：CH3RH +Fe3+链霉素麦芽酚紫红色配位化合物五

19、影响化学鉴别的因素影响化学鉴别反响的因素主要有溶液的浓度、试剂的用量、溶液的温度、溶液的酸碱度、反响时间等，溶液的浓度主要是指被鉴别药物的浓度。溶液的浓度和各种试剂的用量一般是过量的。溶液的酸碱度应使各反响物有足够的浓度处于反响活化状态，使反响生成物处于稳定和易于观测的状态。一般，温度升高，化学反响速度会增加，但也可使生成物分解，导致 实验现象变得不明显，甚至观察不到阳性结果。有机反响的反响速度一般较慢，因此为使鉴别反响完成，需要一定时间。六紫外光谱鉴别法不同的有机药物由于含有能吸收不同紫外光的基团而显示特征紫外吸收光谱，可作为鉴别的依据。UV鉴别法简便，但 UV光谱的波长范围较窄、光谱简单、

20、平坦，曲线形状变化 不大，尤其是有机分子的吸收波长和强度主要取决于分子中的发色团、助色团及其共轭情况，与精细结构无关。因此，结构完全相同的化合物应有完全相同的吸收光谱，而吸收光谱完全相同的化合物却不一定是同一个化合物。UV鉴别法的专属性远不如 IR鉴别法，不能单独使用，应与其他方法配合，才能对药物的真伪做出鉴别。常用的UV鉴别方法有：1 .测定Anax或/和Anin2 规定一定浓度供试液在Anax处的吸收度3规定吸收波长和吸收系数法4规定吸收波长和吸收度比值法5经化学处理后，测定产物的UV特性七红外光谱鉴别法不同的有机药物由于含有能吸收不同红外光的基团而显示特征红外吸收光谱，可作为鉴别的依据。

21、IR光谱特征性强，专属性高，凡化学结构明确、组分单一的有机原料药物都可 用IR鉴别，尤其是适合于结构复杂、且结构非常相似的药物的区别。中国药典和英国药典 采用标准图谱对照法， 美国药典采用对照品法。 在实际操作中，可根据实际条件选用其中任一种方法。三、实验方法一苯巴比妥的鉴别1. 取供试品约50mg，加碳酸钠试液0.5ml与水5ml，振摇2min，滤过如不浑浊可不 必滤过，滤液中逐滴参加硝酸银试液，即发生白色沉淀，振摇，沉淀即溶解，继续滴加过 量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。2. 取供试品约50mg ,加吡啶溶液1宀10 5ml，溶解后，加铜吡啶试液 1ml，即显紫 色或生成紫色沉淀。3. 取本

22、品约10mg，加硫酸2滴与亚硝酸钠约 5mg,混合，即显橙黄色，随即转橙红 色。4. 取本品约50mg，置试管中，加甲醛试液 1ml，加热煮沸，冷却，沿管壁缓缓加硫酸 0.5ml，使成两液层，置水浴中加热，接界面显玫瑰红色。5. 本品的红外吸收光谱应与对照图谱一致。二对氨基水杨酸钠的鉴别1. 取本品约10mg,加水10ml溶解后，加稀盐酸2滴使成酸性，加三氯化铁试液1滴, 应显紫红色。2. 本品250mg，加1mol/L氢氧化钠溶液3ml溶解后，用水稀释至 500ml，混匀。精密 吸取该液 5ml 置于内含 12.5ml 磷酸盐缓冲液 pH 7的 250ml 量瓶中，用水稀释至刻度， 混匀。以

23、相同的缓冲液为空白溶液，测定 UV,分别在265nm和299nm波长处有最大吸收， 且A 265 /A 299比值应在1.501.56之间。3. 本品的红外吸收光谱应与对照图谱一致。三维生素 B1 片的鉴别1. 取相当于 5mg 维生素 B1 的本品细粉适量，加水搅拌，滤过，滤液蒸干后，加氢氧化钠试液2.5ml溶解，再加铁氰化钾试液 0.5ml与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分层， 上面的醇层显强烈的蓝色荧光； 加酸使成酸性， 荧光即消失； 再加碱使成碱性， 荧光又重现。2. 取相当于 5mg 维生素 B1 的本品细粉适量，加水搅拌，滤过，滤液蒸干后，先加氨 试液使成碱性，将析出的沉淀

24、滤过除去。取滤液，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸银试液， 即生成白色凝乳状沉淀；别离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。四注射用硫酸链霉素的鉴别1. 取本品约0.5mg,加水4ml溶解后，加氢氧化钠试液2.5ml与0.1% 8-羟基喹啉的乙 醇溶液1m1，放冷至约15C，加次溴酸钠试液 3滴，即呈橙红色。2 .取本品约20mg ,加水5ml溶解后，加氢氧化钠试液0.3ml，置水浴上加热5min，加硫酸铁铵溶液(取硫酸铁铵0.1g，加0.5mol/L硫酸溶液5m1使溶解)0.5ml，即呈紫红色。3. 本品的红外吸收光谱应与对照图谱一致。4本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反响。(1)取本品

25、水溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4白色沉淀；别离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。(2)取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4白色沉淀；别离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。四、实验指导1苯巴比妥的铜盐反响中，样品量要足够50mg。亚硝酸钠-硫酸反响中，应采用枯燥试管或白色点滴板。甲醛 -硫酸反响中，操作须细心，滴加硫酸时要慢，并且沿管壁参加， 方能成两液层；然后放入刚煮沸过的水浴中，静置加热，时间应足够(约12min)，那么可得界面玫瑰红色。2. UV鉴别法的考前须知：(1) 由于常需采用规定波长、吸收度、吸收系数等的比对，故测定时应注意仪器的波 长、吸光度精度须符合要求。(

26、2) 对于吸收带很窄的药物，应考虑仪器狭缝对测定结果的影响。(3) 根据药物的溶解性，选择适宜的溶剂，不溶于水的药物常采用甲醇、乙醇或水- 醇混合溶剂；当采用有机溶剂时，要注意溶剂的吸收波长是否对该鉴别波长产生干扰。(4) 为了增加药物的溶解度或稳定性，或需要其在一定pH条件下产生相应的特征吸 收，常常在溶剂中参加一定浓度的酸、碱或缓冲液。3. IR鉴别法的考前须知：(1) 样品的纯度应大于 98%，应不含水分。(2) 空白片光谱图的基线应大于75%透光率；除在3440cm 一1及1630 cm '附近因残留或附着水而呈现一定吸收峰外，其他区域不应出现大于基线3 %透光率的吸收谱带。(

27、3) 有机碱盐酸盐采用溴化钾压片时，可能发生复分解反响 (B HCI + KBr宀B HBr + KCl )，此时可采用氯化钾压片，并比拟氯化钾压片和溴化钾压片法的光谱，假设二者没有区别，那么仍使用溴化钾压片。(4) 供试品研磨应适度，以粒度 25m为宜。过度研磨可能导致晶格结构被破坏或晶 型转化。粒度不够细那么易引起光散射能量损失，整个光谱基线倾斜，甚至严重变形。5压片法制成的片厚宜在 0.5mm 以下，否那么可观察到干预条纹，干扰供试品光谱。6样品扫描速度应与波长校正的条件一致， 因为快速扫描将使波长滞后。 制成图谱的最强吸收峰透光率应在10以下。 7 药物制剂采用IR 法鉴别时，应对供试

28、品进行前处理，以除去辅料的干扰。五、思考题1药物鉴别试验的目的和特点分别是什么？2影响化学鉴别反响的因素主要有哪些？3紫外光谱鉴别法、红外光谱鉴别法各有什么特点？第三章 药物的杂质检查药物的检查包括四大方面，分别是有效性、均一性、 平安性和纯度要求。 药物的纯度是 指药物的纯洁程度， 药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素。因此， 药物的纯度检查即是指药物的杂质检查。根据药物中杂质存在的广泛程度可分为一般杂质检查及特殊杂质检查。 一般杂质是在大多数药物的生产和贮藏过程中都容易引入的杂质， 如氯化物、 硫酸盐、铁盐、 重金属、 砷盐、 炽灼残渣、 残留溶剂等， 而特殊杂质是各个药物中可能存在的原料

29、、 中间体、 降解物、 异构体、 副反响产物等， 是该药在生产和贮藏过程中有可能引入的仅属该药特有的 一些杂质。对于药物中所存在的杂质， 在不影响疗效、 不产生毒性和保证药物质量的前提下， 允许 药物中含有一定量的杂质。 杂质的限量一般根据杂质的平安性、 生产的可行性、 产品的稳定 性等综合考虑而定。药物中杂质限量的控制方法一般分两种：一种为限量检查法 limit test ，另一种是对 杂质进行含量测定。限量检查法通常不要求测定其准确含量，只需检查杂质是否超过限量。 进行限量检查时，多数采用标准溶液对照法， 此外，还可采用灵敏度法和比拟法。 标准溶液 对照法系指取一定量的被检杂质标准溶液和一

30、定量供试品溶液， 在相同的条件下试验， 比拟 结果，以确定杂质含量是否超过限量。由于供试品S中所含杂质的最大允许量可以通过杂质标准溶液的浓度C和体积V的乘积表达，所以，杂质限量 L 的计算公式为：杂质限量=杂质标准溶液浓度供试品量体积100%或 L*1°°%采用对照法须注意平行操作原那么，即供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下反应，如参加的试剂、反响的温度、放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性。灵敏度法系指在供试品溶液中参加一定量的试剂，在一定反响条件下，不得有阳性结果出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定。该法不需用杂质标准品溶液比照。如孚酸lactic

31、 acid 中枸橼酸、草酸、磷酸或酒石酸的检查：取本品0.5g加水适量使成5ml，混匀，用氨试液调至微碱性，加氯化钙试液1ml，至水浴中加热 5min，不得产生浑浊。比拟法系指取供试品一定量依法检查，测定特定待检杂质的特征参数如：吸光度等与规定的限量比拟，不得更大。如利巴韦林ribovirin 中吸光度的检查：取本品 1.0g，加水25ml溶解后，在430nm波长处测定吸光度，不得大于 0.02。又如维生素 B?中检查感光 黄素，利用维生素 B2几乎不溶于氯仿，而感光黄素溶于氯仿的性质，用无醇氯仿提取供试品中的感光黄素，在 440nm波长处测定氯仿液的吸光度，不得超过0.016。实验二药物的一

32、般杂质检查-五种无机杂质的检查一、实验目的1 掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属和砷盐限量检查的根本原理和方法。2 掌握杂质的限量计算方法。3了解无机杂质检查的意义。二、根本原理无机杂质可能来源于生产过程，如生产过程中使用的仪器、原料、枯燥试剂、过滤辅助器，反响试剂、催化剂、助滤剂、活性炭等，它们一般是的和确定的。由于许多无机杂 质直接影响药品的平安性和稳定性，并可反映生产工艺本身的情况，了解药品中无机杂质的存在状况对评价药品的生产工艺、保证药品平安、稳定具有重要意义。1氯化物检查药物中微量的氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银作用，生成的氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量标准氯化钠溶液10卩g C

33、l/ml与硝酸银在同样条件下生成的氯化银浑浊程度相比拟，判定供试品中氯化物是否符合限量规定。Cl AgNO . AgCI JL2. 硫酸盐检查药物中微量的硫酸盐在稀盐酸酸性溶液中与氯化钡反响，生成的硫酸钡微粒显白色浑 浊，与一定量标准硫酸钾溶液100卩g SQ27ml 在相同条件下产生的硫酸钡浑浊程度比拟， 判定供试品硫酸盐是否符合限量规定。2SQ4 BaCI 2 、BaSQ4、“3. 铁盐检查中国药典和美国药典均采用硫氰酸盐法。铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸盐作用生成红 色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量标准铁溶液硫酸铁铵，FeNH4 SQ4 2 12H2Q用同法处理后进行比色。Fe3+ +

34、nSCN - t Fe SCN n n - 3n=1 6在酸性条件下反响，可防止 Fe3 +的水解。参加氧化剂过硫酸铵既可氧化供试品中Fe2 +成Fe3*,同时可防止由于光线使硫氰酸铁复原或分解褪色。某些药物如葡萄糖、糊精、硫酸镁等在检查过程中需加硝酸处理，硝酸也可将Fe2+氧化成Fe3+，因此这些药物的铁盐检查可在硝酸酸性溶液中进行。因硝酸中可能含亚硝酸， 它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化物，影响比色，所以剩余的硝酸必须加热煮沸除去。HNQ2 SCN- H > NO SCN 出04. 重金属检查重金属系指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫代钠作用而显色的金属杂质，如银、铅、 汞

35、、铜、镉、铋、锑、锡、砷、锌、钻、镍等。因为在药品生产中遇到铅的时机较多，且铅 易积蓄中毒，故作为重金属的代表，以铅的限量表示重金属限度。中国药典2005收载了四种重金属检查方法。其中，硫代乙酰胺法的原理如下：硫代乙酰胺在弱酸性条件下pH 3.03.5水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色 到棕黑色的硫化物混悬液，与一定量标准硝酸铅溶液经同法处理后所呈颜色比拟，判定供试品中重金属是否符合限量规定。CH3CSNH2 H2Q > CH 3CQNH 2 H2SPb2 H2S > PbS -5. 砷盐检查中国药典2005收载的古蔡氏Gutzeit法检查砷盐的原理是：金属锌与酸作用产生新生态

36、的氢，与药物中微量砷盐反响生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比拟，判断供试品中重金属是否符合限量规定。As3Zn 3H > 3Zn2AsH 3AsO；一 3Zn 9H > 3Zn23H2O AsH3AsH 3 3HgBr2 > 3HBr AsHgBr 3黄色2AsHgBr 3 AsH 3 > 3AsH HgBr 2棕色AsHgBr3 ASH3 > 3HBr As2Hg3黑色五价砷在酸性溶液中也能被金属锌复原为砷化氢，但生成砷化氢的速度较三价砷慢，故在反响液中参加碘化钾及氯化亚锡将五价砷复原为三价砷，碘化钾被氧化

37、生成的碘又可被氯化亚锡复原为碘离子，后者与反响中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反响不断进行。AsO：一 21 一 2H J AsO3一 I2 H2OAsO； Sn2 2H ； AsO, Sn4H2OI2 Sn2?21 - Sn441 一 Zn2ZnJ2 氯化亚锡与碘化钾还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑。 在试验条件下，100 锑存在也不致干扰测定。氯化亚锡又可与锌作用，在锌粒外表形成锌 锡齐，起去极化作用，从而使氢气均匀而连续地发生。锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸

38、铅棉花吸收硫化氢。用醋酸铅棉花60mg,装管高度约60mm80mm，以控制醋酸铅棉花填充的松紧度，使既能免除硫化氢的干扰100 gS2-存在也不干扰测定，又可使砷化氢以适宜的速度通过。三、实验方法葡萄糖中五种无机杂质的检查。1氯化物取本品0.30g，加水溶解使成12.5ml 溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性，再加稀 硝酸5ml;溶液如不澄清，应滤过；置25ml纳氏比色管中，加水使成约 20ml，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液 10Cl-/ml 3.0ml，置25ml纳氏比色管中，加稀硝酸5ml , 加水使成约20ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别参加硝酸银试液 0.

39、5ml，用水稀释使成25ml，摇匀，在暗处放置 5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向 下观察、比拟、供试溶液不得比对照溶液更浓 0.010%。2硫酸盐取本品1.0g，加水溶解使成约 20ml 溶液如显碱性，可滴加盐酸使成为中性；溶液 如不澄清，应滤过；置 25ml 纳氏比色管中，加稀盐酸 1ml ，摇匀，即得供试溶液。另取标 准硫酸钾溶液100SO42-/ml 1.0ml，置25ml纳氏比色管中，加水使成约20ml，加稀盐酸 1ml ，摇匀，即得对照溶液，于供试溶液与对照溶液中，分别参加25%氯化钡溶液 2.5ml，用水稀释使成 25ml ，充分摇匀，放置 10分钟，同置黑色背景上，从比色管

40、上方向下观察、 比拟、供试溶液不得比对照溶液更浓0.010%。3铁盐取本品1.0g，加水10ml溶解后，加稀硝酸 2滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使 成23ml，加硫氰酸铵溶液30 100 2ml，摇匀，如显色、与标准铁溶液10Fe3+/ml1.0ml 经相同方法制成的对照溶液比拟，不得更深 0.001%。4重金属取25ml纳氏比色管两支，甲管中加一定量的标准铅溶液10Pb2+/ml与醋酸盐缓冲液pH3.5 1ml后，加水稀释成 12.5ml。取本品2.0g，置于乙管中，加水 11.5ml溶解后， 加醋酸盐缓冲液Ph3.5 1ml ;假设供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它

41、无干扰的有色溶液， 使之与乙管一致； 再在甲、 乙两管中分别加新鲜配制的硫代乙酰胺试液 各1ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比拟， 不得更深含重金属不得过百万分之五。5砷盐取本品2.0g置试砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液 0.5ml,置水 浴上加热约 20 分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时 补充蒸散的水分，放冷，加浓盐酸5ml 可改为加稀盐酸 1: 1 10ml与水适量使成28ml, 加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液 5滴。在室温放置10分钟后，加锌粒2g 锌粒和锌 粉各1g,迅速用试砷管塞紧

42、瓶塞试砷管上已置装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸，并在 2540C的水浴中反响 45分钟，取出溴化汞试纸，将生成的砷斑与一定量标准砷溶液制成 的标准砷斑进行比拟，颜色不得更深，应符合规定 0.0001%。标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液1呃/ml 2ml，置试砷瓶中，加浓盐酸 5ml与蒸馏水21ml 可改为：加稀盐酸1: 1 10ml和蒸馏水16ml，再加碘化钾试液 5ml与酸 性氯化亚锡试液 5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g 锌粒和锌粉各1g，迅速用试砷管塞紧瓶塞试砷管上已置装有醋酸铅棉花及溴化汞试纸，并在2540C的水浴中反响45 分钟，取出溴化汞试纸，观察标准砷斑。四、实验指导1纳氏比

43、色管的选择与洗涤：比色或比浊操作，一般均在纳氏比色管中进行，因此在 选用比色管时， 必须注意使样品管与标准管的体积相等， 玻璃色质一致， 最好不带任何颜色， 管上的刻度均匀，如有差异，不得相差2mm。比色管洗涤时防止用毛刷或去污粉等洗刷，以免管壁划出条痕影响比色或比浊。2平行原那么：比色、比浊、砷盐检查时，样品液与标准液的实验条件应尽可能一致， 平行操作。3严格按操作步骤进行实验，注意各种试剂的参加次序。如氯化物检查时，加适量蒸 馏水使成约 20ml 后，再加 AgNO 3 试液。4比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀，主要利用手腕转动360°的旋摇操作来完成；比色方法是将两管同置于

44、白色背景上， 从侧面观察； 比浊方法是将两管同置于黑色或白 色背景上，自上而下观察。5重金属检查中，应注意： 1根据杂质限量计算公式，计算出标准铅溶液的取用量。2样品管中 加水11.5ml溶解后，加醋酸盐缓冲液pH3.51ml，实验时应采用 加 水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液 pH 3.51ml，再加水使成12.5ml，更便于操作。加醋酸 盐缓冲液前， 注意比拟样品管与标准管的溶液颜色， 假设样品管带色， 应在标准管中滴加少量 稀焦糖溶液，使两管的颜色一致，然后依法操作。如在标准管 甲管 中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时， 可取该药品项下规定的二 倍量的供试品和试液，加水使成15ml，将溶液分

45、成甲乙二等分，乙管中加水稀释成12.5ml;甲管中参加硫代乙酰胺试液 1ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜孔径 3呵滤过，然后甲管 中参加一定量的标准铅溶液，加水使成12.5ml，再分别在乙管加硫代乙酰胺试液1ml，甲管中加水1ml，依法比拟，即得。 3标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜配制，以防止铅的水解而造成 误差。6砷盐检查中，应注意： 1所用的标准管与样品管应力求一致，试砷管的长短、内径一定要相同，以免生成的色斑大小不同，影响比色。2预先安装好试砷管。醋酸铅棉花用于吸收硫化氢锌粒及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中即产生硫化氢，从而免除了与溴化汞作用生成硫化汞色斑的干扰。3

46、锌粒的大小以通过 20 目筛为宜，过细那么作用太快，过粗那么作用太慢，为此可采用 锌粒与锌粉各一半参加的方式。4加锌粒后，应立即将试砷管盖上，塞紧，以免AsH 3气体逸出。五、思考题1比色、比浊操作应遵循的原那么是什么?2试计算葡萄糖重金属检查中标准铅溶液的取用量。3古蔡氏试砷法中所加各试剂的作用是什么?4根据样品取用量、杂质限量及标准砷溶液的浓度，计算标准砷溶液的取用量。实验三 药物的一般杂质检查 残留溶剂的检查一、实验目的1掌握药品中残留有机溶剂的分类和检查方法。2熟悉残留有机溶剂检查的一般操作要求。二、根本原理一残留溶剂及其分类药品中的残留溶剂是指在原料药或辅料的生产中， 以及在制剂的制

47、备过程中使用， 但在 工艺过程中未能完全除去的有机溶剂，属于一般杂质。中国药典2005按有机溶剂毒性的程度将残留溶剂分为三类： 一类有机溶剂毒性较大， 且具有致癌并对环境有害， 应尽量防止 使用；二类有机溶剂对人有一定毒性，应限量使用；三类有机溶剂对人的健康危险性较小， 因此推荐使用。 除另有规定外，第一、二、三类溶剂的残留量应符合中国药典的规定；对 其它溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品标准、 GMP 或其它基 本的质量要求。二残留溶剂的检查方法ChP 2005年版规定残留溶剂的检查方法为 GC 法。既可采用填充柱，也可采用毛细 管柱，检测器通常使用火焰离子化检测器FI

48、D ，对含卤素元素的残留溶剂如氯仿等，采用电子捕获检测器ECD，可得到高的灵敏度。采用FID时需加尾吹气，因为毛细管柱的柱内载气流量太低常规柱为15ml/min ，不能满足检测器的最正确操作条件，所以使用毛细管柱时要采用辅助气 尾吹气，在色谱柱后增加一路载气直接进入检测器图3-1,就可保证检测器在高灵敏度状态下工作，尾吹气的另一个重要作用是消除检测器死体积的柱外效应。一般情况下，氮气尾吹气+载气、氢气和空气三者的比例接近或等于1:1:10时，FID的灵敏度最高。6图3-1毛细管气相色谱流程图1载气瓶；2压力调节器；3净化器；4.稳压阀；5.柱前压力表；6注射器；7进样器；8检测器；9数据记录系

49、统；10.柱恒温箱；11.尾吹气.1. 系统适用性试验1 用待测物的色谱峰计算，填充柱法的理论板数一般应大于1000/柱；毛细管色谱柱 的理论板数一般应大于 5000/柱。2 色谱图中，待测物色谱峰与其相邻的色谱峰的别离度应大于1.5 ；3 以内标法测定时，对照品溶液连续进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD应不大于5%;假设以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD应不大于10%。2. 供试品溶液的制备1 顶空进样：精密称取供试品0.1-1g。通常以水为溶剂；对于非水溶性药物，可采用N,N-二甲基甲酰胺DMF 或二甲基甲砜DMSO 或其他适宜溶剂；根据供试品和待 测溶剂的溶解度，选择适宜

50、的溶剂且应不干扰待测溶剂的测定。根据品种正文中残留溶剂的限度规定，配制供试品溶液，使其浓度满足系统定量测定的需要。2溶液直接进样：精密称取供试品适量，用水或适宜的有机溶剂使溶解；根据品种 正文中残留溶剂的限度规定，配制供试品溶液，使其浓度满足系统定量测定的需要。3. 对照品溶液的制备精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液。假设为限度测定时，根据残留溶剂的限度规定来确定对照品溶液的浓度； 假设为定量测定，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。

51、必要时应重新调整供试品溶液和对照品溶液的浓度。4. 测定法普通的填充柱采用溶液直接进样法测定，毛细管色谱柱采用顶空进样方法测定。 不适宜顶空进样法测定的残留溶剂有甲酰胺、2甲氧基乙醇、2乙氧基乙醇、乙二醇、 N-甲基咯烷酮(在酸性环境中)。(1) 第一法 毛细管柱顶空进样等温法本法适用于被检查的有机溶剂数量不多，并 且极性差异较小的情况。色谱条件：柱温为40100C；常以氮气为载气，流速为1.02.0ml/mi n ;以水为溶剂时， 顶空瓶平衡温度为7085 C,顶空瓶平衡时间3060min ;进样口温度为200 C ;如采用FID 检测器，温度为250Co测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别

52、连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。(2) 第二法毛细管柱顶空进样程序升温法本法适用于所需要检查的有机溶剂数量 较多并且极性差异较大时的情况。色谱条件：如为非极性色谱系统，柱温先在30 C维持7min，再以8C /min的速度升至120C，维持15min ;如为极性色谱系统，柱温先在60C维持6min，再以8C /min的速度升温速率升至100C，维持20 min ;以氮气为载气，流速为 2.0ml/min ;以水为溶剂时，顶空瓶平 衡温度7085C，顶空瓶平衡时间3060min ;进样口温度为200C ;如采用FID检测器，温 度为250 C。具体到单个药品的残留溶剂检查时，可根据该品种

53、项下的残留溶剂种类调整程序升温程序。测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。(3) 第三法溶液直接进样法可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。测定：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样2-3次，每次21，测定待测峰的峰面积。5计算法限度检查：以内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比的平均值不得大于对照品溶液的相应比值的平均值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积的平均值不得大于对照品溶液的相应峰面积的平均值。定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。、实验方法地塞米松磷酸钠中甲醇与丙酮的检查除按正丙醇计算的理论板数应大于

54、 700 外，其他系统适用性试验应满足规定要求。取本品约0.16g,精密称定，置10ml量瓶中，精密加0.1% ml/ml 正丙醇内标物质 溶液2ml，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密量取甲醇10卩1相当于7.9mg与丙酮100卩1相当于79mg，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量 取1ml，置10ml量瓶中，精密加内标溶液 2ml，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 取供试品溶液和对照品溶液，照第三法，用直径为0.25mm0.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球色谱柱填充柱在柱温 150 C测定。含丙酮不得过 0.5% g/g, 甲醇不得过 0.3%

55、g/g 。四、实验指导供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解物与待测物的保存值相同共出峰 ；或热降解产物与待测物的结构相同 如甲氧基热裂解产生甲醇 。当测定的有机溶剂残留量超出 限度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用时，应通过试验排除干扰作用的存在。 对第一类干扰作用， 通常采用在另一种极性相反的色谱系统中 对相同样品再进行测定， 比拟不同色谱系统中测定结果的方法。 如二者结果一致， 那么可以排 除测定中有共出峰的干扰； 如二者结果不一致， 那么说明测定中有共出峰的干扰。 对第二类干 扰作用，通常要通过测定不含该溶剂的对照样品来加以判断。假设残留溶剂为含氮碱性化合物， 由于普通气相色谱仪的不锈钢管路、 进样器的衬管等