08分生思考题大字

1、丁 一1. 乳糖操纵子 含有三个结构基因，半乳糖苷酶：催化乳糖分解为葡萄糖和半乳糖； 半乳糖苷透过酶：促进乳糖转运入细菌；硫代半乳糖苷转乙酰基酶，三个基因的上游 只有一个共同的启动子Piac。此外，在启动子的下游和上游还分别有操纵序列Oiac和CAP结合位点，这三者共同构成了乳糖操纵子的调控区，这一区域是控制结构基因是否 转录的开关在乳糖操纵子的上游还有一个调节基因I，其编码产物是lac阻遏蛋白，在没有诱导剂的情况下，阻遏蛋白可与操纵序列特异结合并阻止结构基因的转录。 乳糖操纵子的转录起始是由CAP和阻遏蛋白两种调控因子来控制。CAP起正调控作用。2. 真核基因组的特点. DNA量大。. 真核

2、细胞的编码基因大多是不连续的，由外显子和内含子镶嵌排列而成。外显子(exon)：为蛋白质氨基酸编码的DNA序列。内含子(intron)：插入到编码序列之间的非编码序列。 内含子功能: 含调控序列，参与基因表达。 不同的剪接，产生不同的产物。 提供变异机会，与进化有关。. 真核生物DNA中含有大量重复序列。重复序列：在基因组中多次反复出现的DNA序列，按其出现的频率可分为低度、中度(103-104)和高度(106)重复序列，出现原因：基因的多拷贝。与染色质的构像、着丝点形成有关。参与表达调控，染色质DNA的“区间性”。. 不存在操纵子结构。3. 真核基因转录前表达调控的方式是发生在基因组水平上的

3、基因结构的改变。包括：基因丢失：体细胞分化过程中，必须将某些基因永久性关闭。最简单有效的方式将这些基因丢失。基因扩增：发育分化、环境条件的改变，对某些基因产物的需要量急剧增加增加该基因的拷贝数。不适当的基因扩增，可导致肿瘤的发生基因重排：某些基因片段改变原来存在的顺序重新排列组合。甲基化修饰：DNA甲基化可引起构象、稳定性和染色质结构的改变，并影响DNA与蛋白质的相互作用，抑制基因的转录。抑制取决于甲基化CpG的密度和启动子的强度，转录活跃的基因是低甲基化或不甲基化，而不表达基因的则高度甲基化。染色质结构：DNA+HP+NHP+RNA4. 顺式调控元件(cis-acting element,

4、CAE)与结构基因串联的特定的DNA序列。包括启动子、增强子、沉寂子、加尾信号。1）启动子(promoter)：与基因转录启动有关的核心序列。启动子包括核心启动子和上游启动子元件。核心启动子（core promoter)： 足以使RNA聚合酶转录正常起始所必需的、最少的起始子(initiator)。TATA盒功能有3：决定了转录的精确起始；介导转录起始复合物的形成；产生基础水平的转录。上游启动子元件(upstream promoter element, UPE)： 包括CAAT盒和GC盒，提高转录效率。（2）增强子(enhancer)：位于-200-300bp区域，由多个独立的、具有回文结构的

5、核苷酸组成，以单拷贝或多拷贝的形式存在。促进基因转录活性。特点：具有组织特异性。无基因特异性。无方向性。远距离作用。具有相位性。（3）沉寂子(silencer) :抑制基因转录。CD4/CD8基因在胸腺中受到沉寂子对其细胞亚型和成熟过程特异性的选择表达。（4）加尾信号：在poly A尾位点上游10-20bp 处，常见1保守的AATAA序列，如去除此序列，基因会连续转录下去而不终止。5. RNA“编辑” (RNA editing):是RNA分子上的一种修饰，通过核苷酸插入、缺失、替换，使信息改变，产生氨基酸序列不同的多种蛋白质，以扩大遗传信息，提高生物适应。6. 反式作用因子的结构由位于不同染色

6、体或同一染色体上相距较远的基因编码的蛋白质因子。反式作用因子的结构：一个完整的反式作用因子含有2个必不可少的结构域，即DNA结合结构域(DNA binding domain)和转录活化结构域(trans-activating domain)。反式作用因子通过前者与DNA特定序列结合，通过后者发挥转录活化功能。组织特异性转录因子常常只具有2个结构域之一，因此其仅仅在那些提供了其缺失部分蛋白质的细胞中互补为具有2个结构域的DBP，才能发挥作用。（1）DNA结合结构域锌指结构域(zinc finger motif)：最常见、最普通。结合特异性可能由位于指状结构基部的非保守氨基酸决定。同源盒结构域(h

7、omodomain, HD)：同源盒(homebox)：同源盒基因家族各基因间均有1相同的保守序列（约183bp），称同源盒。同源盒结构域(homodomain, HD)：同源盒产物蛋白中所具有的1非常相似的结构域。亮氨酸拉链(leucine zipper)：通过该结构域可形成同源或异源二聚体，二个分子螺旋的亮氨酸一侧是形成二聚体的基础，形同拉链。 碱性螺旋袢螺旋：底部的DNA结合螺旋（单体的N-末端）被非螺旋的袢所分隔。（2）转录活化结构域：酸性螺旋结构域(acidic -helix domain)：含有较多负电荷，并能形成亲脂性螺旋。富含谷氨酰胺结构域。富含脯氨酸结构域。反式作用因子的作用

8、机制：（1）转录因子相互作用：转录因子的协同结合通过HMG1促进，引起的增强子序列的弯曲是增强体形成的关键。（2）竞争性排除组蛋白：序列特异性转录因子与转录起始复合物稳定结合，可竞争性地排除组蛋白，阻断其对转录的抑制作用。（3）与核基质蛋白作用：某些转录因子的活化区域与核基质结合，将基因锚定于那些具有其他转录因子及随后过程所必需因子的区域，促进基因转录。（4）DNA解旋作用：某些转录因子(TFH)具有DNA解旋酶的作用，在转录起始点使DNA双螺旋解旋。1. 衰老细胞的特征。一.衰老细胞的生物学特征。（1）细胞阻滞于G1期，无法进入S期。 （2）不可逆丧失对有丝分裂原的反应能力。（3）调控细胞生

9、长的关键基因的表达发生变化， 正向转录因子抑制，负向调控因子过量表达。（4）细胞的功能“脱分化”。 （5）发生凋亡的能力下降。二.衰老细胞的形态学特征。 (1) 细胞核增大，核内出现包含物，核膜内陷，染色质凝聚。 （2）细胞质内色素积累。（3）线粒体数目减少，体积增大。（4）Golgi体囊泡肿胀，并出现扁平囊泡断裂崩解，分泌及运输功能衰退。内质网排列无序，膜腔扩大甚至崩解，膜上核糖体数量减少。（5）细胞膜流动性减低，干扰了膜蛋白的正常结构与功能。2. 端粒与端粒酶。端粒(telomere)：由几百个简单无信息的重复序列构成的3端凸出的特殊结构。功能：1.保护染色体末端。 2.防止染色体复制时末

10、端丢失，导致染色体断端融合。 3.固定染色体的位置。端粒DNA附着于核基质。端粒酶(telomerase)：一个自带引物的逆转录酶，由酶蛋白和RNA组成，含有1个159nt的RNA部件，该部件含有与端粒d(TTGGGG)重复序列互补的(AACCCCAAC)序列。3. 错配修复基因。属于管家基因，可查出并纠正DNA复制及DNA损伤过程中未配对的碱基，保证复制和重组的精确性。邢 文 英1.G蛋白、一般是指与膜受体偶联的异三聚体G蛋白, 由、三种亚基组成 。分子量100kD左右。蛋白在结构上没有跨膜蛋白的特点，它们通过对其亚基上氨基酸残基的脂化修饰作用将G蛋白锚定在细胞膜内侧。其主要类型有Gs、Gi

11、、Gq、Gt等。2.SH2结构域、由约100个氨基酸残基组成，介导信号分子与含磷酸酪氨酸蛋白分子的结合。这种结合依赖于酪氨酸残基的磷酸化及其周围的氨基酸残基所构成的基序（motif）。 3.SH3结构域、由约50100个氨基酸残基组成，介导信号分子与富含脯氨酸的蛋白分子的结合，其亲和力与脯氨酸残基及邻近氨基酸残基所构成的基序序列相关。4.JAK、 是胞质内的一类非受体酪氨酸蛋白激酶家族，已发现有4个成员，即JAK1、JAK2、JAK3及TYK2。其结构不含SH2 、SH3，C端具有两个相连的激酶区， N端的几个结构区段无酶活性，可能在受体蛋白与JAK偶联中发挥作用。5.STAT又称为信号转导子

12、和转录激活子，具有信号传递和转录因子双重功能。包括STAT1STAT6， STAT的C末端有SH2结构域，而且有一保守的酪氨酸位点，该位点被激活的JAK磷酸化，使STAT活化。二、问答：1.简述G蛋白跨膜传递信息的机制当受体未与配体结合时，G蛋白的三个亚基呈聚合状态，亚基与GDP结合，无活性。当受体与配体结合时，活化的受体将导致G蛋白亚基释放它原来结合的GDP，代之以GTP，从而使G蛋白激活。活化的G蛋白三聚体解离成G-GTP和G两部分，不再和受体结合。通常由G-GTP（有时由G）结合并激活（或抑制）质膜中的某种酶，这种酶产生第二信使。G具有GTP酶的活性，把它所结合的GTP水解成GDP和Pi

13、，从而使G失活，然后再与G亚基结合生成无活性G·GDP，受体的作用终止。 在动物细胞中，G蛋白偶联受体改变细胞内第二信使浓度的途径主要有两条：一是cAMP途径，通过G蛋白作用于腺苷酸环化酶，调节cAMP的产生。二是IP3、DG和 Ca2+途径，通过G蛋白作用于磷脂酶C，产生中介信使分子IP3和DG，从内质网释放Ca2+。2.举例说明cAMP信号传递途径、cAMP信号传递途径：在骨骼肌细胞中，糖原的合成和降解均受肾上腺素的调节。当动物恐惧或紧张时，肾上腺分泌肾上腺素。当受体与配体结合时，活化的受体将导致G蛋白亚基释放它原来结合的GDP，代之以GTP，从而使G蛋白激活。活化的G蛋白三聚体

14、解离成G-GTP和G两部分，不再和受体结合。G-GTP（有时由G）结合并激活腺苷酸环化酶，使胞内cAMP浓度增加。细胞内cAMP浓度的突然迅速增加，可激活PKA ，活化的PKA催化将ATP末端磷酸基团转移到靶蛋白特异位点的Ser/Thr残基上，从而调节与糖代谢有关的靶蛋白的活性。比如，磷酸化糖原合成酶，引起糖原合成抑制；磷酸化糖原磷酸化激酶，后者使糖原磷酸化酶活化，使糖原磷酸化分解活化。3.试述RPTKRas信号传递途径EGF受体在膜上以无活性的单体形式存在，配体EGF与受体结合并引起构象变化，导致受体二聚化，激活受体本身的酪氨酸蛋白激酶活性，发生自身磷酸化。Tyr残基和其周围的氨基酸残基构成

15、一个信号结构域，它可与具有SH2结构域的靶蛋白结合传递信息。自身磷酸化的RTK磷酸化Grb2和SOS，使其活化，进而激活Ras蛋白。在Ras蛋白下游的蛋白激酶激酶级联系统中，信号蛋白依次是：Raf蛋白，又名MAPKKK。MEK蛋白：又名MAPKK。MAP激酶：即MAPK。MAPK的靶蛋白。4. 简述JAK-STAT信号传递途径。答：JAK-STAT途径：（1）配体与受体结合导致受体二聚化；（2）二聚化受体激活JAK；（3）JAK将STAT磷酸化；（4）STAT形成二聚体，暴露出入核信号；（5） STAT进入核内，调节基因表达。名词：1.cyclin box各类周期蛋白均含有一段约100个氨基酸

16、的保守序列，称为周期蛋白盒(cyclin box),介导周期蛋白与CDK结合。2.R点(restriction point) G1/S检验点在哺乳动物中称R点(restriction point)，控制细胞由静止状态的G1进入DNA合成期，相关的事件包括：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？问答：1. 简述细胞周期各时相cyclin的种类及作用。cyclin 的种类繁多，分别参与细胞周期中不同时相的调节。分为G1型、G1/S型S型和M型4类。G1期 细胞在生长因子的刺激下，G1期cyclin D表达，并与CDK4、CDK6结合，使下游的蛋白质如Rb磷酸化，磷酸化的Rb释放出

17、转录因子E2F，促进许多基因的转录。 G1/S期 cyclinE与CDK2结合，促进细胞通过G1/S限制点而进入S期。 S期 将CyclinA的抗体注射到细胞内，发现能抑制细胞的DNA合成，推测CyclinA是DNA复制所必需的。G2/M期 cyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化,如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件M期 在分裂中期当MPF活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活后期促进因子APC ，负责将泛素连接在cyclinB上，导致cyclinB被蛋白酶体降解，完成一个细胞周期。2. 简述细胞周期的主要检验点（c

18、heck point）及功能。 主要检验点包括： G1/S检验点：控制细胞由静止状态的G1进入DNA合成期，相关的事件包括：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？细胞体积是否足够大？ S期检验点：DNA复制是否完成？G2/M检验点：是决定细胞一分为二的控制点，相关的事件包括： 所有DNA都正确复制了吗？DNA是否有损伤？细胞体积是否足够大？ 中-后期检验点（纺锤体组装检验点）：所有染色体都排列在纺锤体上了吗？任何一个着 丝点没有正确连接到纺锤体上，引起细胞周期中断.3. 试述CDK1不同位点氨基酸残基磷酸化/去磷酸化对其活性的调节。以P34cdc2 (CDK1)为例，如果对P34cdc2(CDK

19、1)磷酸化作用位点不同，则对该酶的活性分别产生正向和负向的控制。完整的P34cdc2(CDK1)-cyclin复合物需要磷酸化才能被激活，驱动细胞进入有丝分裂。P34cdc2(CDK1)的Thr14和Tyr15的磷酸化引起P34cdc2(CDK1)-cyclin复合物的失活. P34cdc2(CDK1)的Thr161的磷酸化是酶的活性所必需的。当磷酸酶-1将此位点的磷酸水解，P34cdc2又失去激酶活性。朱 晓 燕1.基因诊断（gene diagnosis）采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因结构（DNA水平）或功能（RNA）水平是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断，是病因诊断。

20、2.SSCP把PCR后获得的双链DNA加热变性后形成单链DNA，相同长度的DNA单链由于碱基顺序不同，它们在中性聚丙稀酰胺凝胶中可有不同的构象而导致电泳速度的不同，这种现象称为单链构象多态性。3.PCR:聚合酶链式反应,又叫体外基因扩增技术。利用人工合成的一对引物，在被扩增DNA模板链的两端形成双链，由DNA聚合酶催化一对引物之间的聚合反应。4.DNA指纹: 针对重复序列人工合成寡核苷酸片断作为探针，与经过酶切的人基因组DNA进行southren blot杂交，可以得到大小不等的杂交带而且杂交带的数目和分子量大小具有个体特异性，就象人的指纹一样，以因而把这种杂交带图谱称。5.基因干预(gene

21、 interference)指采用特定的方式抑制某个基因（多是过度表达的癌基因）的表达，或者通过破坏某个基因而使之不表达，以达到治疗疾病的目的。6.RNA干扰RNAi（RNA interference）是指在生物体细胞内，短双链RNA（dsRNA）引起同源mRNA的特异性降解，因而抑制相应基因表达的过程。 反义RNA：能与mRNA互补配对的RNA分子，配对后在空间上妨碍以此mRNA为模板的蛋白质合成，因而可在翻译水平调控基因表达。问答：1 简述癌基因及其激活机制。癌基因:指细胞基因组中具有能够使正常细胞发生恶性转化基因。是细胞内控制细胞生长的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的话特性，在癌基因异

22、常表达时，其产物可使细胞无限分裂。原癌基因激活的机制（一）点突变； c-Ha-ras 35位碱基不同，正常细胞编码甘氨酸，肿瘤细胞编码缬氨酸。 原癌基因的表达产物多具有促进细胞增殖的功能，当点突变发生后， （1）该蛋白质的活性可能大大增强，对细胞增殖的刺激作用也增强； （2）可能使该蛋白质的稳定性增加，导致其在胞内的浓度增加，对增殖刺激的时间和强度也随之增加； （3）可能会引起RNA的错误剪接（splicing site）而改变蛋白质的结构和功能。 （二）获得外源启动子、增强子，转录增强，表达活性增强。如获得前病毒LTR(长末端重复序列)；获得上游远端的增强子。 某些不含v-onc的弱转化逆转

23、录病毒,而其前病毒含有强启动子和增强子的长末端重复序列(long terminal repeated sequence, LTR)，若插入（insertion）到细胞癌基因邻近位置,便会使该细胞癌基因过度表达，导致肿瘤的发生。  （三）原癌基因因甲基化程度降低DNA分子中的甲基化（methylation）对于保持双螺旋结构的稳定，阻抑基因的转录具有重要作用。（四）原癌基因扩增（c-myc）原癌基因通过某些机制在原染色体上复制出多个拷贝，导致表达产物异常增多而加速细胞增殖。 （五）染色体易位(基因易位或重排) 癌基因从所在染色体的正常位置上易位（trnaslocation）至另一染色体

24、的某一位置上，使其调控环境发生改变，从相对静止状态转为激活状态。 2 简述基因诊断中常用的分子生物学技术。（1）、核酸分子杂交：按照碱基互补配对原则，将不同来源的序列互补大量的DNA/DNA,RNA/RNA互补配对成双链杂交分子。原位杂交：用核苷酸探针对特殊的核苷酸顺序在其原位进行杂交，可用于DNA,RNA的定位研究。（2）、聚合酶链反应：利用人工合成的一对引物，在被扩增的(DNA)模板链的两端形成双链，由DNA聚合酶催化一对引物之间的聚合反应。（3）、单链构象多态性分析：把PCR后获得的双链DNA加热变性后形成单链DNA，相同长度的DNA单链由于碱基顺序不同，它们在中性聚丙稀酰胺凝胶中可有不

25、同的构象而导致电泳速度的不同，这种现象称为单链构象多态性。（4）、限制酶酶谱分析：基因突变致酶切位点的丢失或相对位置发生改变，以此酶消化待测DNA和野生型对照DNA,通过比较二者的酶切片断的长度、数量上的差异就可判断待测DNA的突变情况。（5）、DNA序列测定；分子克隆到载体上，或直接对扩增产物进行测序。（6）、DNA芯片技术：将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针，有规律地紧密排列固定于单位面积的支持物上。3 简述基因治疗的主要策略基因标记(gene labeling) 解决：1外源基因能否安全地转移到患者体内，2从患者体内取出的细胞能否检测到转移基因的存在。 Neo基因（新霉素抗性基

26、因），逆转录病毒载体，便于跟踪这种标记细胞。基因置换（基因矫正） 特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组或同源重组纠正缺陷基因或异常序列。利用基因打靶技术，实现基因同源重组。基因添加（基因增补） 导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因1. 导入正常的基因补偿缺陷基因的功能2. 导入新的基因，利用表达产物治疗。如将细胞因子基因导入肿瘤细胞进行表达，即属于这一类。基因干预(gene interference) 指采用特定的方式抑制某个基因（多是过度表达的癌基因）的表达，或者通过破坏某个基因而使之不表达，以达到治疗疾病的目的。主要方式：1.反义RNA 导入寡核苷酸抑制内源基因的表达2.核酶

27、裂解特异的靶mRNA3.三链DNA 4.RNA干扰4. 什么是基因工程，举例简述其过程。定义：对目的基因进行体外重组，再将重组分子导入受体细胞，使这个基因在受体细中复制、转录、翻译表达的过程。原理：利用酶学方法，将目的DNA片段或人工合成的基因，通过运载体在体外重组，并将重组后的DNA转移到宿主细胞进行复制扩增，形成大量与亲代分子完全相同的子代DNA分子，使其表达为新的性状或用于进一步的研究。过程：1、目的基因的获取（PCR,gene library)；2、载体(vector)的选择与构建(工具酶等）；3、目的基因与载体连接，构建重组DNA分子；4、重组DNA导入受体细胞，转化子筛选；5、受体

28、细胞中目的基因的功能表达。意义：填平了生物种属间不可逾越的鸿沟。缩短了生物进化的时间。使人们能够对生物进行定向改造。柴 玉 荣1.质粒；质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，在基因工程中质粒常被用做基因的载体。分为两类：严紧型质粒：在寄主细胞内的复制除了受本身遗传结构的控制外，还受染色体的严紧控制，因此拷贝数较少。松弛型质粒;复制只受本身的遗传结构的控制，有较多的拷贝数。2.基因文库；一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后，将酶切片段克隆在载体DNA分子中，所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体，将包含了这个生物体的整个基因组，也就是构成了这个生物体的基因文库。包括G文

29、库和C文库。3.Real time-PCR; 又称实时PCR或荧光定量PCR，是在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号积累实时检测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。4.多克隆位点（multiple cloning site）；是一段人工合成的DNA序列，含有密集排列的多种限制性酶切位点，以利于不同来源的外源DNA片段插入载体。5.限制性内切酶；是一类能够识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸水解酶。6.核酸杂交;核酸杂交检测技术就是利用核酸碱基严格配对的特性和核酸标记物（探针）的灵敏度而建立的检测核酸结构与功能的方法。核酸杂交检测技术包括以下技术。7.T

30、-A克隆.1、Taq DNA 聚合酶具有末端转移酶的活性，可在 新链的 3' 末端添加一个核苷酸，通常为 A 2、T-vector： 普通的克隆载体切成线状，并使之在 3' 末端含有一个凸出碱基T。Taq 酶扩增的产物可与 T-载体进行粘端互补连接，达到高效克隆的目的 。8. 基因芯将 DNA 分子固定于支持物上，并与标记的样品杂交，通过自动化仪器检测杂交信号的强度来判断样品中靶分子的数量，进而得知样品中 mRNA 的表达量。1 举例说明两种转基因方法。转化：普通 DNA 的转移 转染：病毒核酸的转移 感染：病毒的侵染等。当受体为细菌时：常采用电击法、热击法（氯化钙法）受体为细

31、菌真核生物时：电击法，基因枪，显微注射。1.电穿孔(electroporation)：利用高压电脉冲的电激作用将外源基因导入细胞的转化方法。电击仪: Gene Pulse® 及0.2 cm 电击杯 电击参数：电容-10F，电阻-400，电压-1.5 kV；电击缓冲液：10% 甘油或蔗糖。2.基因枪(gene gun)又称生物导弹法、微粒轰击法：将载有外源基因的微米/亚微米级的金属微粒（钨或金粉）加速，高速轰击并射入受体靶细胞的方法。是将外源基因导入组织或细胞的一种物理学转化方法。基因枪优点; 靶组织的大小不受轰击室的限制； 轰击过程中不需真空环境，操作简便； 使用范围广，可用于体内与

32、体外的转化； 为便携式装置，使用方便，占用面积小。 2 简述DNA recombination 的连接方法。1>.粘性末端连接2>平末端连接: 两个具有平末端的双链DNA分子连接。 问题：低效率、串珠现象； 提高平末端DNA连接的效率： 加入大分子凝聚剂, 如：PEG8000； 加大连接酶的量3>人工接头连接法: 将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子(在这一小段DNA分子上有某种限制性内切酶的识别序列), 加到载体或外源DNA的分子上, 然后通过酶切制造粘性末端，再进行连接的方法。 4>.同聚物加尾连接: 利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3端各加上一段寡

33、聚核苷酸,如dA(dG)和dT(dC),制成人工粘性末端；然后在DNA连接酶的作用下, 连接成为重组的DNA分子。3 试述Southern blot 原理及应用。 Southern blotting ：用合适的限制性内切酶消化DNA, 电泳分离DNA片段, 利用毛细作用, 使液体经过凝胶, 使DNA片段由液流携带而从凝胶转移并结合在固体支持物（硝酸纤维膜）表面，然后进行杂交。 作用：检测特定基因的大小、拷贝数、变异等。 流程:.1.总 DNA的抽提、质量检测；.2.限制性内切酶操作；.3.DNA的琼脂糖凝胶电泳、0.4N NaOH碱变性；.4.转膜（毛细管渗吸或电转移）；.5.80 处理或紫外

34、线照射将 DNA 固定在滤膜；.6.探针的制备、同位素操作等。.7.预杂交,杂交,放射自显影.（杨 继 要） 1.蛋白质组及蛋白质组学概念蛋白质组：是蛋白质（protein）和基因组（genome）两个词的组合词，意思是proteins expressed by a genome, 即基因组表达的全套蛋白质。由于受到基因表达调控的影响，基因表达存在着时间、空间、个体间的差异，即使在同一个体内，不同阶段和不同生理状态下，基因表达的情况也不相同，因此蛋白质组是一个动态的概念。蛋白质组学（Protemics）则是以蛋白质组为研究对象，从整体角度，分析细胞或组织内蛋白质构成的动态变化和活动规律的科学。

35、2.比较蛋白质组学（表达）的技术平台及实验流程技术平台双向凝胶电泳技术（2-DE）原理：相互垂直的两个方向上，分别基于蛋白质不同的等电点和分子量，先经等电聚焦电泳(IEF)，再经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）把复杂的蛋白质成分分离。 其他用于蛋白质电泳的方法: 1.差异凝胶电泳 2.毛细管电泳 3.高效液相色谱质谱技术原理：基质辅助激光解吸电离（MALDI）和电喷雾电离（ESI）两种“软电离” 技术的出现使得质谱技术得到迅速的发展，成为蛋白质鉴定的核心技术。所谓“软电离”是指样品分子电离时保留整个分子的完整性，不会形成碎片离子。双向电泳与质谱技术的联合应用成为蛋白质组学研究的基本技术平台。生物信息学：随着人类基因组计划、计算机网络技术的发展而诞生的一门新兴学科，是蛋白质组学研究中不可缺少的一部分。 在蛋白质组学研究中有两个重要应用：一是分析和构建双向凝胶电泳图谱，二是搜索与构建蛋白质组数据库。蛋白质组学研究的基本流程 蛋白样品的制备及定量-总蛋白的双向凝胶电泳-凝胶分析软件分析-胶内酶解（胰肽酶）- 质谱分析（肽质量指纹图谱-数据库搜索鉴定蛋白性质3.几种功能蛋白质组学研究方法的基本原理（1）、蛋白质芯片:是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种