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1、精选优质文档-倾情为你奉上专题一 基因工程 1. 1 DNA重组技术的基本工具专心-专注-专业一、基因工程的基本概念1. 概念:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,并通过_和_等技术,赋予生物以新的_,从而创造出更符合人们需要的新的_和_。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫做_。«2. 基本原理:_«3. 理论基础(1) 不同生物的基因可以拼接的结构基础细胞生物的遗传物质都是_,都是以_为基本单位构成的双链大分子。(2) 目的基因转入后可以表达的基础所有生物共用一套_。(3) 生物遗传信息的表达都遵循_。««4. 优点(1
2、) 目的性强,能_的改造生物的性状。(2) 克服_的障碍。二、限制性核酸内切酶分子手术刀1. 简称:_。2. 来源:主要是从_中分离纯化而来。«3. 功能特点:特异性,即识别双链DNA分子某种特定_,并且使每一条链中_的两个核苷酸之间的_断开。4. 酶切结果:_末端和_末端。画出EcoR酶切后的结果:GAATTCCTTAAG三、DNA连接酶“分子缝合针”«1. 作用实质:将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的_。2. 作用前提:两个DNA分子必须含有_。3. 种类(1) E·coli DNA 连接酶 来源:_ 功能:只能连接_(2) T
3、4DNA连接酶 来源:_ 功能:既可以连接_,又可以连接_,但连接_时效率比较低。«【拓展】 比较DNA连接酶与DNA聚合酶DNA 连接酶DNA 聚合酶作用实质都是催化两个核苷酸之间形成_是否需模板_连接DNA链_链_链作用过程在两个DNA片段之间形成_将_加到已存在的核苷酸链上,形成_作用结果将两个DNA片段连接成_合成_四、基因进入受体细胞的载体“分子运输车”«1. 基因工程中最常用的载体_(1) 来源:_等微生物(2) 结构:裸露的、结构简单、独立于_ 之外,并具有_的_分子。 «2. 基因的载体必须具备的条件(1) 有_个限制酶切割位点,供外源DNA片段(
4、基因)插入其中。(2) 能在宿主细胞内_,或整合到染色体DNA上,随染色体DNA进行_。(3) 有特殊的_,如四环素抗性基因等,供重组DNA的鉴定和选择。(4) 必须是_的,不会对受体细胞有害。(5) _适合,以便提取和在体外进行操作。3. 载体的种类:除质粒外,还有_、_等。4. 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过_的。1. 2 基因工程的基本操作程序«一、基因工程的基本操作程序1. _的获取。2. _的构建。3. 将目的基因_。4. 目的基因的_。二、目的基因的获取1. 目的基因主要是_的结构基因。2获取目的基因的方法(1) 从基因文库中获取
5、目的基因 基因文库概念:将含有某种生物不同基因的许多_,导入_的群体中储存,各个_分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。« 基因文库分类:可分为_文库和_文库(如cDNA文库)。 (2) 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术是_的缩写。PCR是一项在生物体外_的核酸合成技术。« PCR技术的原理:DNA 的_。 PCR扩增的前提:要有一段已知目的基因的_,以便根据这一序列合成引物。 « PCR扩增的条件:_、_(目的基因),原料_(即dCTP、dATP、dGTP、dTTP),耐高温的_酶(Taq酶)。 PCR 扩增的过程a. 变性:加热到90-95,DNA
6、受热变性后_b. 复性(退火):冷却到55-60,_与_结合c. 延伸:加热到70-75,在热稳定的_(Taq酶)的作用下进行延伸 结果:目的基因以_的方式成指数形式扩增。(3) 人工合成法:如果基因比较_,且_,可以通过_用化学方法直接人工合成。«【拓展】 PCR 技术和 DNA 复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理_原料_条件_、_、_不同点解旋_解旋_催化场所_复制_酶热稳定的DNA 聚合酶细胞内含有的DNA聚合酶结果在短时间内形成_形成_三、基因表达载体的构建«基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步,也是基因工程的_1. 基因表达载体构建目的:使目的基因在受体
7、细胞中_,并且可以_给下一代,同时,使目的基因能够_。 «2. 基因表达载体的组成:除了目的基因外,还必须有_、_以及_等。(1) 启动子:位于目的基因的_,是一段有特殊结构的DNA序列,是_识别和结合的部位,有了它才能驱动基因转录出mRNA ,最终获得所需的蛋白质,即转录开始的部位。 (2) 终止子:位于目的基因的_,也是一段有特殊结构的DNA序列,使转录在所需的地方停止下来,即转录停止的部位。«(3) 标记基因:用于鉴别受体细胞中是否_,从而将含有目的基因的细胞_出来,常为_,如氨苄青霉素抗性基因、四环素抗性基因。«3表达载体构建过程中,获取目的基因与切割质粒
8、时一般用_限制性核酸内切酶,目的是产生相同的_,以便于连接。四、将目的基因导入受体细胞 _的概念:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称为_。 1. 将目的基因导入植物细胞«(1) 常用受体细胞:植物的_或_。« (2) 方法:_法、_法、_法,其中,_法是导入植物细胞最常用的方法。 农杆菌特点:易感染双子叶植物和裸子植物。当植物体受到伤害是,伤口处的细胞会分泌大量的_,吸引农杆菌移向这些细胞,这时农杆菌中的_上的_(可转移的DNA)可转移到受体细胞染色体的DNA上。 转化过程:将_插入到_上,通过农杆菌的转化作用,可以使目的基因进入植物细胞,并将
9、其插入到植物细胞中染色体的DNA,使目的基因的遗传特性得以_。2. 将目的基因导入动物细胞 « (1) 常用受体细胞:_。« (2) 常用方法:_。 (3) 基本操作程序:_含有目的基因的表达载体_(受精卵)_胚胎移植新性状动物3. 将目的基因导入微生物细胞(1) 常用受体细胞:_细胞,其中_最为广泛。« (2) 原核生物的特点:_;多为单细胞;遗传物质相对_ « (3) 转化方法: _法。 (4) 转化过程 « 用_处理受体细胞(如大肠杆菌),使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为_。 将重组表达载体DNA分子溶于_
10、中与_混合,在一定_下促进_吸收DNA分子,完成转化过程。五、目的基因的检测与鉴定目的基因导入受体细胞是否可以_,只有通过检测与鉴定才能知道,这是基因工程的第四步,也是检查基因工程是否成功的一步。类型步骤检测内容«方法结果显示_检测第一步检测转基因生物的染色体上是否插入了目的基因_(DNA 探针转基因生物DNA )是否_第二步检测目的基因是否转录_(DNA 探针转基因生物 mRNA )是否_第三步检测目的基因是否翻译成蛋白质_是否_水平的检测包括抗虫、抗病的接种实验,以确定是否具有抗性的及抗性程度;基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较等1. 3 基因工程的应用一、植物基因工程
11、硕果累累植物基因工程技术主要用于提高农作物的_(如抗除草剂、抗虫、抗病、抗干旱和抗盐碱等),以及改良农作物的_和利用植物生产_等方面。 二、 动物基因工程前景广阔动物基因工程主要应用于动物品种_、建立_、器官移植等多方面。 (1) 用于提高动物生长速度:将_导入动物体内,以提高动物生长速率。 (2) 用于改良畜产品的品质。 (3) 用转基因动物生产药物:将药用蛋白基因与_的启动子等调控组件重组在一起,通过_等方法,导入哺乳动物的_中,然后,将受精卵送入母体内,使其生长发育成_。转基因动物进人泌乳期后,可以通过分泌的_来生产所需要的药品,称为乳腺(房)生物反应器。(4) 用转基因动物作器官移植的供体:将器官供体基因组导入某种调节因子,抑制_或设法除去_,再结合_,培育出没有_的转基因克隆动物器官。三、基因工程在医学、药学上的应用 1基因工程药物:利用“工程菌”生产基因工程药品包括_、_、_、_、_等。工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系一般称为“工程菌”。 2基因治疗:是把_导入病人体内,使该基因的_发挥功能,从而达到治疗疾病的目的,这是治疗遗传病的最有效的手段,包括_和_。补1:用于基因治疗的基因有三种类型:_;_;_.«补2:基因诊断。原理:_;工具_1. 4 蛋白质工程1.实质:根据 的关系,通过
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