实验六、兔血细胞的计数及鸭血细胞大小的测量

1、实验六、兔血细胞的计数及鸭血细胞大小的测量一一. .实验原理实验原理 利用显微镜并借助血细胞计数板，计算单位体积的液体中所含细胞或微小生物的数量。二二. .试剂与器械试剂与器械 光学显微镜、血细胞计数板、兔血。兔血细胞计数兔血细胞计数血细胞计数板盖玻片 计数室 2盖玻片 计数室 三实验步骤1.取血细胞计数板，检查计数板是否清洁，如有污垢，应先洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下，熟悉计数室的构造。然后加盖玻片盖住两边的小槽。2.充液：用小滴管将一小滴稀释200倍的兔血滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象自动渗入计数室中。2三实验步骤1.取血细胞计数板，检查计数板是否清洁，如有污垢，应先

2、洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下，熟悉计数室的构造。然后加盖玻片盖住两边的小槽。2.充液：用小滴管将一小滴稀释200倍的兔血滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象自动渗入计数室中。注意事项: 如滴入过多,溢出并流入两侧槽内,使盖玻片浮起,体积改变,会影响计数结果，需用滤纸把多余的溶液吸出，以槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少,经多次充液,易产生气泡,应洗净计数室,干燥后重做。三实验步骤3.计数：充液后静止1-2分钟，待红细胞下沉后，方可进行计数。计数中央大方格内四角及中央共5个中方格内的80个小方格中所有细胞数。25X16 计数板长x宽x高= 1mm x 1mm x 0.1mm = 0

3、.1mm3 = 10-4ml(25x16 = 400小格子)细胞浓度计算公式：细胞浓度(细胞个数/ml)=(80小格内细胞个数80) 400104稀释倍数 计数时为防止重复和遗漏，应按一定的顺序，先自左向右数到最后一格，下一行格子则自右向左，再下一行又自左向右，即呈S形计数。细胞计数原则计数分布在刻线上的红细胞时，依照“计上不计下，计左不计右计上不计下，计左不计右”的原则，判断标准为是否接触三条边线的中间线。如发现各中方格的细胞数目相差20个以上，表明血细胞分布不均匀，须重新计数重新计数。细胞计数原则X计算上侧和左侧接触到中线的细胞排除下侧和右侧接触到中线的细胞四. 注意事项：1.防止液体滴入

4、过多，否则溢出并流入两侧槽内，会使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果。2. 先用低倍镜找到血球计数器的计数区，调节光源亮度以及孔径光阑大小得到清晰的图像。五. 实验结果和作业： 计算出每立方厘米(每毫升)的兔血中所含红细胞的数量。六. 思考题： 1. 比较鸟类（鸭）与哺乳类动物（兔）血红细胞大小及 形态上的差异。 十字板十字板 分划板分划板 网格板网格板一、实验目的:利用测微尺测量细胞大小1. 常用显微镜目镜测微尺种类鸭血鸭血细胞大小的测量细胞大小的测量二、实验器材:A mitotic fertilized egg from a sea urchin (海胆)9.2 Light Micros

5、copyFluorescence MicroscopyLaser-Scanning Confocal Microscopy(激光扫描共聚焦显微镜) For better resolution when imaging thick cells.镜台测微尺2. 测微尺的使用操作1毫米分成100个小格每一小格长度 = 10微米(10m)1.取下目镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜中,旋上透镜(Olympus显微镜目镜中已安装了测微尺,不必自己安装)；2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清镜台测微尺的刻度；1 mm目镜测微尺0 10 20 30 40 503.移动镜台测微

6、尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐，然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数。 目镜测微尺的100格与镜台测微尺的50格重合在某一物镜倍数下：目镜测微尺每格的值 =目镜测微尺的格数镜台测微尺的格数x10微米镜台测微尺目镜测微尺0 10 20 30 40 50 60 70 80 90100a. 将绿豆大小血滴滴于清洁玻片上。 b. 另取边缘平滑的玻片作为推片：推片一端放在血滴的前方，逐渐后移，接触血滴并使血滴沿推片边缘均匀展开，然后将推片与玻片保持 30 45 度角，轻轻用力，均匀而迅速地将推片沿玻片表

7、面向前推至玻片另一端，形成头体尾明显的舌形血膜。立即将玻片摇动，使其快速干燥，忌热力干燥。三、实验步骤:鸭血细胞的观察与测量 1.制作鸭血涂片：三、实验步骤:鸭血细胞的观察与测量2.血涂片染色与观察：将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴几滴瑞氏染液(伊红美蓝混合染料溶于甲醇中制得）于玻片上盖满涂片部分,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，轻轻摇动混匀,再静置 染色 510分钟，最后用清水缓缓冲洗（从玻片的背面冲洗）1分钟,倾斜放置,凉干后进行观察测量。3.鸭血红细胞大小的测量：移去镜台测微尺，换鸭血涂片。先用低倍镜观察全片,了解涂片染色、细胞分布情况， 选择细胞分布均匀的

8、部分( 常在血膜体尾交界部), 转高倍物镜按一定顺序检查。涂布均匀的鸭血红细胞测量10个鸭血红细胞四.注意事项1.不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。五.实验结果和作业：1.分别计算不同物镜放大倍数(10 x, 20 x, 40 x)下 目镜测微尺的单位。2.用目镜测微尺和镜台测微尺测量一下 鸭血红细胞的长轴和短轴， 分别测量10个鸭血红细胞，求其平均值(多少微米？)。 实验分组：实验分组：前半部分同学：前半部分同学： 1.1.血球计数血球计数: :滴稀释的兔血（滴稀释的兔血（B413/B414B413/B414 ) )镜检（镜检（B409B409）。）。( (血球计数板血球计数板1 1片片/

9、 /人）人）2.2.鸭血涂片制作：鸭血涂片制作：（B413/B414),B413/B414),血细胞大小测量（血细胞大小测量（B409) B409) 镜台测微尺（镜台测微尺（1 1片片/ /人）。人）。后半部分同学：后半部分同学：1.1.鸭血涂片制作鸭血涂片制作: :（B413/B414),B413/B414),血细胞大小测量（血细胞大小测量（B409) B409) 镜台测微尺（镜台测微尺（1 1片片/ /人）。人）。2.2.血球计数血球计数: :滴稀释的兔血（滴稀释的兔血（B413/B414B413/B414）镜检）镜检(B409(B409）。）。Olympus显微镜目镜中已安装了目镜测微尺显微镜目镜中已安装了目镜测微尺