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文档简介

1、、微生物1.培养基成分 培养基的化学成分包括 水、无机盐、碳源、氮源、生长因子2、NaHCO等无机碳源(自养);糖类、石油、生粉饼等有机碳源。异养微生物只 能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。2、NH、NO-、NlH(无机氮源)蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨(有机氮 源)等。只有固氮微生物才能利用 N 0乳酸杆菌时需要在培养基中添加 维生素,培养霉菌时须将培养基的PH调至酸性, 培养细菌是需要将PH调至中性或微碱性,培养厌氧型微生物 是则需要提供 无氧的条件分类物理性质可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基按照用途可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基 中加入某

2、种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微是根据微生物的定培养基制在培养格的中加入某种指 将未接种的培养基在恒温箱中保温 1 剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物。说明培养加入青霉素 是成功的,否则需要重新制备。-美蓝培养基鉴别大肠杆菌)生物的生长。鉴别培养基指示分离得到酵母菌和霉菌,利用伊红人工合成培养基和天然培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基 称量时,牛肉膏蛋白胨都易吸潮,称量要迅速融化加琼脂时要不断搅拌,防止脂糊底而导致烧杯破裂灭菌时,装有培养基的锥形瓶要用高压 蒸汽灭菌法,培养皿要用干热灭菌法平板冷凝后需要倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,防止皿盖上冷凝的水珠落

3、入培养基,造成污染。(微生物培养的时候也需要倒置,另一个原因:由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质,利于微生物生长。)2灭菌与消毒消毒 较为温和的理化方法,仅杀死物体表面或内部的部分有害微生物。包括:煮沸消毒法,巴氏消毒法(对于一些不耐高温的液体)还有化学药剂消毒(如酒精、氯气、石炭酸等)、 紫外线消毒法强烈理化因素,杀死物体内外 所有微生物,包括芽孢和孢子。包括:灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌 接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法;(防止X的微生物污染培 玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱; 培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器

4、械是高压蒸汽灭菌锅3纯化微生物的接种方法平板划线法(适用好氧菌)和 稀释涂布平板法(适用好氧菌以及兼性厌氧菌) 平板划线法 是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种 逐步稀释 分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。操作的第一步以、每次划线之前、划线操作结束时均需要灼烧接种环的目的操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。划线结束后

5、灼烧接种环,能及时杀死接种环 上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后,要等其冷却后再进行划线,以免接种环温度太高,杀死菌种最后一区不能与第一区相连,划线力度要适中。稀释涂布平板法 是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是:使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种。4统计菌落数目测定微生物数量的常用方法有 稀释涂布平板法 和显微镜直接计数 释涂布平板法统计(可以区分活死菌) 32个平板,选择菌落数在 3

6、0300的平板进行计数,并 取平均值显微镜直接计数法统计(不能区分活死菌)利用特定的细菌计数板 或者血细胞计数板2 土壤中分解尿素与纤维素的细菌的分离原理Co(Nl2)2,是因为他们能合成脲酶,将尿素分解为CO,Nf纤维素酶,纤维素酶是一种复合酶,即Ci酶、G酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成 葡萄糖。(棉花是自然 界中纤维素含量最高的天然产物)选择培养基 以尿素为唯一氮源的选择培养基,富含纤维素的选择培养基鉴别方法酚红指示剂,分解产生氨气,指示剂变红刚果红,刚果红能与培养基中的纤维素形成 红色复合物。当纤维素被纤维素酶分 解后,刚果红一纤维素的复合物就无

7、法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。二、发酵1. 果酒、果醋发酵:通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。有氧发酵:醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵:酒精发酵乳酸发酵酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式:出芽生殖(主要)分裂生殖 孢子生殖在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁殖。C6Hi2+ 6Q 6C0+ 6hbO在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵。GH12O 2C2HOI+ 2C0酒精发酵时一般将温度控制在 18 C -25 C附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧、呈酸性的发酵液

8、中,酵母菌可以生长繁殖,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到 制约。醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂2QHOI÷ 4Q CHCooI4 6巳0 短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡。醋酸菌最适生长温度为 3035C ,控制好发酵温度,使发酵时间缩短,又减少杂菌污染的机会实验流程:挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒(醋酸发酵果醋)新鲜葡萄除去枝梗,冲洗以除去灰尘为目的,防止洗去野生酵母菌C酒精检验:重铬酸钾。在酸性条件下,重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2m L,再滴入物质的量浓度为 3molL的HSQ3 滴,振荡混匀,最后

9、滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴,振荡试管,中微化 碳口;制观察颜色实验装置长而弯曲的胶管与瓶身相连接,其目的是防止空气生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧的排出。使用该装置制酒时,应该关闭充气 醋时,应该充气口连接气泵,输入氧 /空气进行有氧呼吸快速繁殖,耗尽氧气后再进行酒精发酵,防止发酵过程中产生CQ造成发酵液溢出。2. 腐乳参与微生物多种微生物参与了豆腐的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。原理毛霉等微生物产生的 蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸;脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。毛霉的

10、生长:条件:将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的控制在1518C,并保持一定的湿度。(温度过低不利于毛霉生长,温度高时菌丝易老化死亡, 影响腐乳品质)来源:1.来自空气中的毛霉孢子 2.直接接种优良毛霉菌种实验流程:让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制实验材料豆腐的含水量为70%左右,水分过多则腐乳不易成形;过低,不利于毛霉生长。 加盐腌制:将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层 数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些。用盐腌制时,注意控制盐的用量(毛胚:食盐= 5: 1):盐的浓度过低,不足以 抑制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质;盐的浓度过高会影响腐乳的

11、口味食盐的作用:1.抑制微生物的生长,避免腐败变质2.析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂 3.调味作用,给腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌 丝上的蛋白酶。卤汤:卤汤、香辛料调味、杀菌防腐。卤汤中酒的含量一般控制在12%左右。酒的作用:1.防止杂菌污染2.与有机酸结合形成 酯,赋予腐乳风味3.酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延长;酒精含量过低,蛋白 酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁殖快,豆腐易腐败,难以成块。防止杂菌污染:用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷干净后要用沸水消毒。装瓶时,操作要迅速小心。整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封。 封瓶时,最好将瓶口通

12、过酒精灯的火焰,防止瓶口被污染。3. 泡菜参与微生物及原理制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下,降酶糖分解为乳酸。分裂方式是二分裂。反应式为:GHkQ2CHQ+能量含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素杀死乳酸菌。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。发酵温度在18-20 C,过高其他杂菌活动能力高,过低不利于乳酸菌代谢。实验材料亚硝酸盐易被还原为亚硝酸盐。清水与盐的质量比是4: I0盐水要气杀灭水中的其他微生物。保证乳酸菌发酵所需要的无氧环境。而且,发酵中的各类曲线煮沸后冷却,煮沸的作用除去水中的氧 在发酵过程中要经常补水。a. 有氧气,乳酸

13、菌活动受到抑制b. 乳酸菌含量达到最大,抑制其他菌种活性一般在腌制10天后亚硝酸盐含量幵PH持续下降始降低,故在10天之后食用最好测定亚硝酸盐含量在盐酸酸化条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应 后,与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料,与已知浓度的标准显色液目测比较(比色法),估算泡菜中亚硝酸盐含量。三、植物组织培养植物组织培养技术原理 植物细胞的全能性。具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞,都具有发育成完整个体的能力,即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来,这是因为在特定的时间和空间条件下,通过基因的选择性表达,构成不同组织和器官。细胞分化使

14、细胞生物体中细胞结构和 功能趋向专门化,有利于提高各种生理功能的效率。基本过程外植体愈伤组织根、芽植物体离体的植物组织或细胞,在培养了一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈伤组织,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的脱分化,或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做再分化。实现优良品种的快速繁殖:培育脱毒作物:制作人工种子:培育作物新品 种。菊花的植物组织培养材料 菊花组织培养一般选择 未幵花植物的茎上部新萌生的侧枝 作材料。一般来说,容易进行无性繁

15、殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好,容易诱导脱分化和再分化。一般将PH控制在左右,温度控制在1822C,并且每日用日光灯照射12h 。 培养基MS固体培养基:大量元素、微量元素和有机物(包括 细胞分裂素与生长素)。(在菊花组织培养中,可以不添加植物激素,原因是菊花茎段组织培养 比较容易)。70%的酒精中摇动23次,持续67s,立即将外植体取出,在无菌水中清洗。取出 后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分,放入质量分数为的氯化汞溶液中12min。取出后,在无菌水中至少清洗 3次,漂洗消毒液。植物的耐受能力。接种:接种过程中插入外植体时形态学上端朝上,每个锥形瓶接种7

16、8个外植体。外植体接种与细菌接种相似,操作步骤相同,而且都要求无菌操作。外植体消毒不彻底;培养基灭菌不彻底;接种中被杂菌污染;锥形瓶密封性差等。移植栽前应先打幵培养瓶的封口膜,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗 根部培养基。然后先将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一 段时间,进行 壮苗。最后进行露天栽培月季的花药培养 完全未幵放的花蕾,处于 单核靠边期的花粉。细胞核由中央移向细胞一侧的时期,组织类 型细胞来源细胞形 态细胞结构细胞排 列细胞去向尖 分生组 织受精卵正方形无液泡紧密分化成多种 细胞组织愈伤组 织高度分化 细胞无定形高度液泡 化疏松再分化成新 个体相同点都通过有丝分裂进

17、行细胞增殖花药培养成功率最高镜检 确定花粉发育时期的最常用的方法是 醋酸洋红法。但是,某些植物的花粉 细胞核不易着色,需采用 焙花青-铬矶法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 诱导产生单倍体植株产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株(即单倍体植株)一 般有两种途径,一种是花粉通过胚状体阶段发育为植物,另一种是花粉在 诱导培养基上先形成愈伤组织申将其诱导分化成植株。这两种途径之间 并没有绝对的界限,主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。培养条件培养温度控制在25 C左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般 经过2030天培养后,会发现花药幵裂,长出愈伤组织或形成胚状体。将愈

18、伤组织及时转移到分化培养基上,以便进一步分化出再生植株。如果花药 幵裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大量幼小植株,必须在花药幵 裂后尽快将幼小植株分幵,分别移植到新的培养基上,否则这些植株将很 难分幵。生长素和细胞分裂素等植物激素使用的先后顺序、用量的比例影响使用顺序实验结果先生长素,后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂细胞既分裂也分素,后生长素化同时使用分化频率提咼成分的提取植物芳香油的提取芳香油的提取方法:蒸馏、压榨、萃取植生长素/细胞分裂素比值与结果比值咼时促根分化,抑芽形成比值低时促芽分化,抑根形成比值适中促进愈伤组织生长芳香油的性质:挥发性强,成分复杂,以萜类化合物及其衍生物

19、为主。水蒸气蒸馏法水上蒸馏:原料隔放在沸水上加热蒸馏。水汽蒸馏:利用外来高温水蒸气加热蒸馏。有些原料不适宜于水中蒸馏,如柑橘、柠檬等易焦糊,有效成分容易水解。铁架台、酒精灯、石棉网、蒸馏瓶、橡胶塞、蒸馏头、温度计、直型冷凝管、接液管、锥形瓶,橡皮管。所有仪器必须事先干燥,保证无水安装仪器一般都按照自下而上、从左到右 的顺序。拆卸仪器的顺序与安装时相反。具体安装顺序和方法如下。(1) 固定热源一一酒精灯。(2) 固定蒸馏瓶,并且保持蒸馏瓶轴心与铁架台的水平面垂直。(3) 安装蒸馏头,使蒸馏头的横截面与铁架台平行。(4) 连接冷凝管。保证 上端出水口向上,通过橡皮管与水池相连; 下端进水 口向下,

20、通过橡皮管与水龙头相连。(5) 连接接液管(或称尾接管)(6)将接收瓶瓶口对准尾接管的出口。常压蒸馏一般用锥形瓶而不用烧杯作接受器,接收瓶应在实验前称重,并做好记录。(7)将温度计固定在蒸馏头上,使温度计水银球的上限与蒸馏头侧管的下限 处在同一水平线上。(8) 蒸馏装置安装完毕后,在蒸馏瓶中加几粒沸石,防止液体过度沸腾。在 整个蒸馏过程中,应保证温度计的水银球上常有因冷凝作用而形成的液滴。控制蒸馏的时间和速度,通常以每秒12滴为宜。蒸馏完毕,应先撤出热源, 然后停止通水,最后拆卸蒸馏装置。压榨法分离困难,出油率低有机溶剂中的杂质影响芳香油的品质玫瑰精油的提取试剂目的mL氯化钠溶液:促使油水混合

21、物(乳浊液)中油和水的分离。无水硫酸钠:吸收油层中的水分。 采集玫瑰花:采集 盛花期(5月中上旬)的玫瑰花,清水清洗沥干。 装入蒸馏原料:称取50g玫瑰花放入蒸馏瓶,添加 200mL蒸馏水。4: 1 安装蒸馏装置:按照从左向右、自下到上次序安装水蒸气蒸馏装置。 加热蒸馏:控制蒸馏时间和速度(12滴/秒),获得乳白色乳浊液;拆 卸装置。 分离油层:向乳浊液加入NaCl溶液后,利用分液漏斗分离出上面的油层。除去水分:向油层中加入无水硫酸钠,24h后过滤,得到玫瑰油蒸馏时间不能过短,温度不能过高。橘皮精油的提取:柠檬烯,主要分布在橘皮中。石灰水:防止压榨时滑脱, 提高出油率,降低压榨液 黏稠度,过滤

22、不堵塞 筛眼。小苏打、硫酸钠:促进 油和水的分离(用量分别为橘皮质量的和 5%)。 橘皮的处理:将新鲜橘皮用清水清洗沥干。 石灰水浸泡:用78%石灰水浸泡橘皮 24h。 清水漂洗:浸泡好的橘皮用流水彻底漂洗干净,沥干。 粉碎和压榨:将橘皮粉碎,加入小苏打和硫酸钠后,用压榨机压榨得到 压榨液。 过滤压榨液:用布袋过滤,滤液再高速离心处理,分离出上层橘皮油。 静置处理:将橘皮油在510C冰箱中静置57d,分离出上层澄清橘皮 油。 再次过滤:将下层橘皮油用滤纸过滤,滤液与上层橘皮油合并,進到橘皮精油。静置处理目的:除去 果蜡和水分。胡萝卜素的提取橘黄色结晶,化不溶于水,微溶于乙醇,易溶于石油醚等有机

23、溶剂。依据碳碳双键的数目划分为a、B、丫三类。其中最主要的组成成分为-胡萝卜素。提取e-胡萝卜素的方法主要有三种:从植物中提取从大面积养殖的岩藻中获得利用微生物的发酵生产(影响萃取的主要因素)水溶性的:乙醇、丙酮水不溶性的:石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳等 (石油醚沸点最高最合适)选择:具有较高的沸点,能够充分溶解胡萝卜素,并且不与水混溶。实验步骤粉碎干燥萃取过滤浓缩 粉碎:使原料与有机溶剂充分接触,增大溶解度 。 干燥:脱水温度太高,干燥时间太长会导致胡萝卜素分解。萃取过程应该避免明火加热,采用 水浴加热,这是因为有机溶剂都是易燃 物,直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。为了防止加热时有

24、机溶剂挥发, 还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。 在浓缩之前,还要进行过滤,除去萃取液中的不溶物。:纸层析法滤纸:18 cm× 30 Cm基线:滤纸下端距底边 2 Cm处做一基线,在基线上取 A B、C D四点。 点样:用最细的注射器针头(毛细吸管)吸取样品进行点样。点样应该快 速细致,在基线上形成直径2mm左右的圆点,每次点样后,可用吹风机 将溶剂吹干,注意保持滤纸干燥。等滤纸上的点样液自然挥发干后,将滤 纸卷成圆筒状,至于装有ICm深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各种色素 完全分幵后,观察标准样品中位于展幵剂前沿的胡萝卜素层析带四、酶、DNA细胞固化果胶酶 果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要成分之一,不溶于水果胶酶不特指某一种,是一类酶的统称, 包括多聚半乳糖醛酸酶,果胶分解酶和果 胶酯酶果胶酶的主要作用是分解果胶变成可溶性的半乳糖醛酸,从而使果汁变得澄清,提升水果的出汁率探究果胶酶活性因素:T、PH酶抑制剂单一变量原则分别预热、预PH处理,再混合最适用量:增加酶用量,直至果汁量不再 增加。最适用量与 T PH有关。加酶洗衣粉包含的酶制剂蛋白酶:蛋白质氨基酸、多肽脂肪酶:脂肪脂肪酸、甘油淀粉酶:淀粉麦

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