枸杞多糖检测方法科研申报

1、2010年研究生科研项目申报技巧与途径选修课考试题学号： 姓名： 王畅 所属班级： 英语六班 所属专业： 药物分析 入学年份： 2009 导师姓名：於洪建 一、课题名称： 枸杞多糖质量标准研究 二、关键词： 枸杞多糖;指纹图谱;高效液相色谱法;柱前衍生化 3、 中文摘要： 枸杞多糖的单糖组成测定是控制枸杞多糖质量标准和提供多糖基本信息的最重要环节。本实验因单糖存在互变异构体、 差向异构体、结构相似等特征 ,而且往往同一待测样品 ,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等 ,可能含有许多类型的单糖。所以采用 PMP柱前衍生化反相高效液相色谱 (HPLC)法,通过梯度洗脱建立了9种常见单糖的分离模式做对照 ,

2、并将95%纯度的枸杞多糖水解用同样的衍生化成功地分离枸杞多糖的单糖组成分,分离效果好，具有良好的重复性。结果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7种单糖组成,摩尔比为2.051.2010.900.850.38 。该 HPLC方法是简单，快速，灵敏，方便的分析技术 ,可用于枸杞多糖的质量控制。 4、 课题立项依据： 1.枸杞多糖单糖组分复杂枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）简称LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由杂多糖的糖链与蛋白质的肽链以共价键的形式结合的含肽糖类，是天然存在的大分子物质1-3。因为组成多糖的单

3、糖品种繁多，而且即使只有一种单糖组成的多糖，因其连接方式的不同并可能有分支，也有可能得到结构很复杂的多糖，所以多糖结构分析比蛋白质或核酸要复杂得多。此外，由于多糖结构的微观不均一性，或分子量发散，使多糖结构分析很难得出完全准确的结构式。多糖结构的分析包括单糖组成4-5，单糖间的连接方式、糖苷键构型、分支位点及分支数目，最终确定其重复结构单元。多糖结构分析的手段分为物理手段、化学降解法、酶降解和免疫化学法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化学降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖结构的复杂性，目前还没有一种方法可以单独完成其结构分析，必须将多种方法结合使用6-8。仪器分析

4、法是在化学分析法的基础上更进一步地了解和研究多糖的结构特性。与化学分析法相比，仪器分析法具有快速、准确、灵敏和操作方便等优点，是糖链分析不可缺少的手段。目前，在此方面应用较多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及电泳等。这些现代分析技术的出现和发展以及仪器的联用，大大促进了糖链结构研究工作的发展。制定统一的质量标准需要结合枸杞多糖本身的实际特点才能得以实施，从而保护消费者的权益。2.多糖的生物活性近年来，在对免疫物质以及新药物资源的研究过程中，人们发现糖类参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能。枸杞多糖及其缀合物对多种危害人类健康的疾病，如免疫紊乱、肝炎、高血压、癌症

5、、糖尿病、血栓等，都具有显著的疗效9-10,其中最引人注目的是它们的免疫修饰和抗肿瘤活性。多糖还具有抗辐射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究与开发已日益引人注目。3.枸杞多糖的研究意义目前糖生物学及糖工程己成为继基因工程和蛋白质工程之后的第三大生工程，是当今最前沿的生物学科之一11-13。由于多糖多种多样的生物活性以及在保健和疾病治疗领域的广泛使用，使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃，成为天然药物、生物化学和生命科学等的研究热点。到目前为止，已有300多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来14。4.国内外枸杞多糖的研究现状我国近年来对枸杞多糖药物活性已有广泛报道，例如：报道枸杞多

6、糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遗传损伤、抗肿瘤、抗放射、抗突变、等药物活性，但弄清结构说明构效关系尚少见，由于产地的不同全国范围内还没有报道过枸杞多糖质量标准研究，特别是枸杞多糖的HPLC指纹图谱。中草药作为药物开发及理论研究，我国已落后于日本和韩国。国际上对糖类的研究日新月异，内容包括糖生物学和糖工程等，并且相继多次召开了有关“糖生物学和糖工程”的专题会议。1995年3月，亚洲分子生物学组织(AMBO)还在日本举办了“糖生物学和糖工程”培训班15。欧盟在19941998年的研究计划中启动了“欧洲糖研究与开发平台”，旨在协调欧洲的糖研究与开发，强化在糖的研究成果转化成商品与美国和日本竞争的能力

7、。目前，日本、美国及欧盟十分重视糖类的研究16，且在糖的研究与开发处于领先地位，并且提出各自的重大科研计划。5.多糖的应用前景植物源多糖类化合物由于其独特功能和低毒性，在临床中显示出越来越广阔的前景，值得指出的是我国对于糖的质量标准控制研究尚无重大计划。纵观近十年，有关多糖的研究日益增多。到目前为止，虽然只有云芝多糖、香菇糖、猪苓多糖、裂褶多糖和茯苓多糖等少数应用于临床，但它们在抗凝血、抗肿瘤、降血脂、抗突变、抗衰老和抗病毒等疑难病症的治疗方面已显示了诱人的前景。有关专家预言“21世纪将是多糖的时代”预示着多糖研究的广阔前景17。作为重要的植物化学成分，多糖已成为现在科学家研究的重要领域，不断

8、受到人们的关注。多糖正逐渐成为当今新药开发的重要方向之一，但是质量是保证安全使用的根本。6.指纹图谱的应用前景通过建立相应指纹图谱来制定质量标准，不仅是时代发展的必然，也是我国中药走向世界的关键。目前中药指纹图谱还处于方法学研究及数据积累阶段，中药指纹图谱的应用也仅限于生产中的质量控制，因此建立中药指纹图谱，应考虑其可操作性。随着分析技术的快速发展，为中药指纹图谱的研究、应用及完善提供了技术保证。今后应该利用计算机容量大和速度快的特点，开发与分析仪器相配套的解读指纹图谱的分析软件，使结果分析更科学合理，在中药指纹图谱数据积累的基础上建立信息数据库，使中药质量管理更加科学化。在此基础上进行化学成

9、分与药效相关性的研究，使中药的应用更加安全、有效。中药指纹图谱全面地反映了中药所含化学成分的复杂性和相关性。随着标准、规范的中药指纹图谱的实施和应用，将会有力地推动中药产业现代化和国际化的进程18。 参考文献：1王金童,王秀娟.枸杞子的化学成分和药理研究概况J.天津药学,1999,(11):14-15 2 田庚元.枸杞子糖缀合物的结构与生物活性研究J.世界科学技术中医药现代化, 2003,5(4): 22-30. 3 朱彩平，张声华.枸杞子水提物中多糖含量的J 食品与发酵工业， 2005,31(2):111-113 4 张吉,邹巧根,宋吉等.云芝糖肽的单糖组成分析J.中国药科大学学报,2001

10、,32(2):137-140.5 姚新生.天然药物化学 M .北京:人民卫生出版社, 2006: 6; 71 - 77.6 邬应龙漂白魔芋微粉的结构于特性研究D浙江大学，20067 Colquhoun I J，Jay A J，Eagles J，et alStructure and conformation of a novel genetica engineered polysaccharide P2JCarbohydrate Research，2001，330(4)：3253338 Landersjo C，Weintraub A，Widmalm GStructural analysis of

11、 the O-antigen polysacchafrom the shiga toxin-producing Escherichia coli O172JEuropean Journal of Biochemis2001268：223922459 朱彩平,张声华.枸杞多糖对高脂血症小鼠血脂及脂质过氧化的影响J.营养学报, 2005,(01):101-105 10 张华华,梁朋.枸杞子对 D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的作用J.中国医药导报, 2008,(21):99-107 11 肖春生，田华雨陈学思，等智能性生物医用高分子研究进展J中国科学B辑学，2008，38(10)：86788012 王萍，杨爱兰，李彩霞海洋生物多糖在医学中的应用与研究J甘肃中医学院学,2004，3(21)：535513 马林，古练权化学生物学导论M北京：化学工业出版社，2006(1)：8911314 马宝瑕，陈新，邓军娥中药多糖研究进展J中国医院药