不同溶剂海芋提取物的体外抗肿瘤活性研究

1、不同溶剂海芋提取物的体外抗肿瘤活性研究        【摘要】  目的研究海芋不同溶剂提取物的抗肿瘤作用。方法体外抗肿瘤活性研究采用MTT比色法，靶细胞采用人肺癌细胞株A549、黑色素瘤细胞株B16、人胃腺癌细胞株BGC-823、神经肿瘤细胞株NG108-15。结果海芋醋酸乙酯提取物对A549，B16，BGC-823的IC50分别为94.6， 541.9，629.5 g·ml-1,丙酮提取物对A549，B16的IC50分别为40.9，438.0 g·ml-1，而海芋的环己烷，石油醚，乙

2、醇，水提物对各种细胞株的IC50剂量都比较大。海芋的丙酮和醋酸乙酯提取物分别在60 g·kg-1和36.5 g·kg-1的给药剂量下没有显示明显的急性毒性。结论醋酸乙酯和丙酮提取物有较好的细胞毒活性，没有明显的急性毒性，这两部分有较好的抗肿瘤前景。 【关键词】  海芋 提取物 抗肿瘤 活性Abstract：ObjectiveTo study the anticancer effects of different solvent extracts from Alocasia macrorrhiza in vitro.MethodsMTT method was use

3、d to detect the survival of tumor cells treated with diffenent solvent extract from Alocasia macrorrhiza in vitro, tumor  cell A549, B16, BGC-823, NG108-15 was used as target cell. ResultsThe IC50 of the ethyl acetate extract from Alocasia macrorrhiza to A549, B16, BGC-823 were 94.6, 541.9,629.

4、5 g·ml-1 respectively，and those of the acetone extract from Alocasia macrorrhiza to A549 and B16 40.9,438.0 g·ml-1 respectively. But there were quite large dosages of the IC50 of the extracts of cyclohexane, benzine, ethyl alcohol and water from Alocasia macrorrhiza to all kinds of cell li

5、nes. The obvious acute toxicities were not observed for the ethyl acetate and acetone extracts of Alocasia macrorrhiza under the treatment doses of 60g·kg-1 and 36.5 g·kg-1 respectively.ConclusionThere is good cytotoxicity of the ethyl acetate and acetone extracts from Alocasia macrorrhiza

6、 to tumor cells, and no obvious acute toxicity has been observed. Therefore these two parts have good anti-tumor prospects.Key words：Alocasia macrorrhiza;   Extract;   Anticancer;  Activity海芋，别名广东狼毒、野芋、独脚莲、老虎芋等，为天南星科植物海芋Alocasia macrorrhiza(L.)Schott的干燥根茎，首载于本草拾遗，原称天荷。本草纲目始称

7、为海芋，是岭南地区常用民间草药。本草纲目记载其主治“疟瘴毒肿风癞”，“可以治疠”1。分类草药性载其能“治一切恶疮肿毒”。广西中药志近代临床经验，载其可治“肺结核、痧症、热病等”2。本品有清热解毒、消肿散结之功。临床用于高热、流感、风湿痛、疮疡肿毒、蛇虫咬伤等病症。近年来，民间也用海芋恶性肿瘤。经上海中医药大学的可燕等3调查了解，目前上海市及其邻近地区各中药店、中出售的作“蛇六谷”使用的中药原植物均为海芋的根茎。蛇六谷广泛用来治疗各种肿瘤，如上海群力草药店用其治疗胃癌、胃腺癌、鼻咽癌、乳腺癌等，名中医陆德铭教授用其治疗乳腺癌4。所有这些资料表明，海芋中有对肿瘤有较好活性的化合物，所以本文对海芋的

8、多种溶剂提取物进行了体外细胞毒活性测定，寻找有效的活性部位，并测定了活性较好的部位的急性毒性，为将该提取物开发为有效的抗肿瘤药物奠定了基础，同时为寻找海芋中的活性单体化合物指明了方向。1 材料海芋采自云南省勐腊县勐仑镇，经院西双版纳热带植物园任盘宇老师鉴定为Alocasia macrorrhiza (L.) Schott。作为药材用其根部。人肺癌细胞株A549、黑色素瘤细胞株B16、人胃腺癌细胞株BGC-823、神经肿瘤细胞株NG108-15均购自中科院上海细胞库。植物提取、分离过程中用到的溶剂均为分析纯，为天津元立公司产品；MTT(四氮唑)为Sigma公司产品；FBS(胚胎牛血清)为美国Hy

9、clone公司产品；RPMI1640和DMEM培养基为美国Gibco公司产品；Trypsin(胰蛋白酶)为上海林叶生物科技有限公司产品。2 方法21  海芋不同溶剂提取物的制备称取干燥的海芋根部1 500 g，将其在粉碎机上粉碎，然后从中取1 200 g，以每份200 g等分为6 份，分别用环己烷、石油醚、醋酸乙酯、丙酮、乙醇、水为溶剂进行提取，每种溶剂提取方法如下：用800 ml溶剂和药材混匀，然后将其放在恒温震荡水浴锅上进行提取，温度控制在50，同样的溶剂用量提取两次，12 h/次，合并提取液，然后不高于50用旋转蒸发仪将其蒸干，得各种溶剂的海芋提取物，然后在真空干燥箱中继续烘干

10、至恒重。22  MTT法测定细胞培养条件为：37，5 %CO2 ，含10 %小牛血清的RPMI 1640 培养基。用胰蛋白酶消化癌细胞，以配制细胞悬液,浓度为1×107 cell·L -1，于96 孔培养板内每孔接种100 l(每孔含1 000个细胞)。用培养基配制样品，设4个浓度：0.1，1，10，100 g·ml-1 ，每组设3 个平行孔，每孔加样0.1 ml。置孵育箱中培养96 h 后弃去培养液，每孔加入0.5 % MTT 溶液0.1 ml 。37保温4 h ，弃上清液，每孔加入DMSO 0.1 ml，振荡混匀，用酶标仪检测(参比波长450 nm

11、，检测波长570 nm) ，以下式药物对细胞生长的抑制率：    细胞生长抑制率 (%)=(1 - A样品组/A对照组) ×100 %。以SPSS 10.0 软件计算IC50。1         23  急性毒性实验预试后发现海芋丙酮和醋酸乙酯提取物急性毒性甚小，无法测出其LD50，故改为测定其最大耐受量。将海芋醋酸乙酯提取物和丙酮提取物分别用30%乙醇水溶液进行溶解，配成饱和溶液，分别得1.2 g/ ml和0.73 g/ ml的溶液。然后两种提取物组各取昆明种小鼠

12、20只，禁食不禁水12 h 后，以最大体积(50 ml·kg-1 ) ，24 h内两次灌胃给药，间隔12 h。给药后连续14 d观察动物的毒性症状及死亡情况。3  结果31  海芋提取物的细胞毒活性海芋提取物对不同肿瘤细胞的抑制率见表1。表1  海芋提取物对不同肿瘤细胞的抑制率（略）    表1可以得到，海芋醋酸乙酯提取物和丙酮提取物有较好的细胞毒活性，经SPSS软件可知，醋酸乙酯提取物对A549、B16、BGC-823的IC50分别为94.6，541.9，629.5g·ml-1, 丙酮提取物对A549、B16的I

13、C50分别为40.9，438.0g·ml -1，而海芋的环己烷，石油醚，乙醇，水提物活性则较差，对各种细胞株的IC50剂量都比较大，不具有明显细胞毒作用。32  海芋醋酸乙酯、丙酮提取物的急性毒性实验实验期间，给药动物的活动、外观、行为、毛发、呼吸、摄食、大小便、粘膜等均无明显异常，肉眼观察各主要脏器，亦未发现明显异常，各给药动物在给药后14 d 内均无死亡。4  讨论实验结果显示海芋的醋酸乙酯和丙酮提取物有较好的细胞毒活性，所以可以推测海芋中细胞毒活性比较好的化合物可能是中等极性的化合物，同时这两部分提取物在最大给药剂量下，没有显示明显的毒性，预示这两部分提取物

14、有非常大的进一步研究价值，可以从中寻找具有好的细胞毒活性的单体化合物。实验结果说明海芋中含有肿瘤细胞毒作用的化合物，初步证实了在民间用海芋进行肿瘤的可行性。但该实验也显示单纯低温海芋水提物的细胞毒活性并不明显，而临床上海芋作为复方制剂中的一味中药，它起效的原因可能是沸水提取能较好地将一些中等极性的化合物提取出来，也可能是其他中药中的成分有助溶作用，从而利于海芋中中等极性成分的溶解，当然另一种较大可能是海芋水提物抗肿瘤活性主要起效途径是增强身体自身免疫力，缓解其他药物的毒性，这个比较符合彭淑芳5的研究结论。海芋的环己烷、石油醚、乙醇提取物的细胞毒活性较差，同时海芋的环己烷、石油醚提取率也较低，所以海芋中的低级性化合物的细胞毒活性意义不大。但海芋的乙醇提取物提取率较高，活性也不是很大，很可能是由于海芋中具有细胞毒活性的化合物浓度较低的缘故，需要以后进一步