植物组织中可溶性糖与淀粉的测定

1、植物组织中可溶性糖与淀粉的测定一、意酮法测定可溶性糖【仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度吸管5ml1支，1ml2支；记号笔；吸水纸适量。【试剂】1 .慈酮乙酸乙酯试剂：取分析2酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。2 .浓硫酸（比重）。【方法】1 .标准曲线的制作取20ml刻度试管11支，从010分别编号，按表24-1加入溶液和水。表1各试管加溶液和水的量管号012345678910100pg/ml蔗糖液(ml)0水(ml)蔗糖量（Hg）020406080100然后按顺序向试管内加入1ml9%茶酚溶液，摇匀，再从管

2、液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入慈酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。2 .可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.30g,共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入510m

3、l蒸储水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3 .显色测定吸取样品提取液于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸储水，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。4 .计算可溶性糖的含量可溶性糖含量（mg/g尸W103式中C标准方程求得糖量（pg）;a V n W吸取样品液体积（ml）;提取液量（ml）;-稀释倍数；组织重量（g）四、淀粉含量的测定【仪器与用具】电子天平；容量瓶：100mlX4,50mlx2;漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管X1,X3,5mlX4;分光光度计；记号笔。【试剂】（1）浓硫酸（比重）；（

4、2） LHCQ;（3） 2嫄酮试剂：同意酮法（或9豚酚，同方法一）；（4）淀粉标准液：准确称取100mgM淀粉，放入100ml容量瓶中,加6070ml热蒸储水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸储水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg吸取此液，加蒸储水稀释至50ml,即为每ml含淀粉100wg的标准液。【方法】1.标准曲线制作取小试管11支从010编号，按表2加入溶液和蒸储水以下步骤按苯酚法或慈酮法均可，绘制相应的标准曲线。表2各试管加入标准液和蒸储水量管号012345678910淀粉标准液（ml）0蒸储水（ml）0淀粉含量（mg»040801201602002.样品提取将提取可溶性糖以后的残

5、渣，移入50ml容量瓶中，力口20ml热蒸储水，放入沸水浴中煮沸15min,再加入L高氯酸2ml提取15min,冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸储水定容（或以2500r/min离心10min）。3.测定可采用苯酚法或慈酮显色法测定按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量（%c V a_ =W 106100式中C标准曲线查得的淀粉含量（wg）;V提取液总量（ml）;a一显色时取液量（ml）;W-样品重（g）。注：淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml