植物生物技术 愈伤组织的诱导继代及分化

1、植物愈伤组织的诱导、植物愈伤组织的诱导、继代及分化继代及分化专业：生化分子专业：生化分子姓名：杨婷姓名：杨婷学号：学号：16231200191623120019主要内容第一节第一节 愈伤组织的诱导与继代培养愈伤组织的诱导与继代培养第二节第二节 悬浮培养悬浮培养第三节第三节 愈伤组织的分化与植株再生愈伤组织的分化与植株再生第一节 愈伤组织的诱导与继代培养一、愈伤组织的概念一、愈伤组织的概念 指植物受到机械、动物、微生物等指植物受到机械、动物、微生物等伤害伤害后，创伤部位的细胞后，创伤部位的细胞脱分化脱分化而而不断增值形成松散排列、无特定结构和功能的不断增值形成松散排列、无特定结构和功能的薄壁分生

2、群薄壁分生群。 愈伤组织培养已被广泛的用于愈伤组织培养已被广泛的用于植物突变体筛选、植物细胞转化植物突变体筛选、植物细胞转化以及以及无无性快速繁殖性快速繁殖等方面的研究。同时，未分化愈伤组织也是等方面的研究。同时，未分化愈伤组织也是植物细胞悬浮培养植物细胞悬浮培养及及原生质体分离原生质体分离和和培养培养主要的材料来源和良好的遗传转化系统。主要的材料来源和良好的遗传转化系统。二、愈伤组织的诱导1 1、外植体的选择、外植体的选择 选择外植体要综合考虑以下几个因素选择外植体要综合考虑以下几个因素: : 大小要适宜，不宜太小。外植体的组织块要达到大小要适宜，不宜太小。外植体的组织块要达到2 2万个细胞

3、万个细胞（5-10mg5-10mg）以上才容易成活；）以上才容易成活；同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别；同一植物不同部位的外植体，其细胞的分化能力、分化条件及分化类型有相当大的差别；植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织；植物胚与幼龄组织器官比老化组织、器官更容易去分化，产生大量的愈伤组织；不同物种相同部位的外植体其分化能力可能大不一样。不同物种相同部位的外植体其分化能力可能大不一样。 总之，外植体的选择一般以幼嫩的组织或器官为宜。总之，外植体的选择一般以幼嫩的组织或器官为宜。用于培养的外植体包括根、茎、叶、用于培养的外

4、植体包括根、茎、叶、果实、子房、花粉、花瓣等各种器官或组织。果实、子房、花粉、花瓣等各种器官或组织。2 2、外植体材料的消毒、外植体材料的消毒一般采用一般采用次氯酸钠次氯酸钠，其能分解成为具有杀菌效能的氯气，然后就散失到空气中。，其能分解成为具有杀菌效能的氯气，然后就散失到空气中。使用时按使用时按1:101:10稀释，消毒时间以材料定，消毒后无菌水冲洗稀释，消毒时间以材料定，消毒后无菌水冲洗4-54-5次。次。0.1%0.1%氯化汞氯化汞是一种令人满意的消毒剂，只是难以去除，故在消毒后必须用大量清是一种令人满意的消毒剂，只是难以去除，故在消毒后必须用大量清水冲洗材料。水冲洗材料。在材料放入消毒

5、剂之前，先在乙醇中漂洗一下，可以使材料表面弄湿，从而使消在材料放入消毒剂之前，先在乙醇中漂洗一下，可以使材料表面弄湿，从而使消毒剂易于渗入并杀死微生物。毒剂易于渗入并杀死微生物。3 3、培养基、培养基采用的培养基的基本成分相似，但对于不同植物，同一植物不同物种都要对培养采用的培养基的基本成分相似，但对于不同植物，同一植物不同物种都要对培养成分作相应改动，尤其是成分作相应改动，尤其是激素的成分和浓度是极为重要的因素激素的成分和浓度是极为重要的因素。一般选择。一般选择盐浓度较盐浓度较高的培养基高的培养基如如MSMS，B5B5及它们的改良培养基来进行愈伤组织诱导效果较好。及它们的改良培养基来进行愈伤

6、组织诱导效果较好。培养基中培养基中还原态氮还原态氮（主要为铵态氮）含量高，有利于愈伤组织的诱导；（主要为铵态氮）含量高，有利于愈伤组织的诱导；高钙高磷高钙高磷组合的培养基有利于小麦愈伤组织的诱导、生长和再生。对大多数植物组合的培养基有利于小麦愈伤组织的诱导、生长和再生。对大多数植物组织来讲，组织来讲，激素激素是愈伤组织培养基中不可缺少的组成成分。是愈伤组织培养基中不可缺少的组成成分。生长素生长素，对于细胞分裂，对于细胞分裂的诱导以及在其后的生长和增殖，都是的诱导以及在其后的生长和增殖，都是必要的物质必要的物质。细胞分裂素未必是。细胞分裂素未必是必需的物质必需的物质，然而，常常因不同的供试材料而

7、异。然而，常常因不同的供试材料而异。4 4、诱导条件、诱导条件光照光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需光，在黑暗或散光条件下最好。分化、继代培：愈伤组织的诱导需弱光或不需光，在黑暗或散光条件下最好。分化、继代培养一般需光。此时光对器官的作用是一种诱导反应。养一般需光。此时光对器官的作用是一种诱导反应。温度温度：外植体接入诱导培养基后，一般采用：外植体接入诱导培养基后，一般采用2525- -2828的恒温条件下培养。的恒温条件下培养。湿度湿度：较大，以免引起培养基干缩。：较大，以免引起培养基干缩。一般双子叶比单子叶植物及裸子植物容易；一般双子叶比单子叶植物及裸子植物容易；二倍体种子植物，无论茎、叶、

8、花等皆易去分化，特别是形成层和薄壁细胞容易二倍体种子植物，无论茎、叶、花等皆易去分化，特别是形成层和薄壁细胞容易诱导愈伤组织。诱导愈伤组织。5 5、愈伤组织的形成、愈伤组织的形成从单个细胞或外植体上脱分化形成典型的愈伤组织，大致经历从单个细胞或外植体上脱分化形成典型的愈伤组织，大致经历三个时期：三个时期：起动期、分裂期和形成期起动期、分裂期和形成期；起动期，又称为诱导期起动期，又称为诱导期，是愈伤组织形成的起点。外植体已分，是愈伤组织形成的起点。外植体已分化的活细胞在外源激素的作用下，通过脱分化起动而进入分裂状态，化的活细胞在外源激素的作用下，通过脱分化起动而进入分裂状态，并开始形成愈伤组织。

9、在诱导期，细胞的大小仍然和外植体时一样，并开始形成愈伤组织。在诱导期，细胞的大小仍然和外植体时一样，因此因此外观上未见明显变化外观上未见明显变化，但代谢活化了，但代谢活化了，细胞内一些大分子代谢细胞内一些大分子代谢动态已发生明显的改变动态已发生明显的改变，细胞正积极为下一步分裂进行准备。，细胞正积极为下一步分裂进行准备。 分裂期分裂期: :外植体切口边缘开始膨大，外层细胞通过一分为二的方式进行分裂，外植体切口边缘开始膨大，外层细胞通过一分为二的方式进行分裂，而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁增而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁增到最大

10、等。从而形成一团具有分生组织状态细胞的过程。这时组织到最大等。从而形成一团具有分生组织状态细胞的过程。这时组织细胞代谢细胞代谢十分活跃，发生了一系列生理生化及形态的变化。十分活跃，发生了一系列生理生化及形态的变化。 愈伤组织的特征愈伤组织的特征：细胞分裂快，结构疏散，缺少有组织的结构，颜色浅而透：细胞分裂快，结构疏散，缺少有组织的结构，颜色浅而透明。明。 形成期形成期: :是指外植体的细胞经过诱导、分裂形成了具有无序结构的愈伤组是指外植体的细胞经过诱导、分裂形成了具有无序结构的愈伤组织时期。这个时期特征是细胞大小不再发生变化，结构的形成过程加速，织时期。这个时期特征是细胞大小不再发生变化，结构

11、的形成过程加速，愈伤组织表层的分裂逐渐减慢和停止，为次生生长所代替，大量次生结愈伤组织表层的分裂逐渐减慢和停止，为次生生长所代替，大量次生结构出现。在这时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的平均大小往构出现。在这时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的平均大小往往没有变化。内部组织细胞开始分裂，细胞数目进一步增加。往没有变化。内部组织细胞开始分裂，细胞数目进一步增加。愈伤组织的特征：愈伤组织的特征：生长旺盛的愈伤组织一般生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色；而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐

12、色。色。三、愈伤组织的继代培养和生长特性三、愈伤组织的继代培养和生长特性愈伤组织的继代培养愈伤组织的继代培养愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的继续正常生长，更换一愈伤组织培养一段时间后必须转移到新鲜培养基上以保持培养物的继续正常生长，更换一次培养基称一代继代培养次培养基称一代继代培养。1 1、为什么要进行继代培养？、为什么要进行继代培养？经过诱导培养一段时间后，培养基里的养分耗尽经过诱导培养一段时间后，培养基里的养分耗尽培养基已干燥培养基已干燥生长物已充满培养瓶生长物已充满培养瓶培养物需要扩繁培养物需要扩繁琼脂培养基褐化或发黑（因为植物组织在培养前几周有时会产生毒素物质

13、，这些物质会扩散琼脂培养基褐化或发黑（因为植物组织在培养前几周有时会产生毒素物质，这些物质会扩散进入培养基）进入培养基）需要让培养物在一种新的营养条件下生长需要让培养物在一种新的营养条件下生长培养基由于植物材料的原因使培养基由于植物材料的原因使pHpH降低，导致培养基液化降低，导致培养基液化 理论上愈伤组织是可以无限制继代，但愈伤组织继代次数增加，形态发生能力逐渐丧失。理论上愈伤组织是可以无限制继代，但愈伤组织继代次数增加，形态发生能力逐渐丧失。2 2、愈伤组织继代培养方式、愈伤组织继代培养方式 继代培养继代培养培养分为培养分为固体固体和和液体液体培养两大类。培养两大类。 液体培养液体培养又分

14、又分静止静止和和振荡振荡培养的二类。培养的二类。 愈伤组织在液体培养基中培养应符合：愈伤组织在液体培养基中培养应符合：（1 1）三角烧瓶容纳的培养基占总容积的）三角烧瓶容纳的培养基占总容积的20%20%30%30%，培养基含量可随培养物量的减，培养基含量可随培养物量的减少而减少；少而减少；（2 2）转速一般为）转速一般为8080100 r/min100 r/min；（3 3）细胞或愈伤组织的生长呈典型的）细胞或愈伤组织的生长呈典型的S S型曲线，即延滞期（型曲线，即延滞期（lag phaselag phase），对数生），对数生长期（长期（log phaselog phase），然后逐渐减慢，

15、直至停止。），然后逐渐减慢，直至停止。3 3、愈伤组织的生长特性、愈伤组织的生长特性一般情况下，一般情况下，2525下培养的愈伤组织需要每下培养的愈伤组织需要每4646周继代一次。大多数研究工作周继代一次。大多数研究工作表明，对表明，对30 ml30 ml培养基中愈伤组织每培养基中愈伤组织每2828天天继代一次可以获得一个保持长期分裂状态、继代一次可以获得一个保持长期分裂状态、细胞基本均一的稳定群体。细胞基本均一的稳定群体。第一次继代培养时用无菌刀片将新鲜愈伤切下，无菌地转入新鲜培养基上，被第一次继代培养时用无菌刀片将新鲜愈伤切下，无菌地转入新鲜培养基上，被转移的愈伤小块不宜过小，否则生长会受

16、抑制。一旦愈伤建立起来，多数愈伤系需转移的愈伤小块不宜过小，否则生长会受抑制。一旦愈伤建立起来，多数愈伤系需要每月继代一次。继代时般情况下不需改变原培养基的成分，但很多物种需要将要每月继代一次。继代时般情况下不需改变原培养基的成分，但很多物种需要将生生长素降低些，尤其是使用长素降低些，尤其是使用2 2，4-D4-D时时。一般地，经过继代培养的愈伤组织在稳定生长一般地，经过继代培养的愈伤组织在稳定生长1 12 2代后，具有代后，具有S S型生长曲线。开型生长曲线。开始始一周一周生长缓慢，中间生长缓慢，中间3 3周周生长很快，生长很快，4 4周周以后生长又变迟缓。以后生长又变迟缓。第二节第二节 悬

17、浮培养悬浮培养悬浮培养悬浮培养: :一般是把一些小块生长旺盛的愈伤组织一般是把一些小块生长旺盛的愈伤组织放入液体培养基中，进行振荡培养，从而使愈伤放入液体培养基中，进行振荡培养，从而使愈伤组织块变成良好分散性的组织块变成良好分散性的细胞和小的细胞聚集体细胞和小的细胞聚集体。愈伤组织通过悬浮培养能产生大量的比较均一愈伤组织通过悬浮培养能产生大量的比较均一的细胞，而且细胞增殖速度快，适宜进行大规模的细胞，而且细胞增殖速度快，适宜进行大规模细胞的培养。细胞的培养。悬浮培养的用途悬浮培养的用途 提供一个相对一致的细胞群体（供生化研究、胚胎发生研究、胚的同步化研提供一个相对一致的细胞群体（供生化研究、胚

18、胎发生研究、胚的同步化研究等）究等） 能快速吸收外源物质，检查药效能快速吸收外源物质，检查药效 研究次生代谢、酶诱导、基因表达、抗生素的降解的良好实验体系研究次生代谢、酶诱导、基因表达、抗生素的降解的良好实验体系 多数悬浮细胞缺乏叶绿体、色素，对酶和次生物质的分离及纯化十分有利多数悬浮细胞缺乏叶绿体、色素，对酶和次生物质的分离及纯化十分有利 细胞增殖速度快，适于进行大规模培养细胞增殖速度快，适于进行大规模培养 分离原生质体的良好细胞来源分离原生质体的良好细胞来源第三节第三节 愈伤组织的分化与植株再生愈伤组织的分化与植株再生将愈伤组织转入分化培养基中，它可以再生分化完成将愈伤组织转入分化培养基中

19、，它可以再生分化完成形态发生形态发生而产生芽根结构的分生组织或胚状体。继之，由这些有结构的组织而产生芽根结构的分生组织或胚状体。继之，由这些有结构的组织发育成完整的小植株。植物组织细胞离体培养中的形态发生可通过发育成完整的小植株。植物组织细胞离体培养中的形态发生可通过器官发生器官发生和和体细胞胚胎发生体细胞胚胎发生这两种途径形成再生植株。这两种途径形成再生植株。体细胞胚胎发生体细胞胚胎发生：指从体细胞进行的类胚结构的生产。体细胞：指从体细胞进行的类胚结构的生产。体细胞胚是一个胚是一个二极二极结构，不物理地附着于原组织，每一个体细胞胚称为结构，不物理地附着于原组织，每一个体细胞胚称为胚状体，它可

20、以同合子胚一样发育成植株。胚状体，它可以同合子胚一样发育成植株。器官发生器官发生：指从愈伤组织形成芽及根的过程，芽及根是一个：指从愈伤组织形成芽及根的过程，芽及根是一个单单极性结构极性结构，物理地同母体组织联结着。，物理地同母体组织联结着。一、器官发生与植株再生方式在适合的激素浓度和配比及温光条件下，愈伤组织细胞会发生生理代谢上在适合的激素浓度和配比及温光条件下，愈伤组织细胞会发生生理代谢上的改变，促使细胞分裂部位和方向改变，首先出现分生细胞，经细胞分裂逐渐的改变，促使细胞分裂部位和方向改变，首先出现分生细胞，经细胞分裂逐渐形成分生细胞团和分生组织，进一步再分化形成维管结节直至分化成芽和根等形

21、成分生细胞团和分生组织，进一步再分化形成维管结节直至分化成芽和根等器官。器官。可以把愈伤组织分化出芽、根器官概括为以下几种方式可以把愈伤组织分化出芽、根器官概括为以下几种方式：单极分化单极分化： 愈伤组织中的分生中心在刺激物质的影响下向着一极分化，形成愈伤组织中的分生中心在刺激物质的影响下向着一极分化，形成有根无芽有根无芽或或者者有芽无根有芽无根的现象。的现象。双极分化双极分化： 愈伤组织中随着细胞分裂出现两个或两个以上分生中心，其中有的分化芽，愈伤组织中随着细胞分裂出现两个或两个以上分生中心，其中有的分化芽，有的分化根，根芽之间有的分化根，根芽之间并无输导等组织沟通并无输导等组织沟通，在培养

22、瓶内靠愈伤组织提供养料，在培养瓶内靠愈伤组织提供养料，这种以愈伤组织隔离着的芽和根的苗，常常不能移栽成活。这种以愈伤组织隔离着的芽和根的苗，常常不能移栽成活。先芽后根：先芽后根：愈伤组织中产生多个分生细胞形成分生中心，从中仅分化出芽，一般情况下待芽愈伤组织中产生多个分生细胞形成分生中心，从中仅分化出芽，一般情况下待芽长到一定大小时，切下移入生根培养基中，在其基部即可分化出根。有些植物在分长到一定大小时，切下移入生根培养基中，在其基部即可分化出根。有些植物在分化芽的培养基上同时在芽器官基部分化出根，形成完整的植株。大多数植物均属这化芽的培养基上同时在芽器官基部分化出根，形成完整的植株。大多数植物

23、均属这类正常的分化途径，这类苗移栽较易成活。类正常的分化途径，这类苗移栽较易成活。先根后芽：先根后芽：有些植物外植体脱分化后在愈伤组织上先分化出根，而后在靠近愈伤组织的根部有些植物外植体脱分化后在愈伤组织上先分化出根，而后在靠近愈伤组织的根部上再分化出芽，有的将根切下放入分化培养基，再于根上分化出芽器官，甚至在根上再分化出芽，有的将根切下放入分化培养基，再于根上分化出芽器官，甚至在根端也能分化出芽。端也能分化出芽。影响器官发生的因素影响器官发生的因素1 1、 化学因素化学因素: :高浓度的生长素和低浓度的分裂素高浓度的生长素和低浓度的分裂素可以促使细胞连续繁殖可以促使细胞连续繁殖无组织的生长无

24、组织的生长。高浓度的分裂素能引起高浓度的分裂素能引起茎茎- -芽芽形成。形成。生长素促进根分化，分裂素促进芽分化生长素促进根分化，分裂素促进芽分化。2 2、物理因素、物理因素光光：光照条件下：光照条件下, ,一些植物均能进行器官发生，说明光周期并不是一些植物均能进行器官发生，说明光周期并不是非常重要的因子，可有的植物在光、暗交替条件下才能形成芽，而在非常重要的因子，可有的植物在光、暗交替条件下才能形成芽，而在连续光照下则不能。尽管如此，多数植物需要一个稳定的光周期，多连续光照下则不能。尽管如此，多数植物需要一个稳定的光周期，多数培养条件是数培养条件是14-16h14-16h光照，光照，8-10

25、h8-10h黑暗黑暗。光质对于某些植物可能也很。光质对于某些植物可能也很重要。重要。温度温度：不同植物不一样，需要摸索，如烟草和棉花就不一样。：不同植物不一样，需要摸索，如烟草和棉花就不一样。3 3、外植体的生理状态、外植体的生理状态和成熟及高度分化的细胞相比，由和成熟及高度分化的细胞相比，由分生细胞和胚细胞分生细胞和胚细胞产生的愈伤组织产生的愈伤组织具有较高的再生能力。具有较高的再生能力。外植体的个体外植体的个体发育年龄发育年龄和和部位、大小部位、大小 。4 4、 培养物的年龄培养物的年龄 愈伤组织在愈伤组织在增殖培养基增殖培养基上生长过久，致使组织衰老后移至分化培养上生长过久，致使组织衰老

26、后移至分化培养基上，往往会基上，往往会推迟推迟器官的分化。器官的分化。二、体细胞发生与植株再生在离体组织细胞培养形成胚状体在离体组织细胞培养形成胚状体的过程中，体细胞分裂增殖并顺序的过程中，体细胞分裂增殖并顺序通过通过原胚期，球形胚期，心形球形原胚期，球形胚期，心形球形胚期心形胚期，鱼雷形胚期和子叶胚期心形胚期，鱼雷形胚期和子叶期五个时期期五个时期，进而形成完整的植株，进而形成完整的植株的过程。与整体植物中受精卵的发的过程。与整体植物中受精卵的发育过程极为相似。育过程极为相似。（一）、植物胚状体发生的普遍性（一）、植物胚状体发生的普遍性由于培养的植物组织细胞一般是体细胞，因而将由离体培养的组织

27、由于培养的植物组织细胞一般是体细胞，因而将由离体培养的组织细胞分化出的胚叫细胞分化出的胚叫体细胞胚体细胞胚；由于离体培养的植物组织细胞是在未经过；由于离体培养的植物组织细胞是在未经过有性过程的情况下直接产生胚这一结构，并且形成的胚与性细胞形成的有性过程的情况下直接产生胚这一结构，并且形成的胚与性细胞形成的胚相似，因此也将此类胚称为胚相似，因此也将此类胚称为胚状体胚状体。（二）、（二）、胚状体的概念与分类胚状体的概念与分类胚状体胚状体: : 是植物组织培养中起源于非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的胚状结构。是植物组织培养中起源于非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的胚状结构。这个

28、定义包括下列几点含义：这个定义包括下列几点含义：胚状体是组织培养的产物，只限于组织培养范围使用，区别于无融合生殖的胚；合生殖的胚；胚状体是组织培养的产物，只限于组织培养范围使用，区别于无融合生殖的胚；合生殖的胚；胚状体起源于非合子细胞，区别于合子胚；胚状体起源于非合子细胞，区别于合子胚；胚状体的形成经历胚胎发育的过程，区别于组织培养中分化的芽。胚状体的形成经历胚胎发育的过程，区别于组织培养中分化的芽。无融合生殖：无融合生殖：是不经过雌、雄性细胞融合直接由营养体细胞或未进行减是不经过雌、雄性细胞融合直接由营养体细胞或未进行减数分裂的大孢子母细胞发育成的无性胚或无性种子，这种无性胚或无性数分裂的大

29、孢子母细胞发育成的无性胚或无性种子，这种无性胚或无性种子具有保持杂合性的特点，因而能够固定杂种优势。种子具有保持杂合性的特点，因而能够固定杂种优势。胚状体按其来源分为两大类胚状体按其来源分为两大类一类是由普通植物体（孢子体）的各种器官等双倍体一类是由普通植物体（孢子体）的各种器官等双倍体的体细胞产生的胚状体，也称之为的体细胞产生的胚状体，也称之为体细胞胚体细胞胚；一类是由小孢子或其分裂产物等单倍体细胞产生的胚一类是由小孢子或其分裂产物等单倍体细胞产生的胚状体，通常称为状体，通常称为花粉胚花粉胚，可发育成单倍体植株。，可发育成单倍体植株。不管是那种类型的胚状体，它都有两个特点：不管是那种类型的胚

30、状体，它都有两个特点：两极性，即在其发生的最早阶段就具有根端（胚根）两极性，即在其发生的最早阶段就具有根端（胚根）和茎端（胚）和茎端（胚） ；它与母体植物或外植体的维管束系统无直接连系。它与母体植物或外植体的维管束系统无直接连系。植株再生通过胚状体与器官两种途径的主要区别植株再生通过胚状体与器官两种途径的主要区别胚状体途径形成的植株胚状体途径形成的植株器官途径形成的植株器官途径形成的植株细胞内出现方向相反的两级分化，具有根端和芽端两个分生中心单向极性，单个分生中心不定胚维管组织与外植体维管组织不相连，是独立“Y”字型结构不定芽和不定根与愈伤组织的维管相连无胚胎形态， 分生中心直接分化为器官具有

31、典型的胚胎形态发生过程形成的幼苗具有子叶不定芽的苗无子叶胚状体发育的苗，根和芽齐全一般先长芽后长根，或先长根后长芽影响胚状体发生和发育的外部条件1 1、 植物激素植物激素（1 1） 生长素类物质生长素类物质在对胡萝卜胚状体的发生研究中发现，其胚状体的发生可分为两个阶段：在对胡萝卜胚状体的发生研究中发现，其胚状体的发生可分为两个阶段：第一阶段第一阶段包括外植体细胞的脱分化、愈伤组织的诱导、胚性细胞或细胞团包括外植体细胞的脱分化、愈伤组织的诱导、胚性细胞或细胞团的形成，这一阶段所用的培养基必须含有生长素类物质，主要是的形成，这一阶段所用的培养基必须含有生长素类物质，主要是2 2，4-D4-D；第二

32、阶段第二阶段包括胚状体的形成和发育，这一阶段必须在降低包括胚状体的形成和发育，这一阶段必须在降低2 2，4-D4-D浓度或浓度或完全去除完全去除2 2，4-D4-D的培养基上才能进行。的培养基上才能进行。(2) (2) 细胞分裂素类物质细胞分裂素类物质细胞分裂素不仅没有诱导的作用细胞分裂素不仅没有诱导的作用( (单独使用不能诱导愈伤单独使用不能诱导愈伤) ) ，而且对已，而且对已完成诱导的愈伤组织中胚状体的发生还有完成诱导的愈伤组织中胚状体的发生还有抑制作用抑制作用。但在除去细胞分裂素。但在除去细胞分裂素之后，胚状体发生能力还可能部分地恢复。之后，胚状体发生能力还可能部分地恢复。（3 3）生长素与分裂素结合使用）生长素与分裂素结合使用多数情况下多数情况下，生生长素与细胞分