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文档简介

1、BCA蛋白浓度测定操作步骤一.原理BCA蛋白浓度测定试剂盒（BCA Protein Assay Kit）是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为120微升。试剂盒组份 组 份Cat: KGPBCA（ 250 assay酶标板/50assay 1mL比色杯）蛋白标准溶液（0. 5卩g/卩L ）5 mL BCA 试齐U A 25 mLX2 BCA 试齐U B 1mLA.酶标板操作1. 标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号0 1 2 3

2、 4 5 6 7蛋白标准溶液（口 L） 0 1 2 4 8 12 16 20去离子水（口 L） 20 19 18 16 12 8 40 对应蛋白含量（口 g）0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0孔号01234567蛋白质溶液（口 L）01248121620去离子水（u L）2019181612840相应蛋白质含量（u g）00.512468102. 根据样品数量，按 50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B （50:1 ）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各孔加入200卩L BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡 30sec, 37 °C放置30分钟

3、，然后在562nm下比色测 定。以蛋白含量（u g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5. 稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20 u L,加入BCA工作液200 u L，充分混匀，37C放置30分钟后，以标准曲线 0号管做参比，在562nm波 长下比色，记录吸光值；6. 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（ug），除以样品稀释液总体积（20u L）,乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度 （单 位：u g/ u L） o四.注意事项1. 配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。2. 加入BCA工作液后，也可以在室温放置2小时，或60C放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或延长孵育时间。3待测样品浓度在502000微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系4. BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%勺SDS 5%勺Triton X-100 , 5%勺Tween 20, 60, 80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA氐于10mM无EGTA二硫苏糖醇低于1mM 3 - 巯基乙醇低于1mM不适用BCA法时建议使用Bra

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