乳及乳制品中亚硝酸盐含量的测定

1、 乳及乳制品中亚硝酸盐的测定学习目标学习目标v知识目标：知识目标：v1. 1. 能解释测定亚硝酸含量原理，写出测定亚硝酸盐含量的能解释测定亚硝酸含量原理，写出测定亚硝酸盐含量的流程和注意事项。流程和注意事项。v技能目标：技能目标：v1.1.会正确使用分光光度计；会正确使用分光光度计；v2.2.能正确绘制标准曲线；能正确绘制标准曲线；v3.3.能准确报告检测结果，评价亚硝酸盐含量是否符合标准。能准确报告检测结果，评价亚硝酸盐含量是否符合标准。 v素质目标：素质目标： 1.1.培养学生严谨、务实的学习精神；培养学生严谨、务实的学习精神； 2.2.培养学生开拓创新、团结协作的职业素质。培养学生开拓创

2、新、团结协作的职业素质。 检测依据检测依据乳及乳制品中亚硝酸盐与硝乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定酸盐的测定离子色谱法离子色谱法分光光度法分光光度法123GB 5009.33-2010乳及乳制品中亚硝酸盐的测定乳及乳制品中亚硝酸盐的测定vGB 5009.33-2010-GB 5009.33-2010-第三法第三法测定原理测定原理v试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在滤液中，加入磺胺和试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在滤液中，加入磺胺和N-1-萘基萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在度计在538 nm波长下测其吸光度。波长下测其吸光度。v将

3、测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量。较，就可计算出样品中的亚硝酸盐含量。具体工作任务分解具体工作任务分解任务任务3：样品亚硝酸盐含量测定：样品亚硝酸盐含量测定 任务任务2：样品预处理：样品预处理 任务任务4：结果记录并分析处理：结果记录并分析处理 任务任务1：仪器设备及试剂的准备：仪器设备及试剂的准备任务任务5：填写检验报告单：填写检验报告单 任务一：仪器设备及试剂的准备任务一：仪器设备及试剂的准备v仪器仪器v所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证不带有亚硝酸盐。所有玻璃仪器都要用蒸馏水冲洗，以保证

4、不带有亚硝酸盐。v天平：感量为天平：感量为0.1 mg和和1 mg。v烧杯：烧杯：100 mL。v锥形瓶：锥形瓶：250 mL，500 mL。v比色管：比色管：50 mL。v移液管：移液管：1 mL、2 mL、5 mL和和10 mL。v量筒：根据需要选取。量筒：根据需要选取。v玻璃漏斗：直径约玻璃漏斗：直径约9 cm，短颈。，短颈。v定性滤纸：直径约定性滤纸：直径约18 cm。v分光光度计：测定波长分光光度计：测定波长538 nm，使用，使用1 cm2 cm光程的比色光程的比色皿。皿。任务一：仪器设备及试剂的准备任务一：仪器设备及试剂的准备v试剂：试剂：测定用水应是不含亚硝酸盐的蒸馏水或去离子

5、水。测定用水应是不含亚硝酸盐的蒸馏水或去离子水。v盐酸盐酸-氨水缓冲溶液：氨水缓冲溶液：pH 9.609.70。v硫酸锌溶液硫酸锌溶液v亚铁氰化钾溶液亚铁氰化钾溶液v显色液显色液1：体积比为：体积比为450:550的盐酸。的盐酸。v显色液显色液2：5 g/L的磺胺溶液。的磺胺溶液。v显色液显色液3：1g/L盐酸萘乙二胺溶液盐酸萘乙二胺溶液v亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的浓度为亚硝酸钠标准溶液：相当于亚硝酸根的浓度为1.00g /mL。v将亚硝酸钠在将亚硝酸钠在110120的范围内干燥至恒重。冷却后称的范围内干燥至恒重。冷却后称取取0.150 g，溶于，溶于1000 mL容量瓶中，用水定容。

6、在使用的当容量瓶中，用水定容。在使用的当天配制该溶液。取天配制该溶液。取10 mL上述溶液和上述溶液和20 mL缓冲溶液于缓冲溶液于1000 mL容量瓶中，用水定容。每容量瓶中，用水定容。每1 mL该标准溶液中含该标准溶液中含1.00g的的NO2。分光光度计的使用分光光度计的使用v（1）预热仪器）预热仪器 将选择开关置于将选择开关置于“T”，打开电源开关，使仪，打开电源开关，使仪器预热器预热20分钟。分钟。v为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定为了防止光电管疲劳，不要连续光照，预热仪器时和不测定时应将试样室盖打开，使光路切断。时应将试样室盖打开，使光路切断。 v（2）选定波长）

7、选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的单色波长。的单色波长。 v（3）调节）调节T=0% 轻轻旋动轻轻旋动“0%”旋钮，使数字显示为旋钮，使数字显示为“00.0”（此时试样室是打开的）。（此时试样室是打开的）。 v（4）调节）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试的比色皿放入比色皿座架中的第一格内，并对准光路，把试样室盖子轻轻盖上，调节透过率样室盖子轻轻盖上，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示旋钮，使数字显示正好为正好为“100.0”。 v（

8、5）吸光度的测定）吸光度的测定 将选择开关置于将选择开关置于“A”，盖上试样室，盖上试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度调节旋钮，使数字显示为数字显示为“.000”。将盛有待测溶液的比色皿放入比色。将盛有待测溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架皿座架中的其它格内，盖上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待拉手，使待测溶液进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。测溶液的吸光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。重复上述测定操作重复上述测

9、定操作12次，读取相应的吸光度值，取平次，读取相应的吸光度值，取平均值。均值。 v （6）关机）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，实验完毕，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。并将比色皿座架用软纸擦净。注意事项注意事项 v（1）为了防止光电管疲劳，）为了防止光电管疲劳，不测定时必须将试样室盖打开不测定时必须将试样室盖打开，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。使光路切断，以延长光电管的使用寿命。 v（2）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而）取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。不能碰比色皿的光学表面。 v（3）比色皿不能用碱

10、溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不）比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。 任务二：样品预处理任务二：样品预处理v一、样品的称取和溶解：一、样品的称取和溶解：v在在100 mL烧杯中称取烧杯中称取10 g样品，准确至样品，准确至0.001 g。用。用112 mL 5055的水将样品洗入的水将样品洗入500 mL锥形瓶中，混匀。锥形瓶中，混匀。v二、脂肪和蛋白的去除：二、脂肪和蛋白的去除：

11、v按顺序加入按顺序加入24 mL硫酸锌溶液、硫酸锌溶液、24 mL亚铁氰化钾溶液和亚铁氰化钾溶液和40 mL缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充缓冲溶液，加入时要边加边摇，每加完一种溶液都要充分摇匀。静置分摇匀。静置15 min1 h。然后用滤纸过滤，滤液用。然后用滤纸过滤，滤液用250 mL锥形瓶收集。锥形瓶收集。任务三：乳粉亚硝酸盐含量测定任务三：乳粉亚硝酸盐含量测定v移取移取:20 mL滤液于滤液于50 mL比色管中，加水至约比色管中，加水至约30 mL。v在每个比色管中先加入在每个比色管中先加入3 mL显色液显色液1，边加边混；再加入，边加边混；再加入2.5 mL显色液显色

12、液2。小心混合溶液，使其在室温下静置。小心混合溶液，使其在室温下静置5 min，避免直射阳光。加入，避免直射阳光。加入1mL显色液显色液3，小心混合，使，小心混合，使其在室温下静置其在室温下静置5 min，避免直射阳光。用水定容至刻度，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。混匀。v在在15 min内用内用538 nm波长，以空白试验液体为对照测定波长，以空白试验液体为对照测定上述样品溶液的吸光度。上述样品溶液的吸光度。标准曲线的制作标准曲线的制作v分别移取分别移取0 mL、1mL、2mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、8 mL和和10 mL亚硝酸钠标准溶液于亚硝酸钠标准溶液于9个个50

13、 mL比色管中。在每比色管中。在每个比色管中加水，使其体积约为个比色管中加水，使其体积约为30 mL。v在每个比色管中先加入在每个比色管中先加入3 mL显色液显色液1，边加边混；再加入，边加边混；再加入2.5 mL显色液显色液2。小心混合溶液，使其在室温下静置。小心混合溶液，使其在室温下静置5 min，避免，避免直射阳光。加入直射阳光。加入1mL显色液显色液3，小心混合，使其在室温下静置，小心混合，使其在室温下静置5 min，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。在，避免直射阳光。用水定容至刻度，混匀。在15 min内，用内，用538 nm波长，以第一个溶液（不含亚硝酸钠）为对照波长，以第一个溶

14、液（不含亚硝酸钠）为对照测定另外八个溶液的吸光度。测定另外八个溶液的吸光度。v将测得的吸光度对亚硝酸盐质量浓度作图。亚硝酸根的质量将测得的吸光度对亚硝酸盐质量浓度作图。亚硝酸根的质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标。亚硝酸根的质量浓度以g/100 mL表示。表示。亚硝酸盐含量计算亚硝酸盐含量计算v式中：式中：vX样品中亚硝酸根含量，样品中亚硝酸根含量，mg/kg；vc根据滤液的吸光度，从标准曲线上读取的根据滤液的吸光度，从标准曲线上读取的NO2的浓度，的浓度，g/100mL；vm样品的质量，样品的质量，g；vV所取滤液的体积，所取滤液的体积，mL。v样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量，按式计算：样品