仪器分析课件——4、高效液相色谱法

1、高效液相色谱法高效液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 1 概述概述2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪3 HPLC的分类及其分离原理的分类及其分离原理4 高效液相色谱分离的选择高效液相色谱分离的选择液相色谱仪液相色谱仪1 1 概述概述一、一、HPLC与与GC差别差别相同：相同：兼具分离和分析功能，基本概念理论一致兼具分离和分析功能，基本概念理论一致主要差别：主要差别：分析对象、流动相及操作条件的差别分析对象、流动相及操作条件的差别1分析对象分析对象 GC：能气化、热稳定性好、分子量较小的样品能气化、热稳定性好、分子量较小的样品，仅

2、能分析有机物的仅能分析有机物的20%20%。 HPLC：高沸点、难气化、分子量大、热稳定性差高沸点、难气化、分子量大、热稳定性差及具有生理活性和离子型的样品及具有生理活性和离子型的样品均可检测，用途广均可检测，用途广泛，占有机物的泛，占有机物的80%80%。2流动相差别流动相差别vGC：流动相为惰性气体流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 vHPLC：流动相为液体流动相为液体流动相与组分间有亲合力，为提高柱的选择性、流动相与组分间有亲合力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了控制因素，改善分离度增加了控制因素，对分离起很大作用对分离起很

3、大作用流动相种类较多，选择余地广流动相种类较多，选择余地广流动相极性、组成和流动相极性、组成和pHpH值的选择也对分离起到重值的选择也对分离起到重要作用要作用 3操作条件差别操作条件差别 GC：加温操作加温操作; ; HPLC：多室温；高压多室温；高压二、影响分离的因素与提高柱效的途径二、影响分离的因素与提高柱效的途径 在在HPLC中中, , 液体的扩散系数仅为气体的万分之液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项较小，可以忽略。一，则速率方程中的分子扩散项较小，可以忽略。 H = A + C uH = A + C u 故液相色谱故液相色谱H-uH-u曲线与气相色谱的形状不同，

4、如曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。图所示。l 由速率方程，由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效降低固定相粒度可提高柱效。l 液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一液体的粘度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故千倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径降低传质阻力是提高柱效主要途径。液。液相色谱中一般不通过增加柱温来改善传质（温度相色谱中一般不通过增加柱温来改善传质（温度影响不显著）。影响不显著）。恒温恒温l 改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。因素。三、三、HPLCHPLC的特点：的特点：(1)(1)高压：高压：液体流过色谱柱时，所遇到的阻

5、力很大液体流过色谱柱时，所遇到的阻力很大（液体粘度大）（液体粘度大），为了使载液迅速通过色谱柱，为了使载液迅速通过色谱柱，必 须 对 载 液 施 加 高 压 。必 须 对 载 液 施 加 高 压 。 H P L CH P L C 工 作 压 力 高 达工 作 压 力 高 达20MPa30MPa20MPa30MPa。(2)(2)高速：高速：HPLCHPLC的分析时间较经典的液相色谱所需的分析时间较经典的液相色谱所需的时间要少得多，分离一个样品只需几分钟至几的时间要少得多，分离一个样品只需几分钟至几十分钟，仅为经典液相色谱的几十分之一。十分钟，仅为经典液相色谱的几十分之一。(3)(3)高效：高效：

6、一般一般GC的色谱柱是数千塔板米，的色谱柱是数千塔板米，HPLC的塔板数可达约的塔板数可达约3万塔板万塔板/米，使分离效率大米，使分离效率大大提高。大提高。(4)(4)高灵敏度：高灵敏度：紫外光度检测器的检测限可达紫外光度检测器的检测限可达10-9g，荧光检测器可达荧光检测器可达1011g 。 HPLCHPLC已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义已被广泛应用于分析对生物学和医药上有重大意义的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植的大分子物质，例如蛋白质、核酸、氨基酸、多糖类、植物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。物色素、高聚物、染料及药物等物质的分离和分析。 HPL

7、CHPLC的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。凡是能用点。凡是能用GCGC分析的样品一般不用分析的样品一般不用HPLCHPLC。五个部分：五个部分：高压输高压输液系统、进样系统、液系统、进样系统、色谱柱、检测系统、色谱柱、检测系统、记录仪。记录仪。2 2 高效液相色谱仪高效液相色谱仪一、高压输液系统一、高压输液系统 高压输液系统由贮液器、高压泵、梯度洗提装高压输液系统由贮液器、高压泵、梯度洗提装置组成，核心部分是高压泵。置组成，核心部分是高压泵。1 1、贮液器及流动相、贮液器及流动相 高效液相色谱的流动相应满足如下要求：高效液相色谱的流动

8、相应满足如下要求： (1)(1)应具有足够的纯度，一般选用色谱纯试剂。应具有足够的纯度，一般选用色谱纯试剂。 (2)(2)流动相与固定液应互不相溶。流动相与固定液应互不相溶。 (3)(3)流动相对试样各组分应有适当的溶解度。流动相对试样各组分应有适当的溶解度。 (4)(4)粘度小。粘度小。 (5)(5)检测器对流动相不产生响应检测器对流动相不产生响应。溶剂使用前要脱气溶剂使用前要脱气 因为色谱柱是带压操作的，而检测器是在常因为色谱柱是带压操作的，而检测器是在常压下工作。若流动相中含有的空气不除去，则流动压下工作。若流动相中含有的空气不除去，则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱相通

9、过柱子时其中的气泡受到压力而压缩，流出柱子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检子后到检测器时因常压而将气泡释放出来，造成检测器噪声大，使基线不稳，仪器不能正常工作。测器噪声大，使基线不稳，仪器不能正常工作。常用的脱气方法有常用的脱气方法有l低压脱气法（电磁搅拌，水泵抽空，可同低压脱气法（电磁搅拌，水泵抽空，可同时加热或向溶剂吹时加热或向溶剂吹N N2 2）；）；l吹氦气脱气法（好）；吹氦气脱气法（好）；l超声波脱气法（不完全）；超声波脱气法（不完全）；l真空脱气法（可能会改变流动相组成）。真空脱气法（可能会改变流动相组成）。2、梯度洗提装置、梯度洗提装置 应用梯度洗提，可以提高分离效果。

10、应用梯度洗提，可以提高分离效果。 梯度洗提法：梯度洗提法：在分离的过程中，按一定的程序在分离的过程中，按一定的程序改变两种或两种以上不同极性的溶剂之间的比例，改变两种或两种以上不同极性的溶剂之间的比例，使流动相的成分和极性产生相应的变化，从而改使流动相的成分和极性产生相应的变化，从而改变复杂物质中不同极性的组分的相对保留值，提变复杂物质中不同极性的组分的相对保留值，提高分离效果，加快分析速度。高分离效果，加快分析速度。3 3、高压泵、高压泵 高效液相色谱仪的重要组成部分，应具备如下性能高效液相色谱仪的重要组成部分，应具备如下性能（1 1）有足够的输出压力，使）有足够的输出压力，使流动相能顺利地

11、通过流动相能顺利地通过颗粒很细的色谱柱，通常在颗粒很细的色谱柱，通常在14.7MPa14.7MPa44MPa44MPa之间；之间；（2 2）输出流量恒定无脉动，其流量精度在）输出流量恒定无脉动，其流量精度在1%1%2%2%之间；之间；（3 3）输出流动相的流量范围广且流速可调，对分）输出流动相的流量范围广且流速可调，对分析仪器，一般为析仪器，一般为3mL/min3mL/min；制备仪器为；制备仪器为101020mL/min20mL/min。（4 4）压力平稳，脉动小。）压力平稳，脉动小。 二、进样装置二、进样装置注射器进样注射器进样优点：优点：可任意改变进样体积，可任意改变进样体积，快速，不易

12、造成峰扩张快速，不易造成峰扩张缺点：缺点：重现性较差，试液容易渗漏重现性较差，试液容易渗漏阀进样阀进样( (六通阀六通阀) )由阀芯、阀体、定量管组成。由阀芯、阀体、定量管组成。优点：优点：耐高压，重复性好、易于自动化耐高压，重复性好、易于自动化缺点：缺点：易造成峰扩张易造成峰扩张自动进样器自动进样器三、色谱柱三、色谱柱标准柱型：内径为标准柱型：内径为4.6mm或或3.9mm，长为，长为15cm30cm的的直形不锈钢柱直形不锈钢柱。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。四、检测器四、检测器 应具有：应具有：灵敏度高、噪音低、响应快、线性范灵敏度高、噪音

13、低、响应快、线性范围宽、定量准确、适应范围广等特点，同时还应围宽、定量准确、适应范围广等特点，同时还应该对温度和载液流速的变化不敏感。该对温度和载液流速的变化不敏感。v可用的检测器有：紫外、折光、电导、荧光等可用的检测器有：紫外、折光、电导、荧光等v常用的检测器有：紫外常用的检测器有：紫外-可见光度检测器和差示可见光度检测器和差示折光检测器折光检测器缺点：缺点：不能用于对紫不能用于对紫外外-可见光完全不吸收可见光完全不吸收的试样的检测，也不的试样的检测，也不能使用对紫外光不透能使用对紫外光不透过的溶剂。过的溶剂。1、紫外、紫外-可见光度检测器可见光度检测器l一种小型的装有流动池的双光束光度计一

14、种小型的装有流动池的双光束光度计l灵敏度很高，检测限可达灵敏度很高，检测限可达10-9gmL-1优点：优点：对温度和流速不敏感，适宜于梯度洗提。对温度和流速不敏感，适宜于梯度洗提。2 2、差示折光检测器、差示折光检测器 通过连续测定参比池和样品池中流动相之间的通过连续测定参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比折光指数差值。差值与浓度呈正比优点：优点：凡与流动相折射率不同的组分，都可以用凡与流动相折射率不同的组分，都可以用差示折光检测器来检测，所以差示折光检测器是差示折光检测器来检测，所以差示折光检测器是一种一种通用型检测器通用型检测器。差示折光检测器的灵敏度可。差示折光检测

15、器的灵敏度可达达1010-7-7g gmLmL-1-1。缺点：缺点：对温度和流速的波动很敏感；不能用于梯对温度和流速的波动很敏感；不能用于梯度洗提。度洗提。3、荧光检测器、荧光检测器l高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；l对多环芳烃，维生素对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。响应。4、光电二极管阵列检测器、光电二极管阵列检测器l紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；l1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示

16、。机快速处理，三维立体谱图，如图所示。五、记录仪五、记录仪 计算机，峰面积的积分、分析结果的计算、计算机，峰面积的积分、分析结果的计算、误差的分析或色谱图的输出记录的信号进行程序误差的分析或色谱图的输出记录的信号进行程序化、自动化处理。化、自动化处理。q液液- -固色谱法固色谱法q液液- -液色谱法液色谱法q离子交换色谱法离子交换色谱法q凝胶色谱法凝胶色谱法3 HPLC3 HPLC的分类及其分离原理的分类及其分离原理一、液一、液-固色谱法（液固色谱法（液-固吸附色谱法）固吸附色谱法） 固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。

17、上的吸附作用不同来进行分离的。1、液、液-固色谱法的吸附剂和流动相固色谱法的吸附剂和流动相 常用吸附剂：常用吸附剂：薄膜型硅胶、薄膜型硅胶、全多孔型硅胶全多孔型硅胶、薄、薄膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺膜型氧化铝、全多孔型氧化铝、分子筛、聚酰胺等。等。 一般规律：一般规律：对于固定相而言，非极性分子与极对于固定相而言，非极性分子与极性吸附剂性吸附剂(如硅胶、氧化铝如硅胶、氧化铝)之间的作用力很弱，分之间的作用力很弱，分配比较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸配比较小，保留时间较短；但极性分子与极性吸附剂之间的作用力很强，分配比大，保留时间长。附剂之间的作用力很强，分配比大，保留时

18、间长。 常用的流动相：常用的流动相：甲醇、乙酸乙酯、乙醚、苯、甲醇、乙酸乙酯、乙醚、苯、正己烷等。正己烷等。 在液在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是：固色谱中，选择流动相的基本原则是： 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。则用低极性流动相。2 2、液、液- -固色谱法的应用固色谱法的应用 常用于分离极性不同的化合物、含有不同官能常用于分离极性不同的化合物、含有不同官能团的化合物以及异构体。团的化合物以及异构体。 不宜用于分离同系物不宜用于分离同系物（因为液（因为液- -固色谱对不同固色谱对不同相对分子质量的同系物选择性不高）；相

19、对分子质量的同系物选择性不高）；峰易拖尾峰易拖尾二、液二、液- -液色谱法（液液色谱法（液- -液分配色谱法）液分配色谱法） 将固定液涂渍在担体上作为固定相。将固定液涂渍在担体上作为固定相。1 1、液、液- -液色谱法的作用机制液色谱法的作用机制 溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶质在两相间进行分配时，在固定液中溶解度溶解度较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁较小的组分较难进入固定液，在色谱柱中向前迁移速度较快；反之，在色谱柱中向前迁移速度较移速度较快；反之，在色谱柱中向前迁移速度较慢，从而达到分离的目的。慢，从而达到分离的目的。2 2、正相色谱和反相色谱、正相色谱和反相色谱正相分配色

20、谱用极性物质作固定相，非极性溶剂正相分配色谱用极性物质作固定相，非极性溶剂( (如苯、正己烷等如苯、正己烷等) )作流动相作流动相反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂反相分配色谱用非极性物质作固定相，极性溶剂( (如水、甲醇、乙腈等如水、甲醇、乙腈等) )作流动相作流动相一般地，一般地，正相色谱是固定液的极性大于流动相的正相色谱是固定液的极性大于流动相的极性，而反相色谱是固定相的极性小于流动相的极极性，而反相色谱是固定相的极性小于流动相的极性。正相色谱适宜于分离极性化合物，性。正相色谱适宜于分离极性化合物，极性强的组极性强的组分，保留值分，保留值？反相色谱则适宜于分离非极性或弱极反相色谱

21、则适宜于分离非极性或弱极性化合物，性化合物，极性弱的组分，保留值极性弱的组分，保留值？l常用溶剂的极性顺序常用溶剂的极性顺序： 水水(最大最大) 甲酰胺甲酰胺 乙腈乙腈 甲醇甲醇 乙醇乙醇 丙醇丙醇 丙酮丙酮 二氧六环二氧六环 四氢呋喃四氢呋喃 甲乙酮甲乙酮 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 乙醚乙醚 异丙醚异丙醚 二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳环己烷环己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)3 3、液、液- -液色谱法的固定相液色谱法的固定相 常用的固定液：常用的固定液：如极性的如极性的，氧二丙腈氧二丙腈（ODPNODPN），非极性的十八烷（），非极性的十八烷

22、（ODSODS）和异二十烷）和异二十烷（SQSQ）等。）等。 缺点：缺点：涂渍的固定液易被流动相冲掉。采用涂渍的固定液易被流动相冲掉。采用化化学键合固定相学键合固定相则可以避免上述缺点。使固定液与则可以避免上述缺点。使固定液与担体之间形成化学键，例如在硅胶表面利用硅烷担体之间形成化学键，例如在硅胶表面利用硅烷化反应：化反应：形成形成SiSiO OSiSiC C型键，把固定液的分子结合到型键，把固定液的分子结合到担体表面上担体表面上有机氯硅烷有机氯硅烷优点：优点：v化学键合固定相无液坑，液层薄，传质速度快，化学键合固定相无液坑，液层薄，传质速度快，无固定液的流失，寿命长。无固定液的流失，寿命长。

23、v固定液上可以结合不同的官能团，选择性好。固定液上可以结合不同的官能团，选择性好。v固定液不会溶于流动相，有利于梯度洗提。固定液不会溶于流动相，有利于梯度洗提。4 4、液、液- -液色谱法的应用液色谱法的应用 液液- -液色谱法既能分离极性化合物，又能分离非极液色谱法既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物性化合物，如烷烃、烯烃、芳烃、稠环、染料、甾，如烷烃、烯烃、芳烃、稠环、染料、甾族等化合物。化合物中取代基的数目或性质不同，族等化合物。化合物中取代基的数目或性质不同，或化合物的相对分子质量不同，均可以用液或化合物的相对分子质量不同，均可以用液- -液色谱液色谱进行分离。进行分离。适合同系物

24、的分离，如氨基酸。适合同系物的分离，如氨基酸。三、离子交换色谱法三、离子交换色谱法原理：原理：离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可离离子交换色谱法是基于离子交换树脂上可离解的离子与流动相中具有相同电荷的被测离子进行解的离子与流动相中具有相同电荷的被测离子进行可逆交换，由于可逆交换，由于被测离子在交换剂上具有不同的亲被测离子在交换剂上具有不同的亲和力而被分离和力而被分离。1 1、离子交换色谱法的作用机制、离子交换色谱法的作用机制聚合物分子骨架上连接着活性基团，如聚合物分子骨架上连接着活性基团，如SOSO3 3，N(CHN(CH3 3) )3 3+ +等。等。为保持树脂的电中性，活性基团上带有电荷

25、数为保持树脂的电中性，活性基团上带有电荷数相同但正、负号相反的离子相同但正、负号相反的离子X X，称为反离子。，称为反离子。 活性基团上的反离子可以与流动相中具有相同活性基团上的反离子可以与流动相中具有相同电荷的被测离子发生交换：电荷的被测离子发生交换：33RSO XMRSO MX 2 2、固定相、固定相 两种类型：多孔性树脂与薄壳型树脂两种类型：多孔性树脂与薄壳型树脂多孔性树脂：多孔性树脂：极小的球型离子交换树脂，能分离极小的球型离子交换树脂，能分离复杂样品，进样量较大；缺点是机械强度不高，复杂样品，进样量较大；缺点是机械强度不高，不能耐受压力。不能耐受压力。薄壳型树脂：薄壳型树脂：在玻璃微

26、球上涂以薄层的离子交换在玻璃微球上涂以薄层的离子交换树脂，这种树脂柱效高，当流动相成分发生变化树脂，这种树脂柱效高，当流动相成分发生变化时，不会膨胀或压缩；缺点是柱子容量小，进样时，不会膨胀或压缩；缺点是柱子容量小，进样量不宜太多。量不宜太多。 一般采用水的缓冲液作流动相。一般采用水的缓冲液作流动相。3 3、离子交换色谱法的应用、离子交换色谱法的应用 主要用来分离离子或可离解的化合物主要用来分离离子或可离解的化合物，凡是，凡是在流动相中能够电离的物质都可以用离子交换在流动相中能够电离的物质都可以用离子交换色谱法进行分离。广泛地应用于：无机离子、色谱法进行分离。广泛地应用于：无机离子、有机化合物

27、和生物物质有机化合物和生物物质( (如氨基酸、核酸、蛋白如氨基酸、核酸、蛋白质等质等) )的分离。的分离。四、凝胶色谱法（空间排阻色谱法）四、凝胶色谱法（空间排阻色谱法） 凝胶是一种多孔性的高分子聚合体，表面布满孔凝胶是一种多孔性的高分子聚合体，表面布满孔隙，能被流动相浸润，吸附性很小。隙，能被流动相浸润，吸附性很小。凝胶色谱法的凝胶色谱法的分离机制是根据分子的体积大小和形状不同而达到分离机制是根据分子的体积大小和形状不同而达到分离目的。分离目的。1 1、凝胶色谱法的作用机制、凝胶色谱法的作用机制体积大于凝胶孔隙的分子，体积大于凝胶孔隙的分子，由于不由于不能进入孔隙而被排阻，直接从表面流能进入

28、孔隙而被排阻，直接从表面流过，过，先流出色谱柱先流出色谱柱；小分子小分子可渗入凝胶孔隙中而完全不可渗入凝胶孔隙中而完全不受排阻，然后又从孔隙中出来随载液受排阻，然后又从孔隙中出来随载液流动，流动，后流出色谱柱后流出色谱柱；中等体积的分子可渗入较大的孔隙中等体积的分子可渗入较大的孔隙中，但受到较小孔隙的排阻，介于上中，但受到较小孔隙的排阻，介于上述两种情况之间。述两种情况之间。 凝胶色谱法是凝胶色谱法是一种按分子尺寸一种按分子尺寸大小的顺序进行大小的顺序进行分离的一种色谱分离的一种色谱分析方法。分析方法。2 2、凝胶色谱法的固定相、流动相、凝胶色谱法的固定相、流动相 软质凝胶、半硬质凝胶和硬质凝

29、胶三种。软质凝胶、半硬质凝胶和硬质凝胶三种。 流动相为水或有机溶剂。流动相为水或有机溶剂。3 3、凝胶色谱法的应用特点、凝胶色谱法的应用特点 保留时间是分子尺寸的函数，适宜于分离相对分子质保留时间是分子尺寸的函数，适宜于分离相对分子质量大的化合物，相对分子质量在量大的化合物，相对分子质量在4004008 810105 5的任何类型的任何类型的化合物的化合物保留时间短，色谱峰窄，容易检测保留时间短，色谱峰窄，容易检测固定相与溶质分子间的作用力极弱，趁于零，柱的寿命固定相与溶质分子间的作用力极弱，趁于零，柱的寿命长长不能分辨分子大小相近的化合物不能分辨分子大小相近的化合物，分子量相差需在，分子量相

30、差需在10%10%以上时才能得到分离以上时才能得到分离 离子对色谱离子对色谱 （ion pair chromatography）原理原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子 或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水 性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；阴离子分离阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十 六烷基三甲铵作为对离子；六烷基三甲铵作为对离子；阳离子分离阳离子分离

31、：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子；反相离子对色谱反相离子对色谱：非极性的疏水固定相：非极性的疏水固定相(C-18柱柱)，含有对离子，含有对离子 Y+的甲醇的甲醇-水或乙腈水或乙腈-水作为流动相，试样离水作为流动相，试样离 子子X-进入流动相后，生成疏水性离子对进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X - 后；在两相间分配。后；在两相间分配。4 4 高效液相色谱分离方法的选择高效液相色谱分离方法的选择一、一、HPLCHPLC的应用范围的应用范围高沸点、热稳定性差的有机物以及相对分子质量大（大高沸点、热稳定性差的有机物以及相对分子质量大（大于于40

32、0400）的有机物。）的有机物。HPLCHPLC在常温下进行分离与分析，不会导致被测物的热分在常温下进行分离与分析，不会导致被测物的热分解，其流动相是液体，所以只要试样能制备成溶液，原则解，其流动相是液体，所以只要试样能制备成溶液，原则上都可以用上都可以用HPLCHPLC分离与分析，如离子型化合物、不稳定天分离与分析，如离子型化合物、不稳定天然产物以及氨基酸、蛋白质等高分子化合物均可用然产物以及氨基酸、蛋白质等高分子化合物均可用HPLCHPLC获获得较好的分离效果。得较好的分离效果。 HPLC的应用的应用1. 环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶固定相：薄壳型硅胶(37 50 m) 流动相：正己烷流