喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析

1、第十二章 喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析制作人：沈阳药科大学 药学院 80K药物分析 陈丹丹 131080102喹啉类药物的分析1青蒿素类药物的分析2目录目录CONTENTS喹啉类药物的分析第一节第一节CONTENTS喹啉类药物的基本结构与主要性质1鉴别试验2纯度检查3含量测定4目录目录CONTENTS01典型药物结构与物理性质1NH3CONHCHHOHCH2H2SO42H2OH硫酸奎宁硫酸奎宁Quinine Sulfate NHNCH3NCH3CH3Cl2H3PO4磷酸氯喹磷酸氯喹Chloroquine Phosphate NH3CONHHCHHOHCH22HCl二盐酸奎宁二盐酸奎宁Quini

2、ne Dihydrochloride 4H3PO4NNHNOHNNOCH3Cl磷酸咯萘啶磷酸咯萘啶Malaridine Phosphate 2H3PO4NH3COHNNH2CH3磷酸伯氨喹磷酸伯氨喹Primaquine Phosphate NNNNNNClCl4H3PO44H2O磷酸哌喹磷酸哌喹Piperaquine Phosphate 喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环喹啉杂环，环上杂原子的反应性能基本与，环上杂原子的反应性能基本与吡啶吡啶相同。相同。01主要化学性质21.1.碱性碱性奎宁为奎宁为二元生物碱二元生物碱，其中，其中奎宁环

3、上的氮原子奎宁环上的氮原子的碱性较强的碱性较强(p(pKa Ka 8.8)8.8)，与强酸形成稳定的盐；，与强酸形成稳定的盐；奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；喹啉环上的氮原子碱性较弱喹啉环上的氮原子碱性较弱(p(pKa Ka 4.2)4.2)，不能与硫酸成盐，不能与硫酸成盐；磷酸氯喹和磷酸伯氨喹为三元生物碱；磷酸咯萘啶为五元生磷酸氯喹和磷酸伯氨喹为三元生物碱；磷酸咯萘啶为五元生物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。喹核环喹核环喹啉环喹啉环2.2.荧光特性荧光特性硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸溶液中均硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸

4、溶液中均显蓝色荧光显蓝色荧光。01主要化学性质23.3.旋光性旋光性喹啉类抗疟药基本都具有喹啉类抗疟药基本都具有手性手性，硫酸奎宁为，硫酸奎宁为左旋体左旋体，其比旋，其比旋度为度为-237-237o o至至-224-224o o；二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为-223-223o o至至-229-229o o；磷酸哌喹和磷酸咯萘啶磷酸哌喹和磷酸咯萘啶不不具有手性。具有手性。喹核环喹核环喹啉环喹啉环4.4.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有环，具有共轭体系

5、共轭体系，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。绿奎宁反应01光谱特征02无机酸盐03鉴别试验2奎宁为奎宁为6-6-位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应(Thalleioquin reaction)(Thalleioquin reaction)。反应基本机。反应基本机制是制是6-6-位含氧喹啉位含氧喹啉，经氯水，经氯水( (或溴水或溴水) )氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的二醌基亚二醌基亚胺胺的铵盐。的铵盐。鉴别试验2 1绿奎宁反应绿奎宁反应NCH3ONOHClCl2NH3NOC

6、lClNONH4NNO+2硫酸奎宁和二盐酸奎尼的绿奎宁反应机制同上。取其水溶液，加溴试液硫酸奎宁和二盐酸奎尼的绿奎宁反应机制同上。取其水溶液，加溴试液0.2ml0.2ml和氨试液和氨试液1ml1ml，即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为紫红色。翠绿色可转溶于醇、三氯甲烷即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为紫红色。翠绿色可转溶于醇、三氯甲烷中而不溶于醚。因此中而不溶于醚。因此ChP2010ChP2010采用此反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎尼。采用此反应鉴别硫酸奎宁和二盐酸奎尼。鉴别试验2 1绿奎宁反应绿奎宁反应ChP2010ChP2010硫酸奎宁的绿奎宁反应鉴别：取本品约硫酸奎宁的绿

7、奎宁反应鉴别：取本品约5mg5mg，加水，加水5ml5ml溶解后，加溴试液溶解后，加溴试液3 3滴与氨试滴与氨试液液1ml1ml，即显翠绿色。，即显翠绿色。鉴别试验2 2光谱特征光谱特征*紫外光谱吸收特征紫外光谱吸收特征由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有共轭体系，可用紫由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有共轭体系，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。外吸收光谱的特征鉴别该类药物。ChP2010ChP2010采用本法鉴别磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹。采用本法鉴别磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹。*荧光光谱特征荧光光谱特征利

8、用硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。利用硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。ChP2010ChP2010硫酸奎宁的荧光鉴别：取本品约硫酸奎宁的荧光鉴别：取本品约20mg20mg，加水，加水20ml20ml溶解后，分取溶液溶解后，分取溶液10ml10ml，加稀，加稀硫酸使成酸性，即显蓝色荧光。硫酸使成酸性，即显蓝色荧光。鉴别试验2 2光谱特征光谱特征*红外吸收光谱特征红外吸收光谱特征硫酸奎宁、二盐酸奎宁、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在硫酸奎宁、二盐酸奎宁、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在ChP2010ChP2010中中均采用红外光谱的方法进行鉴

9、别。均采用红外光谱的方法进行鉴别。ChP2010ChP2010磷酸氯喹的磷酸氯喹的IRIR鉴别：鉴别：取本品约取本品约0.5g0.5g，置分液漏斗中，加水，置分液漏斗中，加水25ml25ml溶解后，加氢氧化钠试液溶解后，加氢氧化钠试液5ml5ml、乙醚、乙醚50ml50ml振摇振摇提取，醚层用水洗涤后通过置有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用五提取，醚层用水洗涤后通过置有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用五氧化二磷为干燥剂减压干燥至析出结晶，其红外光吸收图谱应与氯喹的对照图谱一致。氧化二磷为干燥剂减压干燥至析出结晶，其红外光吸收图谱应与氯喹的对照图谱一致。鉴别试验2 3

10、无机酸盐无机酸盐*硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。1 1）取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶）取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。解。2 2）取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠）取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。试液中溶解。3 3）取供试品溶液，加盐酸，）取供试品溶液，加盐酸，不不生成白色沉淀生成白色沉淀( (与硫代硫酸盐区

11、别与硫代硫酸盐区别) )。鉴别试验2 3无机酸盐无机酸盐*氯化物的鉴别反应氯化物的鉴别反应二盐酸奎宁中具有盐酸根，即显氯化物的鉴别反应进行鉴别。二盐酸奎宁中具有盐酸根，即显氯化物的鉴别反应进行鉴别。1 1）取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后）取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后, ,滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。盐酸盐

12、，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。2 2）取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生）取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。鉴别试验2 3无机酸盐无机酸盐*磷酸盐的鉴别反应磷酸盐的鉴别反应磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹都具有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹都具有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。1 1）取供试品的中性溶液，加硝酸银试液，即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在

13、氨试液或稀硝）取供试品的中性溶液，加硝酸银试液，即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。酸中均易溶解。2 2）取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。）取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。3 3）取供试品溶液，加钼酸铵试液与硝酸后，加热即生成黄色沉淀；分离，沉淀能在氨试液）取供试品溶液，加钼酸铵试液与硝酸后，加热即生成黄色沉淀；分离，沉淀能在氨试液中溶解。中溶解。 纯度检查3 1硫酸奎宁的纯度检查硫酸奎宁的纯度检查*理化特性理化特性硫酸奎宁为白色细微的针状结晶，轻柔，易压缩；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显中硫酸奎宁为白色细微的针状结晶，轻柔，易压

14、缩；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显中性反应。在氯仿性反应。在氯仿- -无水乙醇无水乙醇(2:1)(2:1)的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。*有关物质有关物质根据硫酸奎宁的制备工艺，产品中有关物质主要是生产过程中产生的中间体以及副反应产物。根据硫酸奎宁的制备工艺，产品中有关物质主要是生产过程中产生的中间体以及副反应产物。通过检查以下项加以控制：通过检查以下项加以控制：酸度酸度三氯甲烷三氯甲烷- -乙醇中不溶物质乙醇中不溶物质其他金鸡纳碱等其他金鸡纳碱等纯度检查3 1硫酸奎宁的纯度检查硫酸奎宁的纯度检查*酸度酸度 主要是在主要是在成盐

15、过程成盐过程中引入。中引入。检查法：取本品检查法：取本品0.20g0.20g，加水，加水20ml20ml溶解后，用酸度计进行测定，溶解后，用酸度计进行测定，pHpH值应为值应为5.75.76.66.6。*三氯甲烷三氯甲烷- -乙醇中不溶物质乙醇中不溶物质 本项检查主要控制药物在制备过程中本项检查主要控制药物在制备过程中引入的醇中不溶性杂质或无机盐引入的醇中不溶性杂质或无机盐类等。类等。 检查法：检查法： 取本品取本品2.0g2.0g，加三氯甲烷，加三氯甲烷- -无水乙醇无水乙醇(2:1)(2:1)混合溶液混合溶液15ml15ml，在，在5050加热加热1010分钟后，分钟后，用称定重量的垂熔坩

16、埚滤过，滤渣用上述混合溶液分用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合溶液分5 5次洗涤，每次次洗涤，每次10ml10ml，在，在105105干燥至恒干燥至恒重，遗留残渣不得过重，遗留残渣不得过2mg2mg。纯度检查3 1硫酸奎宁的纯度检查硫酸奎宁的纯度检查*其他金鸡纳碱其他金鸡纳碱* * 本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用HPLCHPLC或或TLCTLC中中的主成分的主成分自身对照法或杂质对照品对照法自身对照法或杂质对照品对照法进行检查。进行检查。* * TLCTLC检查法：取本品，加稀乙醇制成每检查法：取本品，加稀乙醇制成每1ml1ml中

17、约含中约含10mg10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加稀乙醇稀释制成每适量，加稀乙醇稀释制成每1ml1ml中约含中约含5050 g g的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各5 5 l l，分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶G G薄层板上，以三氯甲烷薄层板上，以三氯甲烷- -丙酮丙酮- -二乙胺二乙胺(5:4:1.25)(5:4:1.25)为展开剂，展开后，微为展开剂，展开后，微热使展开剂挥散，喷以碘铂酸钾试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑热使展开剂挥散，喷以碘铂酸钾试液使显色。供试品溶液如显杂

18、质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。点比较，不得更深。纯度检查3 2磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查* * 磷酸咯萘啶（疟乃停）对疟原虫红细胞内期裂殖体有杀灭作用。与氯喹无交叉抗药性，临磷酸咯萘啶（疟乃停）对疟原虫红细胞内期裂殖体有杀灭作用。与氯喹无交叉抗药性，临床用于治疗抗氯喹株恶性疟和抢救脑型疟等凶险性疟疾。床用于治疗抗氯喹株恶性疟和抢救脑型疟等凶险性疟疾。* * 磷酸咯萘啶在生产和贮藏过程中引入的有关物质，通过溶液的澄清度与颜色、有关物质等磷酸咯萘啶在生产和贮藏过程中引入的有关物质，通过溶液的澄清度与颜色、有关物质等项目的检查进行控制。项目的检查进行控制。* * 磷酸咯萘啶

19、为黄色至橙黄色结晶性粉末；无臭，味苦；具引湿性。在水中溶解，在乙醇或磷酸咯萘啶为黄色至橙黄色结晶性粉末；无臭，味苦；具引湿性。在水中溶解，在乙醇或乙醚中几乎不溶。乙醚中几乎不溶。纯度检查3*酸度酸度 * * 主要是在主要是在成盐过程成盐过程中引入。本品水溶液的中引入。本品水溶液的pHpH值如小于值如小于2.42.4，刺激性较大。，刺激性较大。* * 检查法：检查法： 取本品取本品1.0g1.0g，加水，加水25ml25ml溶解后，用酸度计进行测定，溶解后，用酸度计进行测定，pHpH值应大于值应大于2.42.4。*水中不溶物水中不溶物 * * 本品加水溶解后，稍放置即有黄色不溶物产生，影响质量。

20、故质量标准按给药途径不同，本品加水溶解后，稍放置即有黄色不溶物产生，影响质量。故质量标准按给药途径不同，规定其不同限量以控制质量。规定其不同限量以控制质量。* * 检查法：取本品检查法：取本品2.0g2.0g，加水，加水25ml25ml振摇使溶解，放置振摇使溶解，放置3030分钟，用置分钟，用置105105恒重的恒重的4 4号垂熔玻璃号垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀用水坩埚滤过，沉淀用水15ml15ml分次洗涤，在分次洗涤，在105105干燥干燥4 4小时，遗留残渣不得过小时，遗留残渣不得过4mg4mg（供注射用）（供注射用）或或7 7mgmg（供口服用）。（供口服用）。 2磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯

21、萘啶的纯度检查纯度检查3*氯化物氯化物* * 系生产工艺中带入。检查时为了避免溶液颜色的干扰，先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再系生产工艺中带入。检查时为了避免溶液颜色的干扰，先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再对滤液进行检查。对滤液进行检查。* * 检查法检查法 取本品取本品0.10g0.10g，加水，加水4ml4ml使溶解，加使溶解，加2020碳酸钠溶液碳酸钠溶液5ml5ml，摇匀，使沉淀完全，用，摇匀，使沉淀完全，用5 5号垂熔玻璃漏斗滤过，容器用水号垂熔玻璃漏斗滤过，容器用水15ml15ml分次洗涤、滤过，合并滤液，加水使成分次洗涤、滤过，合并滤液，加水使成25ml25ml，依氯化物，依氯化物法

22、检查，与标准氯化钠溶液法检查，与标准氯化钠溶液3.0ml3.0ml制成的对照液比较，不得更浓制成的对照液比较，不得更浓(0.03(0.03) )。 2磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查纯度检查3*甲醛甲醛* * 在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了甲醛进行缩合，甲醛具有毒性，应对产品中可能剩余的在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了甲醛进行缩合，甲醛具有毒性，应对产品中可能剩余的甲醛进行检查。甲醛进行检查。* * 检查法检查法 取本品取本品50.0mg50.0mg，加水，加水2ml2ml使溶解，加使溶解，加5%5%碳酸钠溶液碳酸钠溶液4ml4ml，搅匀，滤过，滤液加硫酸，搅匀，滤过，滤液加硫酸溶液溶液

23、(12)3ml(12)3ml，冷却后加，冷却后加品红亚硫酸品红亚硫酸试液试液5ml5ml，在，在20203030保温保温3030分钟，如显色，与新制的分钟，如显色，与新制的甲醛溶液甲醛溶液( (每每1ml1ml含甲醛含甲醛0.10mg0.10mg的水溶液的水溶液)1.0ml)1.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.2%)(0.2%)。 2磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查纯度检查3*四氢吡咯四氢吡咯* * 在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了四氢吡咯进行缩合，四氢吡咯具有毒性，应对产品中可在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了四氢吡咯进行缩合，四氢吡咯具

24、有毒性，应对产品中可能剩余的四氢吡咯进行检查。能剩余的四氢吡咯进行检查。* * 检查法检查法 取本品取本品10mg10mg，加水，加水2ml2ml溶解后，加溶解后，加5 5碳酸钠溶液碳酸钠溶液2ml2ml，搅拌，滤过，滤液加新制的，搅拌，滤过，滤液加新制的亚硝基铁氰化钠乙醛亚硝基铁氰化钠乙醛试液试液1ml1ml，摇匀，摇匀，5 5分钟内不得显蓝紫色。分钟内不得显蓝紫色。 2磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查01含量测定4 1硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定* * 硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接滴定。而在硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接滴定。而在非水酸

25、性介质中，非水酸性介质中，碱性显著增强碱性显著增强，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。示剂或电位法确定终点。* * 由于硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质中，只能解离为由于硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质中，只能解离为HSOHSO4 4，所以生物碱的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐。，所以生物碱的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐。 (BH+)2SO42- +HClO4 BH+ClO4- +BH+HSO4 * * 测定时还应注意生物碱分子

26、结构中氮原子碱性的强弱，正确判断反应的摩尔比，以准测定时还应注意生物碱分子结构中氮原子碱性的强弱，正确判断反应的摩尔比，以准确计算结果。确计算结果。01含量测定4 1硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定* * ChP2010ChP2010硫酸奎宁的含量测定法硫酸奎宁的含量测定法：取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称定，加冰醋酸，精密称定，加冰醋酸10ml10ml溶解后，加醋酐溶解后，加醋酐5ml5ml与结晶紫指示液与结晶紫指示液1 12 2滴，用高氯滴，用高氯酸滴定液酸滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每滴定至溶液显蓝绿色，并将

27、滴定的结果用空白试验校正。每1ml1ml高氯酸滴高氯酸滴定液定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于24.90mg24.90mg的的(C(C2020H H2424N N2 2O O2 2) )2 2HH2 2SOSO4 4。 * * 因此，因此，1 mol1 mol硫酸奎宁消耗硫酸奎宁消耗3 mol3 mol高氯酸滴定液高氯酸滴定液。即。即1 mol1 mol奎宁可以结合奎宁可以结合4 mol4 mol质子，其中质子，其中1mol1mol质子是硫酸提供的，其它质子是硫酸提供的，其它3 mol3 mol质子是由高氯酸提供的。质子是由高氯酸提供的。USPUSP与本法相同。与本法相同

28、。* * 奎宁为二元碱，喹核氮可与硫酸成盐，喹啉环氮不与硫酸成盐，但在冰醋酸介质中用高氯酸奎宁为二元碱，喹核氮可与硫酸成盐，喹啉环氮不与硫酸成盐，但在冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。滴定时，却能与高氯酸成盐。01含量测定4 1硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定* * ChP2010 ChP2010 硫酸奎宁片的含量测定法硫酸奎宁片的含量测定法取本品取本品2020片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量( (约相当于硫酸奎宁约相当于硫酸奎宁0.3g)0.3g)，置分液，置分液漏斗中。加氯化钠漏斗中。加氯化钠0.5g0.5g与与0.1

29、mol/L0.1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液10ml10ml，混匀，精密加三氯甲烷，混匀，精密加三氯甲烷50ml50ml，振摇，振摇1010分分钟，静置，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液钟，静置，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25ml25ml，加醋酐，加醋酐5mL5mL与二甲基黄与二甲基黄指示液指示液2 2滴，用高氯酸滴定液滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)滴定至溶液显玫瑰红色，并将滴定结果用空白试验校滴定至溶液显玫瑰红色，并将滴定结果用空白试验校正。每正。每1ml1ml高氯酸滴定液高氯酸滴定液(0.1mol/L)(0.1mol/L)

30、相当于相当于19.75mg19.75mg的的 (C (C2020H H2424N N2 2O O2 2) )2 2HH2 2SOSO4 4 2H 2H2 2O O。* * 测定中测定中1mol1mol硫酸奎宁可转化为硫酸奎宁可转化为2mol2mol奎宁，每奎宁，每1mol1mol奎宁消耗奎宁消耗2mol2mol高氯酸，高氯酸，故故1mol1mol硫酸奎宁消耗硫酸奎宁消耗4mol4mol高氯酸高氯酸。反应式为：。反应式为：01含量测定4 2磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定* * 磷酸氯喹用非水溶液滴定法测定含量，但制剂中由于含有辅料，所采用的含量测定方法不同。磷酸氯喹用非水溶液滴定法

31、测定含量，但制剂中由于含有辅料，所采用的含量测定方法不同。* * ChP2010ChP2010中磷酸氯喹片的中磷酸氯喹片的紫外紫外- -可见分光光度可见分光光度含量测定法：含量测定法： 取本品取本品1010片，精密称定，研细，精密称取适量片，精密称定，研细，精密称取适量( (约相当于磷酸氯喹约相当于磷酸氯喹0.13g)0.13g)，置，置200ml200ml量瓶中，量瓶中，加加0.lmol/L0.lmol/L盐酸溶液适量，充分振摇使磷酸氯喹溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续盐酸溶液适量，充分振摇使磷酸氯喹溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液滤液2ml2ml，置，置100ml100

32、ml量瓶中，用量瓶中，用0.lmol/L0.lmol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，在盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，在343nm343nm的波长处测定吸光的波长处测定吸光度；另取磷酸氯喹对照品适量，精密称定，加度；另取磷酸氯喹对照品适量，精密称定，加0.lmol/L0.lmol/L盐酸溶液溶解并定是稀释制成每盐酸溶液溶解并定是稀释制成每lmllml中约中约含含13g13g的溶液，同法测定，计算，即得。的溶液，同法测定，计算，即得。 * * 本品含磷酸氯喹本品含磷酸氯喹(C(C1818H H2626ClNClN3 32H2H3 3POPO4 4) )应为标示量的应为标示量的93.0%93.0%107.

33、0%107.0%。01含量测定4 2磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定* * ChP2010ChP2010中磷酸氯喹中磷酸氯喹注射液注射液( (本品含磷酸氯喹的灭菌水溶液。含磷酸氯喹本品含磷酸氯喹的灭菌水溶液。含磷酸氯喹(C(C1818H H2626ClNClN3 32H2H3 3POPO4 4) )应为标示量的应为标示量的95.0%95.0%105.0%105.0%。) )的含量的的含量的提取酸量测定法提取酸量测定法：* *精密量取本品适量精密量取本品适量( (约相当于磷酸氯喹约相当于磷酸氯喹0.3g)0.3g)，用水稀释至，用水稀释至30ml30ml，加，加20%20%氢氧化钠溶

34、液氢氧化钠溶液3ml3ml，摇，摇匀，用乙醚提取匀，用乙醚提取4 4次，每次次，每次20ml20ml，合并乙醚液，用，合并乙醚液，用10ml10ml水洗涤，水洗涤液再用水洗涤，水洗涤液再用15ml15ml乙醚提取乙醚提取1 1次，合并前后两次的乙醚液，蒸发至近次，合并前后两次的乙醚液，蒸发至近2 23ml3ml时，精密加盐酸滴定液时，精密加盐酸滴定液(0.lmol/L)25ml(0.lmol/L)25ml，温热，温热蒸去乙醚并使残渣溶解，冷却，加蒸去乙醚并使残渣溶解，冷却，加溴甲酚绿溴甲酚绿指示液数滴，用氢氧化钠滴定液指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)(0.lmol/L)滴定。滴

35、定。每每lmllml盐酸滴定液盐酸滴定液(0.lmol/L)(0.lmol/L)相当于相当于25.79mg C25.79mg C1818H H2626ClNClN3 32H2H3 3POPO4 4 。 * * USP USP 采用提取后采用提取后HPLCHPLC测定磷酸氯喹注射液的含量。测定磷酸氯喹注射液的含量。青蒿素类药物的分析第二节第二节CONTENTS青蒿素简介青蒿素简介* * 青蒿素青蒿素(artemisinin)(artemisinin)又名黄蒿素，是我国学者从从菊科植物黄花蒿又名黄蒿素，是我国学者从从菊科植物黄花蒿(artemisia annua L.)(artemisia ann

36、ua L.)中提中提取分离得到的一个含取分离得到的一个含过氧基团的新型倍半萜内酯过氧基团的新型倍半萜内酯。* * 青蒿素是一种高效、速效、低毒的新型抗疟药。本品为青蒿素是一种高效、速效、低毒的新型抗疟药。本品为脂溶性脂溶性，易透过血脑屏障。在体内，易透过血脑屏障。在体内代谢代谢很快很快，排泄快排泄快，有效血药浓度维持，有效血药浓度维持时间短时间短。主要用于耐氯喹的恶性疟，包括脑型疟的抢救。主要用于耐氯喹的恶性疟，包括脑型疟的抢救。* * 因有效血药浓度维持时间短，杀灭疟疾原虫不彻底，复燃因有效血药浓度维持时间短，杀灭疟疾原虫不彻底，复燃率高达率高达30%30%，与伯氨喹合用与伯氨喹合用，可使复

37、燃率降至，可使复燃率降至10%10%。* * 青蒿素是一种高效、速效、低毒的新型抗疟药。本品为青蒿素是一种高效、速效、低毒的新型抗疟药。本品为脂脂溶性溶性，易透过血脑屏障。在体内，易透过血脑屏障。在体内代谢很快代谢很快，排泄快排泄快，有效血，有效血药浓度维持药浓度维持时间短时间短。主要用于耐氯喹的恶性疟，包括脑型疟。主要用于耐氯喹的恶性疟，包括脑型疟的抢救。的抢救。青蒿素发展史青蒿素发展史* * 青蒿素的多种衍生物均是治疗疟疾的有效单体，国内外青蒿素的多种衍生物均是治疗疟疾的有效单体，国内外公认的首创新药。公认的首创新药。* * 将青蒿素结构中将青蒿素结构中C-10C-10位羰基还原成羟基得到

38、位羰基还原成羟基得到双氢青蒿素双氢青蒿素，进一步烷氧基化得到，进一步烷氧基化得到蒿甲醚蒿甲醚，而进，而进行酯化可得到行酯化可得到青蒿琥酯青蒿琥酯。* * 随着对青蒿素类药物随着对青蒿素类药物药理作用研究的不断深入药理作用研究的不断深入，证实其具有抗疟、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、，证实其具有抗疟、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、抗弓形虫、抗心律失常和肿瘤细胞毒性等作用。抗弓形虫、抗心律失常和肿瘤细胞毒性等作用。* * 19901990年，为了控制疟疾对青蒿素的耐药性，世界卫生组织建议在治疗中必须将青蒿素同别的抗年，为了控制疟疾对青蒿素的耐药性，世界卫生组织建议在治疗中必须将青蒿素同别的抗疟药疟药联合使

39、用联合使用。* * 20072007年年5 5月，在瑞士日内瓦举行的第月，在瑞士日内瓦举行的第6060届世界卫生大会上，世界卫生组织声明，单方青蒿素会届世界卫生大会上，世界卫生组织声明，单方青蒿素会引发耐药性，建议在全球范围内推广引发耐药性，建议在全球范围内推广复方类抗疟药复方类抗疟药。青蒿素类药物的基本结构与主要性质1鉴别试验2纯度检查3含量测定4目录目录CONTENTS01基本结构与主要性质1OOH3COOHCH3HHOCH3青蒿素青蒿素Artemisine OOH3COOHCH3HHCH3HHHO双氢青蒿素双氢青蒿素Dihydroartemisinin OOH3COOHCH3HHCH3H

40、HOCH3H蒿甲醚蒿甲醚Artemether OOH3COOHH3CHHCH3HHOHOHOO青蒿琥酯青蒿琥酯Artesunate 典型药物结构与物理性质典型药物结构与物理性质1将青蒿素结构中将青蒿素结构中C-10C-10位羰基位羰基还原成还原成羟基羟基得到得到双氢青蒿素双氢青蒿素(dihydroartemisinin)(dihydroartemisinin)，进一步，进一步烷氧基烷氧基化化得到得到蒿甲醚蒿甲醚(artemether)(artemether)，而进行，而进行酯化酯化可得到可得到青蒿琥酯青蒿琥酯(artesunate)(artesunate)。011.1.氧化性氧化性由于青蒿素类

41、是具有过氧桥的由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物倍半萜内酯类化合物，这类化，这类化合物具有氧化性。合物具有氧化性。2.2.旋光性旋光性青蒿素类药物都均有旋光性，均为青蒿素类药物都均有旋光性，均为右旋体药物右旋体药物。青蒿素其比。青蒿素其比旋度为旋度为 +75+75o o+78+78o o。蒿甲醚其比旋度为。蒿甲醚其比旋度为+168+168o o+173+173o o。OOH3COOHCH3HHOCH312345678911125a8a12a10(3(3R R,5a,5aS S,6,6R R,8a,8aS S,9,9R R,12,12S S,12a,12aR R)-)-八氢八氢- -3

42、,6,9-3,6,9-三甲基三甲基-3,12-3,12-氧桥氧桥-12-12H H- -吡喃并吡喃并4,3-4,3-j j-1,2-1,2-苯并二塞平苯并二塞平-10(3-10(3H H)-)-酮酮 基本结构与主要性质1主要化学性质主要化学性质2013.3.水解反应水解反应青蒿素结构中由于青蒿素结构中由于有内酯有内酯，在碱性条件下，发生水解，但其，在碱性条件下，发生水解，但其 他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。4.UV4.UV吸收特征吸收特征由于青蒿素类药物分子结构中母核，由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有不具有共轭体系，其紫共轭体系，其紫 外

43、吸收光谱的主要是外吸收光谱的主要是末端吸收末端吸收。但。但C-10C-10由于取代基的不同由于取代基的不同具具 有一定有一定吸收特征吸收特征。OOH3COOHCH3HHOCH312345678911125a8a12a10(3(3R R,5a,5aS S,6,6R R,8a,8aS S,9,9R R,12,12S S,12a,12aR R)-)-八氢八氢- -3,6,9-3,6,9-三甲基三甲基-3,12-3,12-氧桥氧桥-12-12H H- -吡喃并吡喃并4,3-4,3-j j-1,2-1,2-苯并二塞平苯并二塞平-10(3-10(3H H)-)-酮酮 内酯内酯主要化学性质主要化学性质2基本

44、结构与主要性质1鉴别试验2 1呈色反应呈色反应*过氧桥的氧化反应（碘化钾试液过氧桥的氧化反应（碘化钾试液- -淀粉）淀粉）由于青蒿素类是具有由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物过氧桥的倍半萜内酯类化合物，这类化合物具有，这类化合物具有氧化性氧化性。在酸性条件能。在酸性条件能将将I I- -氧化成氧化成I I2 2与淀粉指示液，生成与淀粉指示液，生成蓝紫色蓝紫色。ChP2010ChP2010青蒿素的鉴别：取本品约青蒿素的鉴别：取本品约5mg5mg，加无水乙醇，加无水乙醇0.5ml0.5ml溶解后，加碘化钾试液溶解后，加碘化钾试液0.4ml0.4ml，稀硫，稀硫酸酸2.5ml2.5ml与淀

45、粉指示液与淀粉指示液4 4滴，立即呈紫色。滴，立即呈紫色。ChP2010ChP2010双氢青蒿素片的鉴别：取本品的细粉适量双氢青蒿素片的鉴别：取本品的细粉适量( (约相当于双氢青蒿素约相当于双氢青蒿素20mg)20mg)，加无水乙醇，加无水乙醇2ml2ml使双氢青蒿素溶解，滤过，滤液中加碘化钾试液使双氢青蒿素溶解，滤过，滤液中加碘化钾试液2ml2ml与稀硫酸与稀硫酸4ml4ml，摇匀，加淀粉指示液，摇匀，加淀粉指示液数滴，溶液即显蓝紫色。数滴，溶液即显蓝紫色。鉴别试验2 1呈色反应呈色反应*羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟胺作用，生成含有内酯

46、的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟胺作用，生成羟肟酸羟肟酸；在；在稀酸中与高铁离子稀酸中与高铁离子呈色。呈色。ChP2010ChP2010收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。ChP2010ChP2010青蒿素的鉴别：取本品约青蒿素的鉴别：取本品约5mg5mg，加无水乙醇，加无水乙醇0.5ml0.5ml溶解后，加盐酸羟胺试液溶解后，加盐酸羟胺试液0.5ml0.5ml与氢与氢氧化钠试液氧化钠试液0.25ml0.25ml，置水浴中微沸，放冷后，加盐酸，置水浴中微沸，放冷后，加盐酸2 2滴和三氯化铁试液滴和三氯化铁试液1 1滴，立即显深紫

47、红滴，立即显深紫红色。色。ChP2010ChP2010青蒿琥酯的鉴别：取本品约青蒿琥酯的鉴别：取本品约50mg50mg，加含，加含7 7盐酸羟胺的乙醇溶液盐酸羟胺的乙醇溶液(80100)1ml(80100)1ml，再加，再加乙醇制氢氧化钾试液乙醇制氢氧化钾试液3ml3ml，置水浴中加热至沸，放冷，加稀盐酸至呈酸性，再加三氯化铁试液，置水浴中加热至沸，放冷，加稀盐酸至呈酸性，再加三氯化铁试液ldld，即显紫红色。，即显紫红色。鉴别试验2 1呈色反应呈色反应*香草醛香草醛- -硫酸反应硫酸反应* * 香草醛硫酸溶液又称硫酸香兰素显色剂。有机酸、挥发油、甾醇、萜类等，都可与之香草醛硫酸溶液又称硫酸香

48、兰素显色剂。有机酸、挥发油、甾醇、萜类等，都可与之产生显色反应。产生显色反应。* * 硫酸香草醛溶液显色原理硫酸香草醛溶液显色原理: :使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。ChP2010ChP2010青蒿琥酯的鉴别：取本品约青蒿琥酯的鉴别：取本品约50mg50mg，加三氯甲烷，加三氯甲烷1ml1ml溶解后，取溶解后，取3 34 4滴置白瓷板上，滴置白瓷板上，待三氯甲烷挥发后，加待三

49、氯甲烷挥发后，加2 2香草醛硫酸溶液香草醛硫酸溶液1 1滴，显红色。滴，显红色。鉴别试验2 2吸收光谱特征吸收光谱特征*红外吸收光谱特征红外吸收光谱特征* * 青蒿素类抗疟原料药在青蒿素类抗疟原料药在ChP2010ChP2010中均采用中均采用红外光谱红外光谱的方法进行鉴别。要求所得的红外的方法进行鉴别。要求所得的红外光吸收图谱应与对照的光吸收图谱应与对照的图谱一致图谱一致。* * 但是但是制剂制剂的红外光吸收图谱鉴别须的红外光吸收图谱鉴别须经提取分离经提取分离，残渣干燥后，进行红外光吸收图谱与，残渣干燥后，进行红外光吸收图谱与对照的图谱比较。对照的图谱比较。ChP2010ChP2010青蒿琥

50、酯片的鉴别：取本品的细粉适量青蒿琥酯片的鉴别：取本品的细粉适量( (约相当于青蒿琥酯约相当于青蒿琥酯0.1g)0.1g)，加，加15ml15ml丙酮振丙酮振摇使溶解，滤过，滤液挥干，残渣用硅胶为干燥剂减压干燥。残渣的红外光吸收图谱应摇使溶解，滤过，滤液挥干，残渣用硅胶为干燥剂减压干燥。残渣的红外光吸收图谱应与青蒿琥酯的对照图谱一致。与青蒿琥酯的对照图谱一致。鉴别试验2 2吸收光谱特征吸收光谱特征*紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征* * 由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端吸收。但吸收

51、。但C-10C-10由于取代基由于取代基的不同具有一定吸收特征。的不同具有一定吸收特征。ChP2010ChP2010均未采用本法鉴别所收载均未采用本法鉴别所收载青蒿素类药物。青蒿素类药物。* * ChP2010 ChP2010均未采用本法鉴别均未采用本法鉴别所收载青蒿素类药物。所收载青蒿素类药物。鉴别试验2 3色谱法色谱法* * 利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的保留时间保留时间( (t tR R) )是否一致或比较供试品溶液所是否一致或比较供试品溶液所显显主斑点的位置和颜色主斑点的位置和颜色与对照品溶液主斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。与对照品溶液主斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。* * HPLCHPLC法法一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。照品溶液主峰的保留时间一致。* * 青蒿素类抗疟青蒿素类抗疟原料药原料药在在ChP2010ChP2010中均采用中均采用HPLCHPLC的方法进行鉴别。但的方法进行鉴别。但制剂制剂中也有采用中也有采用TLCTLC法法进行鉴别。进行鉴别。纯度检查3*目前青蒿素的制备仍以天然药材分离提取为主，并用于其衍生药