常用试剂的配制

1、常用试剂的配制1无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO3 0.175g Na2HPO4·12H2O 0.076g KH2PO4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 调整 pH 值至7.4，4冰箱保存备用。2甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。3Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO4·7H2O 2g MgCl2

2、·6H2O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。 原液乙： Na2NPO4·12H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。使用时甲,乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4冰箱保存，使用前用NaHCO3调整PH值。40.4%酚红溶液称取0.4g酚红置研

3、钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5pH7.2 Tris-NH4CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH4Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4保存。 60.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。7磷酸盐缓冲液 (P

4、B)A 液： 为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最后补加蒸馏水至 1000ml 。B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g（或 Na2HPO4·12H2O71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。80.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na2B4O7.10H2O） 0.46g 硼酸（H2BO3） 0.51g 加蒸馏水至100

5、ml 溶解。 9PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na2HPO4（ Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH2PO4（NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸馏水至1000ml）取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。配制方法二：甲液（0.1m

6、ol/LKH2PO4溶液）：KH2PO413.608g，加蒸馏水至1000ml。乙液（0.1mol/L Na2HPO4溶液）：Na2HPO435.814g，加蒸馏水至1000ml。取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。100.05mol/L pH9.6碳酸缓冲液Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g加蒸馏水至1000ml。ELISA实验包被用。110.01mol/L pH7.4 PBS内含2%BSA（牛血清白蛋白）取BSA2ml加0.01mol/L p

7、H7.4PBS至100ml即可。ELISA实验封闭用。12PH5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml 0.1mol/L柠檬酸(19.2g/L) 24.5ml 加蒸馏水至100ml即为pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液。13底物溶液pH 5.0磷酸-柠檬酸缓冲液加入邻苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1l/ml)溶解后即为ELISA底物液，临用前配制，避光保存。142mol/L硫酸浓H2SO4（36N）取 1ml36N的H2SO4缓缓加入18 ml蒸馏水内即为2mol/L，用于ELISA实验终止反应。15清洁液的配制清洁液分高、中、低液三

8、种。低浓度清洁液重铬酸钾 100g 水 750ml 硫酸 250ml中浓度清洁液 重铬酸钾 60g 水 300ml 硫酸 460ml高浓度清洁液 重铬酸钾 100g 水 200ml 硫酸 800ml先将重铬酸钾倒入自来水中，然后加入浓硫酸，边加硫酸边用玻璃棒搅拌。由于加入浓硫酸后产生高热，故加酸时要慢，溶器应用耐酸耐高温塑料或陶器制品。配制好的清洁液，应存于有盖的玻璃溶器内。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如果清洁液经过长期使用已呈黑色，表明已经失效，不宜再用。由于清洁液有强腐蚀性，故操作时要十分注意。 16PH6.4 l/l5mol/ml磷酸盐缓冲盐水（PBS）：（1）l/l5mol/ml 磷酸二氢钾溶液 KH2PO4 9.04g 蒸馏水 加至1000ml（2）l/l5mol/ml 磷酸氢二钠溶液 Na2HPO4·2H2 O 11.87g （或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g 蒸馏水 加至1000ml（3）PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸盐缓冲盐水（PBS） l/l5mol/ml磷酸二氢钾溶液 73ml l/l5mol/ml磷酸氢二钠溶液 27ml NaCl 0.5g 混匀溶解