生物化学实验习题及解答

1、生物化学实验习题及解答一、名词解释1、pI；2、层析；3、透析；4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳；5、蛋白质变性；6、复性；7、Tm 值；8、同工酶；9、Km值； 10、DNA变性；11、退火；12、增色效应二、基础理论单项选择题1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键？（ ）A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法2、下列哪组反应是错误的？ （ ） A、葡萄糖Molish反应 B、胆固醇Libermann-Burchard反应 C、色氨酸坂口（Sakaguchi）反应 D、氨基酸茚三酮反应3、Sanger试剂是（ ） A、苯异硫氰酸 B、2，4-二硝基氟苯 C、丹

2、磺酰氯 D、b-巯基乙醇4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收？（ ） A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收？（ ） A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（ ） A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查？ （ ） A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Fol

3、in-酚试剂8、蛋白质变性是由于（ ） A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（ ） A、胶体性 B、粘性 C、变性作用  D、沉淀作用 10、有关变性的错误描述为（ ） A、蛋白质变性后，其一级结构和空间结构改变 B、蛋白质变性后，其理化性质和生物学活性改变C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性D、变性蛋白质粘度增加，易被酶水解，易沉淀11、双链DNA热变性后（ ） A、黏度下降 B、沉降系数下降 C、浮力密度下降 D、紫外吸收下降12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点通

4、常在酶的哪一种氨基酸残基上？（ ） A、天冬氨酸 B、脯氨酸 C、赖氨酸 D、丝氨酸13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H+的受体，也可以作为H+的供体？（ ） A、His的咪唑基 B、Arg的胍基 C、Cys的巯基 D、Trp的吲哚基三、填空1、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（ ）色物质，而其他氨基酸与茚三酮产生（ ）色的物质。2、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的（ ）、（ ）、（ ）三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。3、移液枪在每次实验后应将刻度调至（ ），让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命，并严禁吸取（ ）。4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时

5、，应立即（ ），并且离心管须对称放入套管中，防止机身振动，若只有一支样品管，则另外一支要用（ ）代替。5、测定蛋白质浓度的方法主要有（ ）、（ ）、（ ）。6、利用蛋白质不能通过半透膜的特性，使它和其他小分子物质分开的方法有（ ）和（ ）等。7、核酸在260nm附近有强吸收，这是由于（ ）。8、双键DNA热变性后，或在pH2以下，或在pH12以上时，其OD260（ ），同样条件下，单键DNA的OD260（ ）。9、硝酸纤维素膜可结合（ ）链核酸。将RNA变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称（ ）印迹法。10、常用二苯胺法测定（ ）含量，用苔黑酚法测定（ ）含量。11、变性DNA的复性与许多

6、因素有关，包括（ ）、（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。12、温度对酶活力影响有以下两方面：一方面（ ），另一方面（ ）。13、维生素C是（ ）酶的辅酶，另外还具有（ ）作用。14、在分光光度计的使用或检定中，（ ）的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。（ ）的误差越大，测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性。四、问答1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。2、蛋白质变性与沉淀的关系。3、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。4、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。5、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质，如何排除干扰？6、体液血糖测定有哪些方法？

7、7、DNA在电场中的迁移率取决于哪些因素？8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？9、考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么？10、何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？11、蛋白质分离和纯化的一般方法？ 12、如何正确选择核酸电泳指示剂？参考答案一、名词解释1、指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的pH值，用符号pI表示。2、按照在移动相和固定相（可以是气体或液体）之间的分配比例将混合成分分开的技术。3、通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。4、在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。SDS-PAGE只是按照分子的大小，而不

8、是根据分子所带的电荷大小分离的。5、生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照，热，有机溶济以及一些变性济的作用时，次级键受到破坏，导致天然构象的破坏，使蛋白质的生物活性丧失。6、在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。7、核酸分子变性过程中，紫外吸收达到最大增量一半时的溶解温度。8、能催发相同的反应类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。9、反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。是酶的特征物理学常数之一。近似表示酶与底物的亲和力。10、DNA双链解链，分离成两条单链的现象。11、既DNA由单链复性、变成双链结构的过程。来源相同的DNA单

9、链经退火后完全恢复双链结构的过程，同源DNA之间DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。12、当双螺旋DNA熔解（解链）时，260nm处紫外吸收增加的现象。二、基础理论单项选择题1、A；2、C；3、B；4、A；5、A；6、B；7、B；8、C；9、D；10、A；11、A；12、D；13、A；三、填空1、黄、紫2、Trp、Tyr、phe3、最大、强挥发性、强腐蚀性的液体。4、切断电源，即时排除故障；等质量的水5、双缩脲法、Folin-酚试剂法、凯氏定氮法6、透析、超滤7、在嘌呤碱基和嘧啶碱基中存在共轭双键8、增加、不变9、单、Northern10、DNA、RNA11、样品的均一度、DNA的浓度、D

10、NA片段的大小、温度的影响、溶液的离子强度12、温度升高，可使反应速度加快；温度太高，会使酶蛋白变性而失活13、羟化、解毒14、透射比或吸光度、透射比或吸光度四、问答1、答 ：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，RNA和DNA的紫外吸收峰在260nm波长处。一般在260nm波长下，每1ml含1µg RNA溶液的光吸收值为0.0220.024，每1m1含1µg DNA溶液的光吸收值约为0.020，故测定未知浓度RNA或DNA溶液在260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测光

11、误差较大，故应设法事先除去。2、答 ： 沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀，也可以是由于盐析。 蛋白质变性是指光照，热，有机溶济以及一些变性剂（如重金属盐）的作用时蛋白质的空间结构被破坏，使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。 盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐，使得蛋白质沉淀析出，这是由于加入盐降低了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆，加水蛋白质又会溶解。 二者本质上是不同的。3、答 ：牛奶含有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得，糖类小分子由于处于清夜中而分离，沉淀物中所含有的脂肪通过有机溶剂抽提而去除，最终得到纯白色、晶状酪蛋白。方法：取新鲜牛乳，用酸碱

12、调PH到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白，然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重，计算提取率。步骤：保温调PH沉淀离心洗涤干燥称量4、答：1）紫外凝胶照相时要防止EB污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。2）注意开机顺序，先开凝胶成像系统，再打开电脑进入GeneSnap软件。3）在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。5、答： 用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）使蛋白质变性，RNA通过RNase消化清除。6、答：测定血糖的方法常用的有三种：静

13、脉血浆葡萄糖（VPG），毛细血管全血葡萄糖（CBG）和静脉全血葡萄糖（VBG）。7、答： 1） DNA的分子大小及构型： ?8 不同构型DNA的移动速度次序为：供价闭环DNA（covalently closed circular，cccDNA）>直线DNA>开环的双链环状DNA。2）琼脂糖浓度：一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。& t, j6 G  h/ 4 G9 N& Y3）DNA分子的构象 ：当DNA分子处于不同构象时,它

14、在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。" + * V$ u! W9 a2 z; z4）电源电压 ：琼脂糖凝胶分离大分子DNA实验条件的研究结果表明，在低浓度、低电压下，分离效果较好。: T9 D3 Y$ o) A! w: & D0 ?4 ( R5) 嵌入染料的存在 ：荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA，使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低15。/ 6 N7 L5 m# B

15、  6）离子强度影响 ：电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。8、答： 1）缓冲液的使用要正确，长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2）琼脂糖的影响。3）凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致。4）样品加入量的多少。5）电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。6）DNA样品中的盐浓度也影响DNA的迁移率。7）DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状及大小。9、答： 考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在01000g范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法（Bradford法）是比色法与色素法相结合的复合方法，简便快捷，灵敏度高，稳定性好，是一种较好的蛋白质常用分析方法。10、答： Rf为氨基酸的比移值