现代生物学实验I教案

1、现代生物学实验I教案课程名称：细胞生物学实验实验时数：32主讲教师：肖辉海基本教材及主要参考书：熊大胜等. 现代生物学实验. 中南大学出版社杨汉民. 细胞生物学实验. 高等教育出版社 细胞生物学实验教学一览表序号实验名称内 容 提 要实验要求实验时数实验类型每组人数备注1特殊显微镜结构及操作技术暗视场显微镜、相差显微镜、荧光显微镜的结构、原理、构造及其操作生物.农学动科必开3综合22显微摄影技术NIKON显微摄影装置及YS100数码显微镜摄影原理及技术，染色体图象分析系统软件的使用，染色体图象采集、处理及核型分析技术。生物.农学动科必开3基本23细胞膜的特性观察细胞凝集反应细胞膜的渗透性生物选

2、开3综合24细胞器分离、制备与观察叶绿体的分离与荧光观察；线粒体制备与活性鉴定。生物必开6综合25细胞骨架观察植物细胞骨架临时装片的制备；镜检；植物细胞骨架永久切片的制备。生物选开3综合26酸性磷酸酶的显示方法小白鼠注射6%淀粉肉汤抽取腹腔液10%中性福尔马林酸性磷酸酶作用1%硫化胺姬姆萨染色封片镜检。生物必开3综合27细胞融合细胞悬液的制备；诱导细胞融合；镜检；统计平均融合率。生物必开3综合28影响植物原生质体融合研究实验方案的设计；原生质体的分离、活性鉴定；原生质体的融合。生物必开8综合设计2实验1 特殊光学显微镜的结构与使用（学时：3）一、教学目的与要求1、掌握TE2000-U型倒置显微

3、镜的特殊部件；    2、掌握TE2000-U型倒置显微镜的使用方法和用途；   3、熟悉TE2000-U型倒置显微镜的基本结构。二、教学内容与时间安排1、TE2000-U型倒置显微镜的构造与使用；（40分钟）2、明视场(BF)镜检；（20分钟）3、相差（PH）显微术；（20分钟）4、微分干涉（DIC）显微术；（20分钟）5、荧光（E）显微术。（20分钟）6、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）三、教学方法实验预习、实验态

4、度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：临时制片技术；几种特殊显微镜操作技术。难点：特殊显微镜操作五、解决方法：先通过多媒体向学生讲清操作流程，然后分小组向学生一边讲述一边示范，最后让学生自己练习；在此过程中，教师要注意学生的操作，及时纠正学生的不规范操作，要求学生能观察到标本的图象。六、教学后记：实验2 显微摄影术（学时：3）一、教学目的与要求1、了解显微摄影装置，掌握显微摄影原理；2、掌握显微摄影技术，独立完成显微摄影全过程；3、了解显微图象分析系统，掌握图象处理、分析技术。二、教学内容与时间安排1、了解OLYMPUS及NIKON显微摄影装置，

5、掌握显微摄影原理；（30分钟）2、掌握YS100数码显微摄影技术，用提供的动植物细胞组织永久切片，独立完成显微摄影全过程；（50分钟）3、了解染色体图象分析系统软件，掌握染色体图象采集、处理及核型分析技术。（40分钟）4、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）三、教学方法实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：显微摄影；图象处理及分析技术。难点：图象处理及分析五、解决方法：先通过多媒体向学生讲清操作流程，然后分小组一边讲述

6、一边示范，最后让学生自己练习；在此过程中，教师要注意学生的操作，及时纠正学生的不规范操作，要求学生将观察到的标本的图象通过相应软件记录下，并进行分析。六、教学后记：实验3 细胞膜的特性观察（学时：3）一、教学目的与要求1、了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度；    2、学习研究细胞凝集反应的方法，了解细胞发生凝集反应的原因。   二、教学内容与时间安排1、讲解；（10分钟）2、鸡血细胞悬液制备；（10分钟）3、低渗溶液处理；（15分钟）4、细胞的渗透性观察；（35分钟）5、可溶性土豆凝集素的提取；（15分钟）6、血球凝血现象的

7、显微观察。（35分钟）7、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）三、教学方法实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：血球凝集现象的观察；溶血现象的观察。难点：判断细胞是否发生凝集或溶血五、解决方法：注意学生的操作，具体指导学生判断细胞是否发生凝集或溶血。六、教学后记：实验4 细胞器分离、制备与观察I线粒体制备与活性鉴定（学时：3）一、教学目的与要求1、掌握分离制备动物和植物细胞线粒体的方法；  

8、0; 2、对分离得到的线粒体进行活性鉴定。  二、教学内容与时间安排1、讲解；（10分钟）2、制备肝细胞匀浆；（20分钟）3、差速离心；（70分钟）4、活性鉴定。（20分钟）5、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）三、教学方法实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：线粒体的分离难点：线粒体的活性鉴定五、解决方法：先向学生讲清在普通光学显微镜和荧光显微镜下线粒体的形态特征，并让学生仔细观察教师做好的装片

9、，然后在教师指导下学生自己操作。六、教学后记：II叶绿体的分离与荧光观察（学时：3）一、教学目的与要求了解叶绿体分离的一般原理和方法，并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。二、教学内容与时间安排1、讲解；（15分钟）2、叶绿体的制备；（70分钟）3、荧光显微镜观察。（35分钟）6、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）三、教学方法实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：叶绿体的分离难点：叶绿体的荧光显微镜观察五、解决

10、方法：先向学生讲清在普通光学显微镜和荧光显微镜下叶绿体的形态特征，并让学生仔细观察教师做好的装片，然后在教师指导下学生自己操作。六、教学后记：实验5 酸性磷酸酶的显示方法（学时：3）一、教学目的与要求掌握Comori法的基本原理和方法。观察酸性磷酸酶在细胞内的分布状况。二、教学内容与时间安排1、实验原理的讲解；（15分钟）2、细胞内酸性磷酸酶临时装片的制作；（90分钟）3、镜检。（20分钟）4、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （10分钟）三、教学方法1、教师在实验前三天，每天向小白鼠腹腔内

11、注射 1 mL 6% 淀粉肉汤，使小白鼠产生排异反应；2、实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：取样；临时装片的制作。难点：临时装片的制作技术五、解决方法：注意学生的操作，要求学生严格按照实验指导书上的操作流程进行。显微观察时选做得好的玻片标本让大家一起来观察。六、教学后记：实验6 细胞骨架的观察（学时：3）一、教学基本要求掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。二、教学内容与时间安排1、植物细胞骨架临时装片的制备（100分钟）2、镜检（10分钟）3、植物细胞骨架永久切片的制备（25分钟）

12、4、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （10分钟）三、教学方法1、实验教师先做好若干片植物细胞骨架的永久切片；2、实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：植物细胞骨架切片的制备难点：植物细胞骨架永久切片的制备五、解决方法：先通过多媒体向学生讲清操作流程，然后分步操作，以小组为单位向学生一边讲述一边示范；在此过程中，教师要注意学生的操作，及时纠正学生的不规范操作，要求学生制备出能观察到植物细胞骨架的临时装片。六、教学后记：实验7 诱

13、导细胞融合（聚乙二醇法）（学时：3）一、教学目的与要求了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导细胞融合的方法。二、教学内容与时间安排1、讲解（10分钟）2、细胞悬液的制备（20分钟）3、诱导细胞融合（70分钟）4、镜检（15分钟）5、统计平均融合率（10分钟）6、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （10分钟）三、教学方法实验预习、实验态度、提问、考勤纪律、实验操作规范性及熟练程度等给学生当堂打分。四、教学重点、难点重点：细胞悬液的制备；诱导细胞融合。难点：诱导细胞融合五、解决方法：做好预备实

14、验，通过多媒体向学生讲清操作流程及注意事项，注意学生的操作，及时纠正学生的不规范操作，要求学生能观察到标本的图象。六、教学后记：实验8 影响植物原生质体融合研究（学时：8）一、教学目的与要求了解和探讨黄瓜幼苗不同器官(或酵母)原生质体提取、纯化和融合的适宜条件,认识研究原生质体融合方法的重要性。二、教学内容1、选用不同的黄瓜品种的种子,不同条件下(在无菌条件下光照、不同药剂浸泡处理、种子成熟率等)进行萌发,观察萌发条件对原生质体提取、分离和纯化的影响。2、选择不同培养基培养黄瓜(或酵母)对分离原生质体的影响。3、取不同器官切成细条后提取原生质体,比较获取原生质体的条件和能力。 4、用不同成分、

15、浓度的酶液(含0.5%2%纤维素酶、0.3%10%离析酶、00.5%半纤维素酶、3mmol/L 2-N-吗啡琳乙磺酸钠、1Ommol/L CaCl2、0.7mmol/LKH2PO4和0.3mol/L甘露醇组成的酶液)(pH5.7)分离原生质体,过滤和洗涤后离心沉淀收集原生质体。了解不同酶系对原生质体分离的影响。5、用化学诱导法或电融合法分别融合原质体,了解使用黄瓜(或酵母)用两个方法融合的适宜条件。观察原生质体密度对原生质体融合的影响。6、融合后原生质体短暂培养条件(从培养基、培养方式、光照条件等方面)的建立和效果比较。7、通过显微摄影记录原生质体融合情况，或在显微镜下观察统计原生质体融合率。三、教学方法1、查阅文献，按照