Waters Alliance 2695 HPLC 操作及维护

1、2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIALRev. 08112005Waters Alliance 2695 HPLC Waters Alliance 2695 HPLC 操作及维护操作及维护20112011年年9 9月月2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL基本构造基本构造仪器日常操作仪器日常操作仪器常见故障及维护保养仪器常见故障及维护保养2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 溶剂输送系统溶剂输送系统(串联泵串联泵) 进样系统进样系统

2、 柱温箱柱温箱 检测器检测器基本构造基本构造2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL溶剂瓶控制面板样品盘串联泵进样器在线脱气机Waters e2695Waters e2695示意图示意图2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL溶剂输送系统溶剂输送系统2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL26952695溶剂输送系统（串联泵）示意图溶剂输送系统（串联泵）示意图2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDE

3、NTIALPrime/Vent ValveInletCheckvalveInletCheckvalveABCDFront2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL样品管理系统样品管理系统2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 样品管理系统可存放和定位样品样品管理系统可存放和定位样品瓶并将样品注入溶剂流。样品管瓶并将样品注入溶剂流。样品管理系统有理系统有 5 5 个样品转盘。个样品转盘。 每个样品转盘中最多可容纳每个样品转盘中最多可容纳 24 24 个样品瓶，共计可容纳个样品瓶，共计可容纳 1

4、20 120 个个样品瓶。样品瓶。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL样品管理系统中的流路样品管理系统中的流路2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL柱柱 温温 箱箱2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL检测器检测器2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 开机开机 操作前准备操作前准备 灌注柱塞密封泵灌注柱塞密封泵(Prime Seal Wash) 灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵 (

5、Prime Needle Wash) 打开真空脱气机打开真空脱气机 干灌注干灌注(Dry Prime) 湿灌注湿灌注(Wet Prime) 冲洗进样器冲洗进样器 (Purge Injector)日常操作日常操作2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 依次打开依次打开LAC/ELAC/E采集服务器、采集服务器、26952695分离单元、所需检测器以分离单元、所需检测器以 及计算机的电源。仪器进行及计算机的电源。仪器进行5 5分钟自检后，出现以下画面分钟自检后，出现以下画面。开机开机2010 Waters Corporation | COMPA

6、NY CONFIDENTIAL2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL 用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经0.450.45m m滤滤膜过滤，脱气应充分。膜过滤，脱气应充分。 必须确保必须确保6 6根管子全部插到溶剂瓶的底部。根管子全部插到溶剂瓶的底部。 准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（Seal WashSeal Wash）液体。）液体。 准备合适的灌注针头清洗泵（准备合适的灌注针头清洗泵（Needle WashNeedle Wash）液体。）液体。操作前准备操作前准备2

7、010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL灌注柱塞密封清洗泵灌注柱塞密封清洗泵(Prime Seal Wash)当首次使用或整个管路都已干燥时当首次使用或整个管路都已干燥时1.回到回到Menu 画面，选择画面，选择Diag。2. 将注射器适配器连接到注射器。将注射器适配器连接到注射器。3. 移除密封清洗入口管路上的滤头。移除密封清洗入口管路上的滤头。4. 将注射器装满清洗液，然后将注射器适配器连到密封清洗管路末端。将注射器装满清洗液，然后将注射器适配器连到密封清洗管路末端。5. 按按Prime Seal Wash ，再按，再按Start 。6.

8、推进注射器使清洗液进入系统。推进注射器使清洗液进入系统。7. 当有溶剂从密封清洗废液管中流出时，按当有溶剂从密封清洗废液管中流出时，按Halt。8. 重新安装滤头。重新安装滤头。9. 按按Close返回。返回。注意事项：当更换溶液时，只需执行步骤注意事项：当更换溶液时，只需执行步骤1，5，7和和9。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL灌注针头清洗泵灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash)注意事项：注意事项：1 1 溶剂的选择：根据样品及流动相的化学特性来作选择。溶剂的选择：根据样品及流动相的化学特性来作选择。 2 2 若为浓

9、度较高的样品需要较强的溶剂来清洗若为浓度较高的样品需要较强的溶剂来清洗。 3 3 若样品对若样品对pHpH较敏感，应考虑洗针液的较敏感，应考虑洗针液的pHpH。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL1. 按按“Menu/Status” 键，进入键，进入Status (1)画面。画面。2. 利用方向键利用方向键 将光标移至将光标移至“Degasser”位置，按位置，按Enter。3. 利用上下键选择模式为利用上下键选择模式为ON，如下图所示。，如下图所示。打开真空脱气机（打开真空脱气机（Degasser）注意事项：注意事项：在开启真空脱气机时

10、，要确认所有溶剂管路都充满溶在开启真空脱气机时，要确认所有溶剂管路都充满溶 剂；若没有溶剂时请执行溶剂的剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime 操作。操作。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL干灌注（干灌注（Dry prime）：）：系统第一次运行或系统中无溶液时进行。系统第一次运行或系统中无溶液时进行。1 将溶剂管路插入到相应的容器。将溶剂管路插入到相应的容器。2 轻轻摇动滤头，以除去可能存在的气泡。轻轻摇动滤头，以除去可能存在的气泡。3 将注射器连到灌注将注射器连到灌注/排放阀。如图所示。排放阀。如图所示。4 逆时针旋转阀逆时

11、针旋转阀1/2圈，将其打开。圈，将其打开。5 按按Status屏幕中的屏幕中的Direct Function键，选择键，选择Dry Prime，然后按，然后按Enter。6 在上述对话框中，选择要灌注的溶剂管路在上述对话框中，选择要灌注的溶剂管路对应的屏幕键。如图所示。对应的屏幕键。如图所示。7 抽回注射器活塞以将溶剂抽出管路抽回注射器活塞以将溶剂抽出管路。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL湿灌注（湿灌注（Wet prime）：）：更换流动相；排除气泡；仪器闲置了一段时间。更换流动相；排除气泡；仪器闲置了一段时间。注意事项：注意事项：

12、为避免损坏柱塞密封，仅在流路中存在溶剂时执行湿灌注。为避免损坏柱塞密封，仅在流路中存在溶剂时执行湿灌注。 若更换流动相与之前流动相不互溶，采用中间溶液过渡。若更换流动相与之前流动相不互溶，采用中间溶液过渡。 以最低粘度的溶液开始湿灌注，以帮助清除管路中的空气。以最低粘度的溶液开始湿灌注，以帮助清除管路中的空气。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL执行湿灌注执行湿灌注1 在在“status”屏幕的屏幕的“Composition”字段中，为要字段中，为要用于湿灌注的溶剂输入用于湿灌注的溶剂输入“100%”。2 按按“Direct Functi

13、on”键，选择键，选择“Wet Prime”，出现湿灌注对，出现湿灌注对话框。话框。3 按按“OK”，执行湿灌注。，执行湿灌注。4 可根据实际情况重复灌注。可根据实际情况重复灌注。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL冲洗自动进样器（冲洗自动进样器（Purge Injector） 更换为当前流动相更换为当前流动相 清除流路或注射器中的气泡清除流路或注射器中的气泡2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL日常操作步骤日常操作步骤选择合适溶剂选择合适溶剂 湿灌注湿灌注清洗系统清洗系统 Purge

14、 InjectorPurge Injector实验操作实验操作 洗针洗针 平衡系统平衡系统 Purge InjectorPurge Injector洗针洗针 2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL常见故障及维护保养常见故障及维护保养 流动相流动相 输液泵输液泵 进样系统进样系统 色谱柱色谱柱 检测器检测器2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL流动相流动相故障故障可能原因可能原因排除排除基线噪声大；出毛刺基线噪声大；出毛刺脱气不充分脱气不充分充分脱气充分脱气泵压力不稳；流动相泵压力不稳；流

15、动相供给不畅供给不畅流动相接近用完或滤流动相接近用完或滤头堵塞头堵塞用用HPLC试剂试剂/溶剂，溶剂，并使用并使用0.45m滤膜过滤膜过滤滤产生有规则噪声；基产生有规则噪声；基线上升；梯度洗脱出线上升；梯度洗脱出鬼峰鬼峰流动相被污染流动相被污染使用干净容器，确认使用干净容器，确认试剂未被污染试剂未被污染2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL输液泵输液泵故障故障可能原因可能原因排除排除打不出溶剂（缓冲盐流动相）打不出溶剂（缓冲盐流动相）球和阀座粘在一起，堵死球和阀座粘在一起，堵死用高质量不同极性溶剂用高质量不同极性溶剂冲洗；更换新单向阀。冲洗

16、；更换新单向阀。压力和流速变化大压力和流速变化大球和阀座密封不严，压力球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中不稳，气泡进入阀中清除气泡：打开排液阀清除气泡：打开排液阀，用脱过气的甲醇大流，用脱过气的甲醇大流量冲洗，一般可解决问量冲洗，一般可解决问题。题。Wet Prime从泵头往外渗漏流动相，色谱从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变峰的保留时间会改变泵垫圈磨损或破碎泵垫圈磨损或破碎更换新垫圈更换新垫圈柱塞杆磨损、漏液柱塞杆磨损、漏液使用不当被折断使用不当被折断被卡住，不能运动被卡住，不能运动正常损耗或安装不合适正常损耗或安装不合适更换新柱塞杆更换新柱塞杆2010 Waters Cor

17、poration | COMPANY CONFIDENTIAL注意事项注意事项 每天实验结束一定要认真冲洗泵每天实验结束一定要认真冲洗泵,减少密封垫损耗及堵塞。减少密封垫损耗及堵塞。 输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的,但有但有的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。 注意流动相组分的互溶性，使用正确的注意流动相组分的互溶性，使用正确的Seal Wash 溶剂。溶剂。 必要时清洗单向阀：如果使用过缓冲盐溶液应使用必要时清洗单向阀：如果使用过缓

18、冲盐溶液应使用40 50的温水的温水超声超声20min。如果使用过纯乙腈应使用异丙醇超声。如果使用过纯乙腈应使用异丙醇超声20min。如果使用过。如果使用过其他流动相或上述两种溶液超声后应使用纯甲醇超声其他流动相或上述两种溶液超声后应使用纯甲醇超声20min。2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL进样系统进样系统故障故障可能原因可能原因排除排除针弯、折断、抽不上针弯、折断、抽不上样、瓶破碎样、瓶破碎样品瓶不配套样品瓶不配套更换合适的样品瓶更换合适的样品瓶进样器针头堵塞进样器针头堵塞样品、缓冲样品、缓冲盐、隔垫碎片盐、隔垫碎片、针头本身、针头

19、本身可用溶剂清洗，或换新针头可用溶剂清洗，或换新针头空白溶剂出色谱峰空白溶剂出色谱峰洗针未洗净洗针未洗净更换洗针液，或调整样品瓶更换洗针液，或调整样品瓶顺序顺序2010 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL注意事项注意事项 每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针每次批量进完样后手动清洗，或最后进一针50ul流动相，如果流动相中有盐流动相，如果流动相中有盐的话则用纯净水替代缓冲盐那部分比例。的话则用纯净水替代缓冲盐那部分比例。 打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出，注意保持样品仓内和样品打开样品仓盖后，等待样品盘停止转动后再取出，注意保持样品仓内和样品盘清洁。盘清洁。 使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值。使用微量进样瓶请设定正确的针尖高度值。 注射器，样品瓶最好使用仪器自配的，不要用其它仪器的。注射器，样品瓶最好使用仪器自配的，不要用其它仪器的。 仪器右侧的仪器右侧的Syringe要注意不能有气泡，一旦出现，应使用面板上的要注意不能有气泡，一旦出现，应使用面板上的Purge Injector功能。功能。 停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成样品交叉污染，硬件磨损或