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1、古方黄连香薷饮有效部位不同配比的药效研究2010-11-2 7:44:44论文代写作者:胡惠兰 王姿媛【摘要】 目的 观察黄连香薷饮有效部位不同配比的药效。方法 采用相应的动物模型,观察黄连香薷饮不同配比混合提取物的抗病毒、清热、镇痛、抗炎等作用。结果 不同比例的黄连香薷饮提取物可明显抑制甲型流感病毒FM1株引起的小鼠肺部病变、降低肺指数,有体内抗流感病毒作用,对酵母所致发热大鼠有退热作用,对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀有抗急性炎症的作用,有减少冰乙酸致小鼠疼痛扭体次数和提高热板致痛小鼠痛阈值的作用。结论 黄连香薷饮有效部位不同配比均有一定的抗病毒、清热、镇痛、抗炎等药理作用。 【关键词】 黄连香薷
2、饮 药理作用 抗病毒 抗炎古方黄连香薷饮1出自类证活人书,由黄连、香薷、厚朴三味药材组成,功效清暑化湿,治疗暑湿症即现代临床常见的暑湿感冒、空调病、胃肠型感冒等,临床表现为发热、出汗、鼻塞头痛、头昏重胀、身重倦怠。方中药材黄连的主要有效成分是以小檗碱为主的生物学碱类成分,黄连提取物对革兰阳性和阴性细菌、各型流感病毒均有一定的抑制作用,小檗碱具有抗急慢性炎症的作用2。严银芳等3采用柱层析法从香薷的挥发油中分离到了抗流感病毒的活性成分,厚朴提取物也具有明显的抗菌、抗病毒、镇静抗炎作用4。本实验对黄连、香薷、厚朴提取物不同配比的抗病毒、清热、镇痛、抗炎作用进行了实验研究,现将结果报道如下。1 实验材
3、料1.1 动物 NIH小鼠,雌雄兼有,1822 g,广东省医学实验动物中心提供,符合清洁级实验标准,许可证号SCXK(粤)20050002;SD大鼠,雌雄兼有,180220 g,由广东省医学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(粤)20050001。1.2 药物与试剂 黄连、香薷、厚朴三位药材的有效部位不同比例配比混合物(由广州中医药大学中药学院提供),比例如下:111(A)、233(B)、122(C);甲型流感病毒FM1株,由中国药品生物检定所提供,经小鼠增强毒力后,于鸡胚尿囊腔传代2次;病毒唑,山东齐鲁制药有限公司出品,批号080206;阿司匹林,北京华丰制药公司生产,批号20071005
4、;面包酵母,Yung Cheng Industries LTD出品;地塞米松片,通化东宝药业有限公司生产,批号070763;二甲苯:广州化学试剂厂,批号200604032;乙醚,天津化学试剂有限公司;生理盐水,广州市宏祥医药科技有限公司;冰乙酸,分析纯,进口分装,广东医药站化学公司;吗啡注射液,沈阳第一制药厂出品,批号865354。1.3 仪器 YJ875医用净化工作台,苏州净化设备公司;压力蒸汽灭菌器,上海南华医疗器械厂;超纯水器,Millipore;超低温冰箱,Sanyo 日本;精密电子分析天平,上海良平仪器仪表有限公司; LRH800GS型人工气候箱,广东省医疗器械厂出品。2 方法与结果
5、2.1 对甲型流感病毒FM1株的体内抑制作用5 模型的建立:取甲型流感病毒FM1株用流水冲浸融化,以无菌盐水稀释成每0.05 mL含15个LD50(半数致死量),放冰水中保存。在乙醚轻度麻醉下,用已滴定的流感病毒液滴鼻感染,每鼠4滴约0.05 mL,同时设正常小鼠对照组。 取小鼠60只,雌雄各半,随机分成6组,每组10只:正常小鼠对照组、模型组、阳性药物组(病毒唑)、 A配比组、 B配比组、 C配比组。药物在病毒攻击后2 h开始给药。共给药4 d,每天1次,灌胃给药。感染4 d后,禁食禁水4 h以上,称小鼠体质量,处死小鼠,取出鼠肺,记录病变程度。 将肺放在盛有生理盐水的平碟中洗涤2次,用吸水
6、纸吸干表面水分,称出肺重。按下式计算出肺指数与抑制率:肺指数=小鼠肺重(g)/小鼠体质量(g)100%,肺指数抑制率=(模型组平均肺指数-给药组平均肺指数)/模型组平均肺指数100%。肺实变程度从“病变-”到“+”程度逐渐加深:-:双侧肺无病变出现;+:肺实变少于整个肺表面积的25%;+:肺实变占整个肺表面积的25%50%;+:肺实变占整个肺表面积的50%75%;+:肺实变占整个肺表面积的75%以上。结果见表1,2。表1 不同配比对流感病毒感染小鼠肺炎抑制作用(略)Table 1 Inhibitory action on mouse pneumonia infected with influe
7、nza virus与模型组比较: *P0.05,*P0.01 (t检验)表2 不同配比对流感病毒感染小鼠肺实变程度的影响(略)Table 1 Influence on mouse lung consolidation infected with influenza virus由表1可见,正常组与模型组肺指数比较,P0.01,提示造模成功。黄连香薷饮不同配比组平均肺指数与模型组比较差异有显著性。不同配比的黄连香薷饮均能减轻病毒感染后小鼠肺实质病变的程度,其中C配比的作用略强。2.2 对酵母所致发热大鼠的退热作用6 取大鼠50只,雌雄各半,在安静状态下测量基础体温,然后按照基础体温随机分成5组,每
8、组10只:蒸馏水组、阿司匹林组、 A配比组、 B配比组、 C配比组。每组大鼠分2次给药,第1次灌胃给各组药物一半剂量后,每只大鼠腹部皮下注射9%酵母混悬液,造模4 h后,第2次灌胃给另一半剂量。于造模后4 h、6 h、8 h、10 h时,分别测大鼠肛温1次,以造模后各时间点的肛温减去基础体温,作为退热效果进行统计。结果见表3。表3 不同配比对酵母致大鼠发热的影响实验(略)Table 3 Influence on rat fever caused by yeast与蒸馏水组比较: *P0.05, *P0.01表3结果表明,黄连香薷饮不同配比组在10 h时大鼠肛温与蒸馏水组比较有下降,差异有显著性
9、,不同配比组间的差异不明显。2.3 对二甲苯所致小鼠急性炎症的影响 取小鼠50只,雌雄各半,随机分成5组,每组10只:蒸馏水组、地塞米松组、 A配比组、 B配比组、 C配比组。灌胃给药3 d(地塞米松组灌蒸馏水,于第3天灌胃地塞米松),末次给药1 h后,将50 L的二甲苯均匀涂于小鼠右耳两面致炎,左耳作对照,20 min后处死小鼠,用直径6 mm的打孔器将双耳同部位等面积切下,用电子天平分别称重,以左右耳片重量之差为肿胀程度。结果见表4。表4 不同配比对二甲苯致小鼠耳肿胀影响的实验(略)Table 4 Influence on ear swelling of mice caused by pa
10、raxylene与蒸馏水组比较:*P0.01 表4结果表明,黄连香薷饮不同配比组肿胀程度小于蒸馏水组,差异有显著性,提示对二甲苯所致小鼠有抗急性炎症作用。2.4 小鼠冰乙酸致痛扭体实验7 取小鼠50只,雌雄各半,随机分成5组,每组10只:蒸馏水组、吗啡组、 A配比组、B配比组、 C配比组。分别灌胃给药(吗啡组腹腔注射),1 h后(吗啡半小时后),每只小鼠腹腔注射0.6%冰乙酸0.2 mL,记录注射后20 min内小鼠因疼痛扭体的次数。结果见表5。表5 不同配比对冰乙酸致小鼠疼痛扭体影响的实验(略)Table 5 Influence on mouse pain stretching caused
11、 by glacial acetic acid蒸馏水组比较:*P0.05;*P0.01 结果表明,黄连香薷饮不同配比组小鼠扭体次数都少于蒸馏水组,差异有显著性,提示对冰乙酸致小鼠疼痛有抑制作用。2.5小鼠热板镇痛实验 取雌性小鼠,将水浴箱调节恒温(551),放一个大烧杯于水中,将小鼠投入烧杯,记录小鼠从投入烧杯至受热疼痛舔后足的时间,作为该鼠的痛阈值。筛选痛阈值在1030 s的小鼠,按痛阈值分层随机分成5组,每组10只:蒸馏水组、吗啡组、 A配比组、 B配比组、 C配比组,分别灌药,记录各组给药后30、60、90和120 min时的痛阈值。结果见表6。表6 不同配比对小鼠热板实验镇痛作用的影响
12、(略)Table 6 Influence on analgesic effect of mice caused by hot plate与蒸馏水组比较:*P0.05,*P0.01表6结果表明,黄连香薷饮不同配比组在不同时间点的痛阈值均大于蒸馏水组,差异有显著性,提示对热板致痛小鼠有镇痛作用。3 讨论3.1 黄连香薷饮原方为黄连6 g、香薷9 g、厚朴9 g,传统服用方法多采用水煎煮的方式,本研究中各药材有效部位是分别根据有效成分的理化性质采用水提酸碱处理、超临界萃取等方法得到,由于与传统工艺差异较大,因此所提化学成分的种类和数量也大不相同。对于有效部位的配比组方必须通过试验研究才能确定。本实验
13、对3种不同配比的药效进行了初步的比较研究。其中A配比为等比例混合,B配比根据原处方量结合药材的提取率确定,C配比是根据各药材有效部位的急性毒性试验及初步药效试验结果而定。3.2 研究结果显示黄连香薷饮有效部位不同配比均有显著的抗病毒、退热、抗炎、镇痛作用,其中对甲型流感病毒FM1株的体内抑制试验、二甲苯所致小鼠急性炎症试验、小鼠冰乙酸致痛扭体实验、小鼠热板镇痛实验从数据趋势上来看,C配比的药效可能强于A配比和B配比。3.3 本实验对黄连香薷饮3种有效部位的配比进行了药效比较研究,初步得出了结论。但对于有效部位配伍的最佳比例还应采用更科学的试验方法如正交设计、均匀设计等来确定,笔者将在本实验的基础上进行进一步研究。【参考文献】 1 魏敏. 黄连香薷饮加味治疗小儿夏季热15例J. 实用中医药杂志, 2005,21(10):602.2 舒华,向丽华. 黄连药理作用及临床应用J. 甘肃中医, 2004,17(12):5-6.3 严银芳,陈晓,杨小清,等. 石香薷挥发油抗流感病毒活性成分的初步研究J. 青岛大学医学院学报, 2002,38(2):155-157.4 陈芨,王伯初. 厚朴的药理研究进展J. 重庆
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