南京医科大学博导论坛-细胞与分子实验-周建伟

1、 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 基因的结构和功能关系基因的结构和功能关系 理论与实践理论与实践周建伟周建伟 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展认识基因的结构和功能认识基因的结构和功能理论基础理论基础 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展真核和原核细胞的基真核和原核细胞的基因转录与翻译因转录与翻译 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展15 Feb 2001 The Sanger Centre, Wel

2、lcome Trust Genome Campus, Hinxton, Cambridge CB10 1SA, UK16 Feb 2001Celera Genomics, 45West Gude Drive, Rockville, MD 20850,USA 值得纪念的里程碑，人类首次解密自身的基因密码值得纪念的里程碑，人类首次解密自身的基因密码 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展科学家对科学家对DNA含义的理解含义的理解 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展科学家对科学家对DNA含义的理解含义的理解 JWA基因结构和功能相互关系研究

3、进展基因结构和功能相互关系研究进展科学家对科学家对DNA含义的理解含义的理解 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展科学家对科学家对DNA含义的理解含义的理解 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展蛋白质的相互作用蛋白质的相互作用 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展HGP的完成为探索基因功能打下了坚实的基础的完成为探索基因功能打下了坚实的基础 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展候选基因候选基因（Candidate Genes）全基因组关联学研究全基因组关联学研究（ Genom

4、e-wide Association Study）生物学通路研究生物学通路研究（Pathway-based Genes） JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 机体易感性对环境因素致癌的影响机体易感性对环境因素致癌的影响 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展基因基因表型联系的复杂性表型联系的复杂性 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展/sci/techresources/Human_Genome/home.shtml JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相

5、互关系研究进展http:/ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA基因的结构和功能基因的结构和功能关系研究：关系研究：实践探索实践探索 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展建立诱导细胞分化模型，克隆调建立诱导细胞分化模型，克隆调节细胞分化的关键基因，解析基因结节细

6、胞分化的关键基因，解析基因结构功能关系，发展基于机制研究的构功能关系，发展基于机制研究的基因干预手段基因干预手段科研思路科研思路 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 恶性肿瘤是危害人类健康最主要的疾病恶性肿瘤是危害人类健康最主要的疾病 之一，大多数恶性肿瘤是由环境因素和之一，大多数恶性肿瘤是由环境因素和 基因交互作用所致基因交互作用所致 恶性肿瘤的生物学特征包括无限增殖、恶性肿瘤的生物学特征包括无限增殖、 分化和凋亡障碍、浸润以及转移分化和凋亡障碍、浸润以及转移 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 肿瘤转移是恶性肿瘤威胁生命的最主

7、要肿瘤转移是恶性肿瘤威胁生命的最主要原因原因 细胞迁移是肿瘤浸润和转移的必备条件细胞迁移是肿瘤浸润和转移的必备条件对肿瘤细胞迁移及其调控机制的研究已成为对肿瘤细胞迁移及其调控机制的研究已成为肿瘤预防和治疗领域的热点肿瘤预防和治疗领域的热点 Ridley A J., et al. Science. 2003; 302(5651):1704-1709Condeelis and Pollard. Cell. 2006; 124: 263-266 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 细胞的各种生物学行为是由细胞内相应分细胞的各种生物学行为是由细胞内相应分子按信号通路执行

8、完成的子按信号通路执行完成的 丝裂原活化的蛋白激酶丝裂原活化的蛋白激酶 （MAPK）信号通）信号通路是细胞内最主要的信号通路之一，可介路是细胞内最主要的信号通路之一，可介导多种细胞生物学行为导多种细胞生物学行为 在细胞迁移过程中在细胞迁移过程中, MAPK信号通路起重信号通路起重要调节作用要调节作用Raftopoulou M. Nature Cell Biology. 2006; 8, 654 Huang C, et al. Jorunal of Cell Scicence. 2004; 117(20): 4619-4628 Hashiramoto A. et al. Oncogene. 20

9、06; 25, 39483955 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展MAPKSignalPathway环境因素刺激环境因素刺激细胞信号转导通路细胞信号转导通路如如MAPK磷酸化激活下游靶分子磷酸化激活下游靶分子生物学效应生物学效应增殖增殖 分化分化 凋亡凋亡 迁移迁移 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展细胞信号转导的一般规律细胞信号转导的一般规律 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA基因基因 由我本人由我本人1997年发现和克隆，年发现和克隆，1998年获年获GenBank新新基因号：基因号：A

10、F070523 2002年年HUGO把把JWA正式命名为正式命名为ARL6IP5；GenBank中的其它别名：中的其它别名：GTRAP3-18; PRAF3; jmx等等 JWA在人染色体定位是在人染色体定位是3p14; cDNA全长为全长为2.1kb, 其其编码蛋白定位于细胞浆，含编码蛋白定位于细胞浆，含188个氨基酸个氨基酸 JWA在生物进化中保守在生物进化中保守 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA基因库文件基因库文件大鼠大鼠JWA基因库文件基因库文件课题组登录在课题组登录在GenBank的人的人和大鼠和大鼠JWA基因序列基因序列 JWA基因结构和功能

11、相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWAHUGO正式批准正式批准JWA及其同源基因的基因名为及其同源基因的基因名为ARL6IP5 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA基因的染色体定位基因的染色体定位 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展人类人类3号染色体的基因构成和特点号染色体的基因构成和特点 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 人、小鼠、大鼠人、小鼠、大鼠 JWA基因染色体定位对应关系基因染色体定位对应关系 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA同源

12、基因同源基因DNA和蛋白质相似性和蛋白质相似性人人 黑猩猩黑猩猩 犬犬 小鼠小鼠 大鼠大鼠 鸡鸡 斑马鱼斑马鱼 果蝇果蝇 蚊蚊 线虫线虫 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展LOCUS AAC64360 188 aa DEFINITION JWA protein Homo sapiens. AUTHORS Zhou,J.W., Di,Y.P. and Wu,R. TITLE A novel differentially displayed vitamin A responsive gene that is A novel differentially displa

13、yed vitamin A responsive gene that is cytoskeleton relatedcytoskeleton related JOURNAL Submitted (02-JUN-1998) Internal Medicine, UC at Davis, Rm 1121, Surge I, CCRBM, UC Davis, Davis, CA 95616, USA MDVNIAPLRAWDDFFPGSDRFARPDFRDISKWNNRVVSNLLYYQTNYLVV 50AAMMISIVGFLSPFNMILGGIVVVLVFTGFVWAAHNKDVLRRMKKRYP

14、TT 100 FVMVVMLASYFLISMFGGVMVFVFGITFPLLLMFIHASLRLRNLKNKLEN 150KMEGIGLKRTPMGIVLDALEQQEEGINRLTDYISKVKE 188 Open Reading Frame(ORF) of JWA PKC phosphorylation sites: SDR, SLR Three transmembrane domains JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展氨基端在膜外侧，羧基端在膜内侧；氨基端在膜外侧，羧基端在膜内侧； 第一个跨膜区为一级螺旋结构，第二第一个跨膜区为一级螺旋结构，第二和第三

15、个跨膜区为二级螺旋结构；两个和第三个跨膜区为二级螺旋结构；两个PKC磷酸化位点分别在膜两侧；第磷酸化位点分别在膜两侧；第一个跨膜区为一级螺旋结构，第二和第三两个跨膜区为二级螺旋结构。一个跨膜区为一级螺旋结构，第二和第三两个跨膜区为二级螺旋结构。 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA蛋白磷酸化基序预测蛋白磷酸化基序预测 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展97年以来，课题组对年以来，课题组对JWA基因结构功能基因结构功能关系研究取得一系列创新性成果关系研究取得一系列创新性成果u 围绕围绕JWA应答环境理化因素（应答环境理化因素（H

16、2O2、热休克、热休克、UV），）， 着重研究：着重研究： JWA应答细胞氧化应激应答细胞氧化应激 调节调节DNA碱基切除修复碱基切除修复（BER） 调节细胞凋亡的作用和机制调节细胞凋亡的作用和机制u围绕围绕JWA是细胞骨架相关蛋白，调节多种细胞分化，是细胞骨架相关蛋白，调节多种细胞分化，着重研究：着重研究： JWA调节细胞迁移调节细胞迁移/细胞恶性转化细胞恶性转化调节细胞调节细胞粘附、浸粘附、浸润润 体内肿瘤体内肿瘤转移的作用和机制转移的作用和机制1997？ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展

17、JWA基因与细胞凋亡基因与细胞凋亡 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA 表达是表达是As2O3通过活性氧通过活性氧-线粒体信线粒体信号通路诱导肿瘤细胞凋亡的必需分子号通路诱导肿瘤细胞凋亡的必需分子 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展As2O3 诱导诱导 HeLa 和和 MCF-7 细胞凋亡与细胞凋亡与JWA表达相平行表达相平行HeLa CellMCF-7 Cell JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA 表达是表达是As2O3抗增殖和促凋亡作用的必需条件抗增殖和促凋亡作用的必需条件HeLa

18、 CellMCF-7 Cell JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展下调下调JWA表达表达 阻止阻止 As2O3诱导肿瘤细胞凋亡的作用诱导肿瘤细胞凋亡的作用依赖于依赖于 caspase-9表达表达 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展下调下调JWA表达抑制表达抑制As2O3 对线粒体膜电位的影响对线粒体膜电位的影响 C1-HeLa As-HeLa JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展As2O3 产生的产生的ROS诱导诱导JWA表达表达 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JW

19、A激活激活MEKERK1/2 和和JNK分子的磷酸化分子的磷酸化 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA与肿瘤细胞凋亡与肿瘤细胞凋亡小小 结结As2O3 产生的产生的H2O2通过诱导通过诱导JWA表达触发一系表达触发一系列信号转导机制诱导列信号转导机制诱导HeLa和和MCF-7细胞凋亡细胞凋亡 JWA为为As2O3诱导活化诱导活化MEKERK和和JNK所必所必需，进一步影响线粒体膜电位并激活需，进一步影响线粒体膜电位并激活 casepase-9，从而在，从而在As2O3诱导细胞凋亡中发诱导细胞凋亡中发挥中心作用挥中心作用 As2O3诱导诱导 Bad活化与细胞凋

20、亡有关，也受活化与细胞凋亡有关，也受JWA调节，但与调节，但与MEKERK/JNK机制无关机制无关 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展Zhou J., et al. Toxicol Appl Pharmacol, 2008, 230: 33-40 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA应答氧化应激的分子机制应答氧化应激的分子机制 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展XRCC1, Pol APE1, Lig III, PARP-1未修复未修复DNA修复修复维护基因组稳定维护基因组稳定癌症癌症SIRT

21、6 BER通路通路基因组基因组不稳定不稳定DNA损伤DNA损伤Cell, 2006Nature, 2008衰老衰老ROS损伤严重损伤严重修复能力缺陷修复能力缺陷 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展问题的提出问题的提出JWA应答细胞的氧化应激？应答细胞的氧化应激？是否应答？是否应答？如何应答？如何应答？ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展SOD:catalase:O-2. O-2. H2O2 H2O2 O2O-2. H2O2 H2OcatalaseSOD细胞中活性氧代谢规律细胞中活性氧代谢规律 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基

22、因结构和功能相互关系研究进展通过靶基因通过靶基因起效应起效应ROS或自由基或自由基激活转录因子激活转录因子激活信号转导激活信号转导通路通路MAPK通路等通路等NF- B 、AP-1等等清除清除ROS修复细胞损伤修复细胞损伤细胞凋亡细胞凋亡氧化应激作用于细胞的过程和转归氧化应激作用于细胞的过程和转归 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA参与参与B(a)P 诱导细胞诱导细胞DNA损伤与修复损伤与修复123450.00.4hsp70JWA*B(a)P浓度 （ M）灰 度 比 值 1. control 2. DMSO 3. 10M 4. 50M 5

23、. 100M -actin JWAhsp70 1 2 3 4 550 McontrolDMSO10 M100 M3h24h损伤损伤修复修复 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展A3A2B1B2B3A2CtrlB(a)Pno enzymeFPGEndo IIIB(a)P代谢产物暴露使细胞形成代谢产物暴露使细胞形成8-OH-dG JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展H2O2 H2O2 + Endo H2O2 + FPG00.010.101.00 H2O2(mmol/L)ABCEFGHJKLDIH2O2所致细胞所致细胞DNA损伤和损伤和8-

24、OH-dG的形成的形成 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 Lane 1 2 3 4 5 6AJWA-actin 15 30 60 60 60 minctrlH2O2SOD - - - - + -catalase - - - - - + Lane 1 2 3 4 5 6 7B-actin JWAB(a)PB(a)Pctrl4 8 12 24 24 24 hrSOD - - - - - + -catalase - - - - - - +胞内胞内H2O2自由基自由基诱导诱导JWA的表达的表达 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展untr

25、eatedH2O2H2O2 + SODH2O2 + catalaseO-2. level(DE)H2O2 level(DCFH-DA)H2O2处理后细胞内处理后细胞内O-2.和和H2O2变化变化(活性氧染色实验活性氧染色实验) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展untreatedB(a)PB(a)P + SODB(a)P + catalaseO-2. level(DE)H2O2 level(DCFH-DA)B(a)P处理后细胞内处理后细胞内O-2.和和H2O2变化变化(活性氧染色实验活性氧染色实验) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究

26、进展筛选转录活性最强的筛选转录活性最强的启动子区域启动子区域(报告基因模型报告基因模型) 600 bpS1S2S3S4S5S6M300 bp100 bp2143013646017021587ALUC(-194/+107)LUC(-257/+107)LUC(-494/+107)LUC(-595/+107)LUC(-1680/+107)LUC(+21/+107)LUC(-107/+107)0100002000030000basal100MH2O2100 MB(a)Prelative luciferase activity JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展B1 2

27、3 4 5 6 7 8 9ctrl H2O2 B(a)Pprobe-107/-28 wt核因子与核因子与转录活性最强的转录活性最强的启动子区域结合启动子区域结合( (凝胶阻滞实验凝胶阻滞实验) ) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展证实该核因子的分子量为证实该核因子的分子量为47kD(Southwestern 实验实验) ctrl H2O2 B(a)P-107/+107 wtprobe47kDC JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展CBF ? NF1 ?CEBP ?GATA-1 ? H2O2和和B(a)P共同激活的转录因子共同激活的

28、转录因子 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展D ctrl H2O2 B(a)PNF1/CTFAb47kD证实该核因子可能为证实该核因子可能为NF1(1)(Western blot 实验实验) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展核因子为核因子为NF1 (2)(Supershift 实验实验) B(a)PH2O2-107/-28 wtprobe- - + - +NF1 AbFree probeprobe+proteinprobe+protein+Abprobe+proteinprobe+protein+AbE JWA基因结构和功能相互

29、关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展F ctrl H2O2 B(a)P-107/+107 wtprobe65kD ctrl H2O2 B(a)PNF1/CTFAb65kD进一步证实该核因子为进一步证实该核因子为NF1 (3)(免疫沉淀实验免疫沉淀实验) nuclear extractsNF1 antibodyProtein ADIG-labeled -107/+107ProbeWestern blot JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展干涉干涉NF1可有效阻断可有效阻断H2O2和和B(a)P诱导的诱导的JWA转录活性转录活性(1) Grelative lu

30、ciferase activity05000100001500020000basal2O2HB(a)Pbasal+NF1-siRNA+ NF1-siRNA2O2HB(a)P+ NF1-siRNA JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展干涉干涉NF1后阻断了后阻断了H2O2和和B(a)P诱导的诱导的JWA表达表达(2)(RNAi实验实验) Lane1 2 3 4JWA-actin NF1H2O2 - - + -NF1 siRNA - + + +B(a)P - - - +HWestern blot JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展-94

31、/-90-53/-49CCAAT boxCCAAT box-107-28CBF NF1 CEBP GATA-1 ?JWA启动子区有两个启动子区有两个NF1结合元件结合元件 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展A制备制备CCAAT 变异探针用于检测其与变异探针用于检测其与NF1结合结合 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 ctrl H2O2 B(a)PCTF1(-107/-59)probeCTF2 (-58/-9)CTF1+2 (-97/-44)CTFm1+2 (-97/-44)47kDBNF1与与第二个第二个CCAAT元件结合元件结

32、合(1)(Southwestern 实验实验) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展C-58/-91 2 3 4 5 6 7 8 9ctrl H2O2 B(a)Pprobe-107/-591 2 3 4 5 6 7 8 9ctrl H2O2 B(a)PprobeNF1与与第二个第二个CCAAT 元件结合元件结合(2)(凝胶阻滞实验凝胶阻滞实验) JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展NF1与与第二个第二个CCAAT元件结合元件结合(3)(定点突变实验定点突变实验) LUCLUCLUCD0100002000030000-107 Luc m

33、2-107 Luc m1-107 Luc wtbasal100M H2O2100M B(a)P JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展Normal KD-JWA -actinJWA1 2ABVector-ctrlHeLaKD-JWAHeLacontrolB(a)P 3hRe-3h123456JWA保护氧化应激引起的保护氧化应激引起的DNA损伤损伤 损伤损伤修复修复 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA通过调节通过调节BER信号通路参与信号通路参与DNA修复修复 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JW

34、A应答氧化应激应答氧化应激-小结小结JWA应答氧化应激应答氧化应激氧化应激产生的氧化应激产生的H2O2通过通过NF1与与JWA启启动子区动子区CCAAT元件结合后激活元件结合后激活JWA表达表达JWA进一步通过进一步通过BER信号通路促进信号通路促进DNA修复修复 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展Chen R., et al. Free Radic Biol Med, 2007,42:1704 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展作为细胞氧化应激条件下的应答基因，作为细胞氧化应激条件下的应答基因，JWA如何保护细胞拮抗氧化损伤？如

35、何保护细胞拮抗氧化损伤？ 作为还原性蛋白直接中和细胞内活性氧？作为还原性蛋白直接中和细胞内活性氧？ 作为作为DNA修复蛋白修复修复蛋白修复DNA损伤？损伤？进一步的问题进一步的问题 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA作为还原性蛋白直接中和作为还原性蛋白直接中和细胞内活性氧？细胞内活性氧？ JWA缺陷细胞在氧化应激条件下细胞缺陷细胞在氧化应激条件下细胞内活性氧含量增加？使细胞回复表达内活性氧含量增加？使细胞回复表达JWA后细胞内活性氧含量减少？后细胞内活性氧含量减少？ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 实验结果：实验结果：细

36、胞内细胞内JWA表达水平不影响表达水平不影响活性氧含量活性氧含量JWA可能不是直接的还原可能不是直接的还原性蛋白性蛋白 JWA作为作为DNA修复蛋白修复修复蛋白修复DNA损伤？损伤？ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展实验模型实验模型NIH-3T3HELF氧化损伤氧化损伤模型：模型：氧氧化化损损伤伤MMSH2O2损伤修复损伤修复模型：模型：氧氧化化损损伤伤除去氧化剂除去氧化剂加入新鲜培养液加入新鲜培养液修复修复H2O2H2O2：Hydrogen Peroxide, Hydrogen Peroxide, 过氧化氢过氧化氢MMS: methyl methanesul

37、fonate, MMS: methyl methanesulfonate, 甲磺酸甲酯甲磺酸甲酯 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA参与氧化应激诱导的参与氧化应激诱导的DNA损伤修复损伤修复 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展Untreated plasmidH2O2damaged plasmid宿主细胞活性实验宿主细胞活性实验 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展细胞中细胞中JWA的表达增强的表达增强DNA损伤修复能力损伤修复能力 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研

38、究进展JWA低表达的细胞对氧化剂造成的损伤更加敏感低表达的细胞对氧化剂造成的损伤更加敏感MTT实验实验 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA低表达的细胞表现出氧化损伤更加严重低表达的细胞表现出氧化损伤更加严重检测细胞中检测细胞中NAD(P)H水平水平 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展免疫共沉淀免疫共沉淀AB JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA作为作为BER复合物中新的修复分子复合物中新的修复分子CD JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA调节调节XRCC

39、1和和Lig III的表达而不影响的表达而不影响APE1的表达的表达 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展ABC氧化损伤引起氧化损伤引起JWA的核移位的核移位 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展DE敲减JWA抑制XRCC1进核 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展氧化损伤诱导氧化损伤诱导JWA浆核易位浆核易位F JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展XRCC1对对JWA的浆核易位起重要的作用的浆核易位起重要的作用AB JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系

40、研究进展B12H2O2 通过通过E2F1调节调节XRCC1转录转录 JWA影响影响H2O2 对对XRCC1的转录调节的转录调节 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展DCProbe：5-TAA TTT TTT TCG CGC GTG CGC GCG CGC GTA-3 biotinCompetitor Probe： 5-TAA TTT TTT TCG CGC GTG CGC GCG CGC GTA-3 JWA通过通过E2F1调节调节XRCC1的转录水平的转录水平Mutated Competitor Probe：5-TAA TTT TCG AGC TGC GTA GA

41、C TCA CGC GTA-3 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展BJWA通过调节通过调节MAPK信号通路影响信号通路影响E2F1的表达的表达A JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展BA JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA维持维持XRCC1的蛋白稳定的蛋白稳定 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展敲减敲减JWA加速泛素化酶对加速泛素化酶对XRCC1的降解的降解 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA抑制抑制XRCC1通过泛素通过泛素

42、-蛋白酶体途径降解蛋白酶体途径降解 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展GJWA表达不受泛素化影响表达不受泛素化影响 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA与与DNA碱基切除修复碱基切除修复小结小结氧化应激激活的氧化应激激活的JWA通过通过MAPK-E2F1转转录调节录调节XRCC1及其下游分子表达，启动及其下游分子表达，启动细胞应答氧化应激机制细胞应答氧化应激机制JWA与与XRCC1相互调节核内表达量，协相互调节核内表达量，协调调DNA氧化损伤后的氧化损伤后的BER修复过程修复过程JWA通过泛素化途径调控核内通过泛素化途径调控核

43、内XRCC1的的表达量表达量 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2H2O2JWA应答氧化应激调节应答氧化应激调节BER信号通路的机制信号通路的机制 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展Wang SY, et al. Nucleic Acids Res. 2009, 37(6):1936-1950 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展进一步的问题进一步的问题细胞细胞JWA表达水平是否影响其抵抗环境因表达水平是否影响其抵抗环境因素的损伤作用？素的损伤作用？细胞细

44、胞JWA表达水平与肿瘤易感性关系？表达水平与肿瘤易感性关系？JWA与与XRCC1的相互调节关系与肿瘤发的相互调节关系与肿瘤发生发展？生发展？ JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展-76GG-76GC-76GC-76GG-76GC-76GGJWA基因基因-76GC多态性增加胃癌和食管癌易感性多态性增加胃癌和食管癌易感性Tang WY, JTEH, 2007 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA SNPJWA SNP -76 G -76 G C CJWA 应答氧应答氧化应激能力化应激能力 肿瘤危险性肿瘤危险性 JWA基因的基因的SN

45、Ps与肿瘤易感性有关与肿瘤易感性有关病例病例/对照对照=1096/814 Combined OR = 1.85 (1.15-2.81)B DC膀胱癌膀胱癌胃癌胃癌食管癌食管癌白血病白血病A JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展JWA和和XRCC1用于预测胃癌患者术后预后用于预测胃癌患者术后预后以及指导个体化治疗以及指导个体化治疗 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展2022-2-24111JWA基因在人胃癌和癌旁组织中的表达基因在人胃癌和癌旁组织中的表达JWAXRCC

46、1 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展2022-2-24112胃癌组织中胃癌组织中JWA和和/或或XRCC1表达与预后关系表达与预后关系 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展2022-2-24113胃癌组织中胃癌组织中JWA或或XRCC1表达对化疗效果的影响表达对化疗效果的影响 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展2022-2-24114配对癌旁组织中配对癌旁组织中JWA/XRCC1表达与预后关系表达与预后关系 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展XRCC1highXRCC

47、1lowN=143,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)XRCC1highXRCC1lowN=188,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)JWAhighJWAlowN=143,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)BothlowBothhighOnehighN=143,p0.001020406080100Cum.Survival(%)0204060

48、80100120Time(months)JWAhighJWAlowN=188,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)BothlowBothhighOnelowN=188,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)TNM I-II 期单纯手术胃癌患者术后生存期单纯手术胃癌患者术后生存 JWA基因结构和功能相互关系研究进展基因结构和功能相互关系研究进展TNM III-IV 期单纯手术胃癌患者术后生存期单纯手术胃癌患者术后生存Bothhigh

49、BothlowOnehighN=423,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)XRCC1highXRCC1lowN=423,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)JWAhighJWAlowN=85,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)BothhighBothlowOnehighN=85,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)XRCC1highXRCC1lowN=85,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months)JWAhighJWAlowN=423,p0.001020406080100Cum.Survival(%)020406080100120Time(months) JWA基因结构和功能相互关系研