针刺足三里对胃粘膜损伤模型穴区活组织间液影响的研究

1、针刺足三里对胃粘膜损伤模型穴区活组织间液影响的研究顾星湖南中医药大学 （410007）E-mail：摘 要：目的：观察针刺足三里对经穴局部体液的影响。方法：采用无水乙醇灌胃的造模方法，复制了胃粘膜损伤兔模型，分别取穴“足三里”、“手三里”、“环跳”、“委中”及非穴点，另设空白平行对照，运用双针灌流、细针吸取方法，观察了经穴局部钙钠氯钾离子及腺苷三磷酸酶、一氧化氮合酶。结果：与非穴点比较，造模前后“足三里”、“环跳”、“委中”局部钙钠氯钾离子变化存在差异；“手三里”差异无统计学意义；ATP酶在造模前后组间含量总体差异无统计学意义;一氧化氮合酶造模前后各组均存在差异。结论：针刺调节钙钠氯钾离子经穴

2、局部的体液平衡，促进局部一氧化氮合成增强，是经穴-脏腑相关效应产生的机理之一。关键词：足三里/针刺; 胃粘膜损伤; 细针吸取; 体液平衡1. 引言近年来由于细胞生物学、分子生物学等边缘学科不断取得进展，使得人们有可能从更为细微的水平来认识机体结构和功能活动发生、调控等变化规律，并为经络实质的研究提供了科学的手段1。穴位作为针刺部位的同时，也是疾病的诊断点和刺激点。故探讨穴位局部的內环境和功能对阐明经络实质有着重要的作用。从现有文献来看，多数倾向于针刺对神经节、大脑皮层、内脏、血液等大范围变化的研究，而对局部的体液平衡研究相比之下为之少。因此探讨针刺局部与脏腑相关的机理亦是一项有待于补充的基础性

3、工作。2. 材料与方法2.1动物来源、分组、造模方法采用新西兰纯种兔60只，体重1.8Kg2.2Kg，月龄3个月4个月，雌雄各半，由湖南中医学院实验动物中心提供(清洁级)，每只分笼圈养。分组：将60只家兔随机分为六组,每组10只：“足三里”组, 简称A组,下同;“手三里”对照组, B组;“环跳”对照组,C组;“委中”对照组,D组;非经非穴组,E组;空 白 组,F组。手、足三里的对照，试图探讨阳明同名经之异同；足三里与环跳、委中的对照，试图观察同一神经节段的足三阳经（阳明、太阳、少阳）之异同。空白组采取耳缘静脉血平行对照。造模方法：AE组禁食40小时后，按体重2.35ml/Kg 计算无水乙醇量灌

4、胃，造成胃粘膜损伤模型。F组禁食40小时后，按2.35ml/Kg蒸馏水灌胃。方法学评价：灌胃 2小时后处死动物，剖腹取胃，将胃在自来水龙头下，用毛笔轻轻刷尽胃粘膜的粘液，置于盛有生理盐水的弯盘中，用镊子展平，在放大镜下，参考即<1mm长度的溃疡或出血点记l分；12mm记2分；23mmGuth法2进行溃疡指数计分，十记3分；34mm记4分；45mm或5mm以上记5分。宽度大于2mm×2。根据导师课 - 1 -十十题组所做的研究工作表明3.4，乙醇灌胃后，未经针刺的模型组损伤指数记分最高，未经造模的空白组损伤指数记分最低，两者间差异有非常显著性意义。表l 无水乙醇灌胃对家兔胃粘膜损

5、伤指数的影响(x±s)组 别 n 胃 粘 膜 损 伤 指 数 （记分法）A 10 20.20±7.28*F 10 7.80±4.59*2. 2穴位定取足三里、手三里、委中参照现代中兽医学大全定位方法5 。四元梯度往复柱塞微型泵;半自动生化光谱仪,DC640型核酸蛋白分析仪;徕卡显微镜,摄像CCD,彩色图像显微分析系统;钙、钠、氯、钾、ATP酶测试盒均购自南京建成生物工程研究所出品。IGF-1原位杂交检测试剂盒购自武汉博士德生物公司。2.4 主要实验过程：采用5.5号一次性使用静脉注射针两支，针孔截面上下排列，用什锦锉修平圆柱面，使两针平面接触无缝。用直径1mm的细

6、铜线扎紧两针管上端，两针则上下并列粘连一体，套上输液管，用灌流液50ml冲洗输液管、针头后，浸泡于75%乙醇中备用。将实验兔四肢悬空固定，用弯剪分别剪去“足三里”等穴区直径3cm范围的兔毛，用75%乙醇擦拭局部皮肤，待干后即可进针。取25mm长的毫针直刺各穴及非穴点0.5cm1.5cm。各组间分别于针刺前1h 、针刺后1h;造模前1h、造模后1h灌流5min,样本于4离心，12000r/min×15min。取上清液保存于-86超低温冰箱，待全部样本收集完成后，按前述各试剂盒“操作步骤”进行检测。实验中各组数据先进行方差齐性检验，在方差齐时采用单因素方差分析，若各总体均数有差别，进行S

7、NK检验，采用SPSS10.0版软件处理。实验结果均以x±s表示。3. 结果3.1 针刺足三里对胃粘膜损伤家兔穴区钙钠氯钾离子的影响- 2 -表2穴区组织灌流液钙离子浓度的比较 (x±s, mmol/L)组 别 n 针刺前 针刺后 造模前 造模后A 10 0.41±0.085 0.42±0.082* 0.42±0.082 0.45±0.158*C 10 0.42±0.112 0.44±0.125* 0.44±0.125 0.47±0.148*D 10 0.28±0.116 0.34&#

8、177;0.136* 0.34±0.136 0.42±0.151*从表2结果提示：针刺前后、造模前后经穴及非穴点的钙离子呈逐步增高趋势。针刺前后、造模后A、C、D组与E组比较有显著性差异（P<0.05）。B、E组在针刺前后、造模前后差异均无统计学意义。说明家兔足三阳经“足三里”、 “环跳”、“委中”穴钙离子浓度在正常生理或病理状态下均高于“手三里”、非穴点，但较空白F组静脉血钙浓度为低。机体内绝大部分以骨盐形式存在于骨和牙中，其余存在于各种软组织中，体液中的钙有三种存在方式：蛋白结合钙，主要与白蛋白结合；可扩散结合钙，如柠檬酸钙、乳酸钙等；游离钙，即钙离子（Ca2+）

9、。本文工作以检测游离钙为主。表3.穴区组织灌流液钠离子浓度的比较 (x±s,mmol/L)组 别 n 针刺前 针刺后 造模前 造模后A 10 31.56±11.77 38.78±11.76* 38.78±11.76 44.55±12.76*C 10 36.32±12.94 36.46±14.57* 36.46±14.57 40.53±17.50*D 10 34.40±11.55 37.44±12.15* 37.44±12.15 39.48±14.40*从表3结果提示

10、：A、C、D组针刺前后、造模前后与E组比较均有显著性差异(P<0.05);B、E组针刺前后、造模前后差异无统计学意义。说明家兔足三阳经“足三里”、 “环跳”、“委中”穴钠离子浓度,在正常生理或病理状态下均高于“手三里”、非穴点，但较F组空白静脉血钠浓度为低。- 3 -表4穴区组织灌流液氯离子浓度的比较 (x±s,mmol/L)组 别 n 针刺前 针刺后 造模前 造模后A 10 24.91±9.00 24.01±10.06 24.01±10.06 29.16±10.55*C 10 25.02±8.24 24.88±9.9

11、4 24.88±9.94 25.50±9.67*D 10 24.65±8.40 24.30±9.78 24.30±9.78 26.95±9.36*从表4结果提示：A、C、D组造模前后与E组比较均有显著性差异(P<0.05);B、E组针刺前后、造模前后差异无统计学意义。说明家兔足三阳经“足三里”、 “环跳”、“委中”穴氯离子浓度在正常生理或病理状态下均高于“手三里”、非穴点，但较F组空白静脉血氯浓度为低。与其钠离子浓度成正相关。表5.穴区局部灌流液钾离子浓度的比较 (x±s,mmol/L)组 别 n 针刺前 针刺后 造模

12、前 造模后A 10 0.72±0.26 0.67±0.25* 0.67±0.25 0.77±0.26*C 10 0.71±0.28 0.68±0.23* 0.68±0.23 0.76±0.26*D 10 0.68±0.24 0.64±0.27* 0.64±0.27 0.69±0.23*从表5结果提示：A、C、D组针刺前后、造模前后与E组比较均有显著性差异(P<0.05);B、E组针刺前后、造模前后差异无统计学意义。说明家兔足三阳经“足三里”、 “环跳”、“委中”穴钾离子

13、浓度在正常生理或病理状态下均高于“手三里”、非穴点，但较F组空白静脉血钾浓度为低。3.2 针刺足三里对胃粘膜损伤家兔穴区ATP酶、NOS的影响表6. 灌流液ATPase浓度的比较 (x±s, µmolPi/107RBC/hour,10-3)组 别 n 针刺前 针刺后 造模前 造模后- 4 -从表6中可以看出，针刺前后、造模前后各组间差异无统计学意义（P>0.05）。ATP酶浓度呈逐步降低的趋势,说明经穴及非穴点能量活动增加，ATP酶为加速合成ATP而大量消耗，导致含量降低。但各组间基本上为等量消耗，故差异无统计学意义。表7 穴区局部灌流液NOS浓度的比较 (x

14、7;s,U/ml)组 别 n 针刺前 针刺后 造模前 造模后A 10 2.86±1.31 1.65±1.41 1.65±1.41 1.14±0.93*B 10 2.41±0.93 2.59±0.98 2.59±0.98 1.98±0.61*C 10 2.29±0.74 1.00±0.95 1.00±0.95 1.29±1.29*D 10 2.08±1.11 1.82±0.98 1.82±0.98 1.74±0.90*从表7中可以看出，造

15、模后各穴区与非穴点差异有显著性意义（P<0.05）。提示模后经穴局部NOS活性呈逐步降低的趋势,说明经穴及非穴点能量活动增加，NOS为加速合成NO而大量消耗，导致含量降低。4. 结论4.1 针刺足三里在胃粘膜损伤家兔病理状况下，经穴局部钙钠氯钾离子浓度在造模前后与非穴点比较均有差异（P<0.05）；针刺可提高局部体液中各离子浓度。4.2 针刺足三里在胃粘膜损伤家兔病理状况下，经穴局部ATP酶、NOS浓度在造模前后与非穴点比较均有差异；针刺可降低局部体液中两种酶类的含量。4.3.足三阳经同一神经节段支配的足三里、环跳、委中三穴，在胃粘膜损伤家兔病理状况下，经穴局部体液平衡调节趋势较为

16、一致，参考文献1蔡宝昌.基因技术在针灸研究中的应用与展望.上海针灸杂志，2002;21(1):442Guth PH,et al.Topical Aspirin Plus Hcl Gastic Lesion in the Rat Gastrogenrology.1979;(76):883严洁，常小荣，刘建华，等.电针足阳明经穴对家兔胃粘膜损伤防御性保护作用的研究,中国针灸，2001;21(6):3503514易受乡，阳仁达，严洁，等.足阳明经逐点动态刺激对大鼠胃粘膜损伤保护作用的实验观察,湖南中医学院学报，1996;16(4):535于船，陈子斌，等.现代中兽医学大全.南宁:广西科技出版社，20

17、00.3.第一版第一次印刷 :3984026 舒仪经，等.细针吸取细胞病理学.北京:人民卫生出版社，2000.5.第一版第一次印刷：687王伯沄，李玉松，黄高升，等.病理学技术.北京:人民卫生出版社，2000.6.第一版第一次印刷 :1288 郑思竞，等.中国医学百科全书·基础医学，上海:上海科技出版社，1998.12.一版一印 :6279陈主初主编，病理生理学，七年制医药教材第一版，北京：人民卫生出版社，2001.8. :9710郭义，等.钙离子是经络活动的关键因素之一.中国中医基础医学杂志，1998;4(7):49-5111费伦，承焕生.经络物质基础及功能特征的实验探索与研究展望

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20、0刘永全,整合素与信号转导,国外医学·免疫分册，2000;23(1):23-2421吴其夏，余应年，卢健，等.新编病理生理学,北京，中国协和医科大学出版社，1999.9.第一版第一印刷:10422李忠仁,关于针灸研究与基因技术的思考.上海针灸杂志，2002;21(1):44The Study about Fluid Balance in Points of Gastric Mucosal Damage Rabbit by Acupuncture at Zusanli (ST36) PointsGu xingHunan University of Traditional Chinese

21、 MsdicineAbstractObjectives: observe the influence of body fluid in points by acupunture at zusanli points, in order to provide experimental basis for researching the modulator of stomach and correlation between meridian and zang-fu。Methods: we replicate rabbit model of gastric mucosal damage induce

22、d by perfusion of ethanol into stomach。They are divided into Zusanli points group, Shousanli points group, Huantiao points group, Weizhong points group, Nun-points group and compared with blank group, to observeNa+、Cl、K+ and ATPase、NOS、red blood cell morphology, gene expression of the changes of Ca2

23、+、grow factor in points, by instilling pure water into points with ambi-needle and using the fine needleNa+、K+、aspiration method。Results: compared with non-points, we certify that the density of Ca2+、Clis different significantly before and after model（P<0.05）; The difference in shousanli points is not significantly (P>0.05)。Through assay of contents in ATPase, we can cert