薄层扫描法测定抗炎灵口服液中连翘苷的含量

1、    薄层扫描法测定抗炎灵口服液中连翘苷的含量        摘要目的:采用双波长薄层扫描法测定抗炎灵口服液中连翘苷含量。方法:连翘苷测定波长S=510 nm,参比波长R=700 nm;展开剂为:环己烷-氯仿-苯-甲醇(5353),显色剂为10%硫酸乙醇液;用反射式锯齿扫描测定。结果:连翘苷的平均回收率为95.2%,RSD为1.2%。结论:该法分离效果好,简便,结果准确,适用于该制剂的质量控制。关键词薄层扫描法,连翘苷,口服液 Content determination o

2、f forsythin inKang Yan Ling oral solution by TLC scannerLuo Jian,Li Xinrong,Zou Jinlei (Guangdong College of Pharmacy,Guangzhou 510220)ABSTRACTOBJECTIVE:To determine the content of forsythin is a new preparation of the Red Cross Hospital,Kang Yan Ling oral solution.METHODS:The sample wavelength S=51

3、0 nm.The reference wavelengths R=700 nm.The mobile phase was cyclohexane-chloroform-benzene-methand(5353).The visualizing agent was 10% H2SO4 alcohol solution.RESULTS:The average recovery was 95.2% with RSD 1.2%.CONCLUSIONS:This method was simple,accurate.It is suitable for the quality control of th

4、e preparation.KEY WORDSTLC,forsythin,oral solution抗炎灵口服液是医院自制的新制剂,其由连翘、金银花、黄芩等六味药材组成,临床用于清热解毒、抗菌消炎、抗病毒等症状,服用方便,效果良好1。中国药典(1995年版)采用高效液相色谱法测定其它连翘制剂中连翘苷含量2,但至今,该制剂仍未有定性鉴别方法和定量化质量标准方法3。本文采用薄层扫描法测定抗炎灵口服液中连翘苷含量4.5,方法简便结果准确,可作为该制剂的质控标准。1仪器与试药1.1仪器薄层扫描(日本岛津CS-910型);定量点样毛细管(美国DUCMMOND公司出品);薄层自动铺板器(PBQ-型,重庆南

5、岸新力电器厂)。1.2试药硅胶G(青岛海洋化工厂,薄层用,1040 m);连翘苷标准品(中国药品生物制品检定所);抗炎灵口服液(广州市红十字会医院);聚酰胺粉(广州化学试剂厂,1430目);中性氧化铝(上海五四化学试剂厂,层析用100200目);其它所用试剂均为AR级。2方法与结果2.1薄层板的制备称取适量硅胶G,与0.3% CMC-Na溶液以12.2混合,研匀,铺成0.4 mm厚的薄层板,室温晾干,105 活化1h,置干燥器中备用。展开剂为环己烷-氯仿-苯-甲醇(5353);显色剂为10%硫酸乙醇液。试样经薄层层析,喷显色剂后,室温下吹干,置105 烘约57min,至出现明显紫褐色斑点即可。

6、2.2薄层扫描条件方式:反射法双波长锯齿扫描;测定波长S=510 mm,参比波长R=700 nm;扫描速度:20 mm.min-1;灵敏度x2;谱见1。 1连翘苷谱2.3标准曲线绘制精密称取连翘苷标准品2.21 mg,用乙醇溶解并定容至2.0 ml,即制成浓度为1.11 mg.ml-1的标准溶液。用定量点样毛细管分别吸取连翘苷标准液1,2,4,6,8,12,16 l点于同一硅胶G板上,按上述2.1项及2.2项方法展开,扫描测定,以斑点峰面积积分值为纵座标,点样量为横座标,制得一条不通过原点的标准曲线,连翘苷在1.1117.76 g之间呈良好线性关系,回归方程为Y=0.147 8 X+1.460

7、 3,r=0.991 0。2.4精密度测试分别吸取连翘苷标准液10 l,点于同一薄层板上,共5点,依上述2.1项及2.2项方法展开,扫描测定,得RSD=1.02%(n=5)。2.5稳定性测试吸取连翘苷标准液10 l,点于薄层板上,按2.1项及2.2项方法展开,显色,每间隔一定时间扫描一次,结果证明在4 h内稳定,RSD=0.10%(n=12)。2.6样品含量测定准确量取50 ml抗炎灵口服液,用水饱和的正丁醇50 ml提取3次,合并上层液,用50 ml水洗2次,水浴蒸干得残渣,加少量乙醇溶解,加至聚酰胺(1430目)吸附柱上用约300 ml水洗至无色,再用约140 ml的85%乙醇洗脱,收集洗

8、脱液,水浴蒸干,残渣用少量50%乙醇溶解,再加至中性氧化铝(100200目)柱上,50%乙醇洗脱至无色,合并洗脱液,水浴蒸干,乙醇溶解并定容至10 ml,制成样品溶液。用定量点样毛细管分别吸取供试品液15 l,标准液1,3 l,点于硅胶G板上,按上述薄层条件展开,显色,扫描测定,依据外标二点法公式计算,得抗炎灵口服液中连翘苷含量,结果见表1。表 1样品含量测定结果(n=5)编号含量/g.ml-1sRSD/%123.9323.620.582.46222.71323.96423.65523.862.7回收率试验精密量取抗炎灵口服液50 ml,准确加入连翘苷标准品5.10 mg,按2.6项方法制备测

9、定溶液,再按上述条件展开,显色,扫描测定,结果见表2(n=5)。 表 2连翘苷回收率测定结果(n=5)编号样品原含量加标量实测值回收率RSDmgmgmg%11.205.106.0695.3095.181.2221.145.106.0496.0831.205.105.9893.7241.185.105.9994.3151.195.106.1196.473讨论3.1展开剂和显色剂实验曾选用氯仿-甲醇(91)或(201)4作展开剂,但效果均不好,最后改用环己烷-氯仿-苯-甲醇(5353),分离效果好,斑点清晰。实验曾用过5% FeCl3乙醇盐酸酸化液作显色剂,但由于底色为黄色,斑点为黑色,对薄层扫描

10、背景影响大,使得扫描出的峰型不理想,故采用10% H2SO4乙醇液作显色剂,结果斑点为紫褐色,背景为白色,扫描效果好,灵敏度高。3.2提取方法本实验用正丁醇提取,杂质少,效率高。用聚酰胺、氧化铝过柱,可除去树胶、鞣质、糖类,得较纯的成分。但由于提取过程较复杂,故连翘苷有所损失,使得提取回收率较低。3.3显色应特别注意显色均匀度及显色后105 烘烤时间的控制,一般约57 min为宜,如烘烤得太久,会使背景变黑,影响扫描。3.4展开前注意事项展开前应饱和层析缸约30 min,预饱和层析板约10 min,这样才能减少边缘效应,使得展开的斑点圆整,展开剂应新鲜配制,这样可保持展开剂的比例不变。 作者单位：罗健邹金蕾(广东药学院广州510224)黎新荣(广州市红十字会医院)参考文献1梁文藻.连翘成分分析连翘甙和连翘甙脂素的分离鉴定和测定.药物分析杂志,1985,5(1):582中国药典.一部(1995版).广州:广东科