虫草素检测含量的影响因素研究进展_图文

1、 虫草素检测含量的影响因素研究进展作者:郭宇森, 王雅玲, 赵轶男, 马堃, GUO Yu-sen, WANG Ya-ling, ZHAO Yi-nan, MA Kun作者单位:大连民族学院生命科学学院,辽宁,大连,116600刊名: 广西农业生物科学英文刊名:JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE年,卷(期:2008,27(z1引用次数:0次参考文献(14条1.刘东泽.陈伟.高新华.代光辉.吴畏虫草菌素(3'-脱氧腺苷研究进展(综述期刊论文-上海农业学报 2004(22.凌建亚.孙迎节.吕鹏.张长铠虫草属真菌中虫草

2、素的超声波提取及其毛细管电泳测定期刊论文-菌物系统2002(33.孙诗清.李多伟.任静.王义潮RP-HPLC测定不同产地人工蛹虫草中虫草素的含量期刊论文-西北药学杂志2005(64.申小兵.黄汉新梯度洗脱RP-HPLC法同时测定蛹虫草子实体中腺苷和虫草素的含量期刊论文-海峡药学 2005(45.毛先兵.涂永勤采用氨基酸补料分批培养策略促进蛹虫草生产虫草素的研究 2005(16.黄兰芳.郭方遒.梁逸曾.陈本美HPLC-ESI-MS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量期刊论文-中国中药杂志 2004(87.徐健君.翟海云.陈缵光.林伟丰.蔡沛祥.莫金垣毛细管电泳高频电导法测定虫草中的有效成份期

3、刊论文-化学研究与应用 2005(58.夏敏.温鲁.徐继明HPLC测定虫草培养基中腺苷和虫草素的含量期刊论文-华西药学杂志 2006(59.陈千良.甘志杰.孙文基HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素期刊论文-西北大学学报(自然科学版 2003(510.张嘉.李多伟.任静.张小燕.郑婷婷正交试验提取虫草素的工艺研究期刊论文-中国新医药 2004(211.陈伟.吴畏.高新华.唐乐珊.沈明.张红霞采用柱层析分离与富集虫草素研究期刊论文-上海农业学报 2006(412.雷宁.杜树山.倪雪梅.张文生.郭恩若.李勤RP-HPLC测定天然虫草与人工虫草中核苷类成分的含量期刊论文-中国药学杂志 2006(1

4、213.夏敏反相高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量期刊论文-淮阴工学院学报 2004(314.孙迎节.凌建亚.张华.吕鹏.孙彩云.张长铠虫草中两种核苷类活性成分的毛细管电泳研究期刊论文-山东大学学报(理学版 2002(4相似文献(10条1.期刊论文祁波蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺的研究-科技信息2009(20蛹虫草(cordyceps militaris在我国本草文献中已有记载.近年来的研究更进一步证实了蛹虫草与冬虫夏草C.sinensis出有相同或相似的化学成分和药理作用,是可供开发的新产品,并可以之作为冬虫夏草的替代品.现代科学论证蜗虫草不仅具有特殊的营养价值,而且有明显的药用价

5、值.其中尤以虫草素、虫草多糖等多种生物活性物质的药用价值最为显著.虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质,对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用.在DNA转录mRNA过程中使mRNA成熟障碍,抑制癌细胞的生长.并有降血糖的作用.虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力.因此分离纯化虫草素和虫草多糖,对此类抗癌药物的开发具有很大社会价值和意义.本次研究以蛹虫草粉末为原料,研究了蛹虫草中虫草素和虫草多糖的综合提取工艺技术,探讨了采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和虫草多糖

6、的最优提取办法.并通过用正交试验方法研究考察了水热回流法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素和虫草多糖综合提取效率的影响.建立了从蛹虫草中综合提取虫草素和虫草多糖的最佳工艺.采用正交试验对蛹虫草中虫草素和虫草多糖综合提取工艺进行了研究,为进一步开发利用提供有价值的参考数据,也将会对今后产品开发研究具有重要的意义.科学2009,37(8目的优化蛹虫草大米培养残基中虫草素的提取方法.方法以蛹虫草大米培养残基为原料,根据虫草素的理化性质,采用不同提取溶剂、温度、时间和pH值,进行单因素试验设计,利用HPLC技术检测虫草素.结果结果表明,蛹虫草大米培养残基中虫草素含量为2.0112.

7、185 g/kg.不同水浴时间和温度条件的提取值为1.3161.968 g/kg.培养基残基中虫草素含量与子实体的比较系数为99.1%110.9%.不同pH值提取液提取虫草素分别提高究为蛹虫草固体培养基的深加工和再利用以及开发新的虫草素资源提供理论依据和技术指导.3.学位论文许晓炜蛹虫草固体培养基中虫草多糖、虫草素提取分离工艺研究2006固体培养方式目前已被广泛用于蛹虫草的培养,蛹虫草固体培养基中富含菌丝,但因没有成熟的工艺对其中的有效成份进行提取分离,目前在培养结束后固体培养基都被作为废物弃掉,不仅造成资源的浪费,对环境也造成一定的影响.随着蛹虫草培养产业规模的不断扩大,对蛹虫草固体培养基如

8、何加工、利用已成为一个迫切需要解决的问题. 本文根据蛹虫草固体培养基有效成份的理化性质,以蛹虫草固体培养基为原料,对影响有效成份提取的工艺条件进行了研究,通过对提取温度、提取次数、提取时间、料液比应用正交实验设计,最终确定用水80提取三次,120min/次,料液比为1:15的工艺条件为虫草多糖最佳提取工艺条件,并分别采用Sevage法、改良的Sevage法和澄清剂法去除虫草多糖粗品中蛋白,以及DEAE纤维素和葡聚糖凝胶柱层析对虫草多糖进行分离纯化.通过对溶剂浓度、提取次数、提取时间、料液比进行正交实验设计,最终确定用75乙醇超声波提取三次,40min/次,料液比为1:20的工艺条件为虫草素最佳

9、提取工艺条件,并分别采用阴、阳离子交换树脂柱层析和硅胶柱层析对虫草素进行分离纯化.通过采用苯酚一硫酸法和HPLC对提取出的虫草多糖和虫草素进行含量测定,确定了不同纯化方法之间的差异. 对虫草多糖和虫草素提取的工艺条件和路线进行分析,结合生产实际,在小试确定的提取、纯化方法基础上进行以蛹虫草固体培养基为原料提取虫草多糖和虫草素的放大实验,确定了综合提取的工艺条件和路线,即采用热水回流提取法进行初提,用醇沉法分离虫草多糖并以Sevage法除蛋白;以乙醚萃取,用阴离子交换树脂层析法分离、纯化虫草素的工艺路线.经测定,除蛋白后的虫草多糖的纯度均大于50,虫草素精品的纯度均大于97. 本课题来源于生产实

10、际,研究结论为相关企业对蛹虫草固体培养基的加工、利用提供了技术依据.本文用采用不同的碳氮源(玉米淀粉、大米粉、奶粉、豆饼粉组合的培养基,液体发酵蛹虫草,以及不同的氮源固体栽培蛹虫草,采用高效液相色谱法检测菌丝体、子实体、以及不同氮源固体栽培后的培养基残基中腺苷和虫草素的含量。结果表明,在所设定的色谱条件下,腺苷和虫草素可以得到很好的分离,R>1.5,并且在一定浓度范围内具有良好的线性关系;蛹虫草人工固、液体发酵菌丝体以及子实体和残基中都含有含有腺苷和虫草素,且虫草素含量高于腺苷的含量。液体发酵时,玉米淀粉和奶粉组合的培养基发酵蛹虫草所得虫草素和腺苷最高,含量分别可以达到3.229mg&#

11、183;g<'-1>和1.902mg·g-1。在所有组合中用玉米淀粉和奶粉的培养基发酵培养蛹虫草,可以获得最大的生物量,其转化率分高达75.73%。固体栽培时,蛋白胨和麸皮是很理想的氮源,子实体中腺苷和虫草素的含量分别高达1.593mg·g<'-1>和9.171mg·g<'-1>,1.980mg·g<'-1>和8.932mg·g<'-1>。5.期刊论文温鲁.夏敏.葛宜和.刘金刚.翁梁.喻涟淮.王帅.沈芳.蒋红.WEN Lu.XIA Min.GE

12、Yi-he.LIU Jin-gang.WENG Liang.YU Lian-huai.WANG Shuai.SHEN Fang.JIANG Hong以虫草素和腺苷含量为指标优化蛹虫草人工栽培-江苏农业学报2005,21(4为提高人工栽培蛹虫草中主要活性成分的含量,以虫草素和腺苷含量为检测指标进行蛹虫草优化栽培研究,在采用Cm-1菌株、以20%豆粕为氮源、水料比为1.4的条件下,可获得子实体产量为每瓶42.2 g、子实体中虫草素含量为 4.46 mg·g-1的栽培效果,虫草素含量超过了以蚕蛹为寄主的蛹虫草(2.83 mg·g-1,表明植物蛋白完全可以用作栽培蛹虫草的氮源,同时

13、证实采收子实体后的培养基中仍含有大量虫草素,可作为提取虫草素的原料.蛹虫草(Cordyceps militaris是我国传统的名贵药用蕈菌(medicinal mushroom,现代医学研究表明虫草素(cordycepin是其重要的生物活性成分,大规模深层培养蛹虫草生产虫草素具有重要的应用价值.本论文首先通过摇瓶培养,优化了深层培养蛹虫草生产虫草素的碳源和氮源,实验结果表明,葡萄糖和蛋白胨最有利于虫草素合成.进一步通过中心组合设计和响应面分析,优化了碳氮比.结果在优化的培养基(葡萄糖和蛋白胨浓度分别为42.0 g/L和15.8 g/L中,虫草素产量达到345.4±8.5 mg/L,比

14、对照提高了35%.本论文详细研究了氧供应对蛹虫草细胞生长和虫草素生产的影响,揭示氧供应是蛹虫草生产虫草素培养过程的一个重要因子.本研究所获得的结论有利于大规模培养蛹虫草高效率生产虫草素,所提出的NH<,4><'+>补加策略、低培养液pH环境的重要性以及两阶段DO控制策略可能对其它蕈菌的深层培养具有借鉴作用.7.期刊论文韦会平.叶小莉.张华英.李学刚.钟运俊.WEI Hui-ping.YE Xiao-li.ZHANG Hua-ying.LI Xue-gang.ZHONG Yun-jun用蛹虫草固体发酵法高效生产虫草素的研究-中国中药杂志2008,33(19目的:研

15、究并建立用蛹虫草固体发酵方式高效生产虫草素的最佳方法.方法:通过对不同菌株在固体发酵过程中各生长期的虫草素含量变化进行跟踪测定以及正交旋转组合设计、正交试验设计等方法埘影响虫草素产量和含量的各影响因子(包括菌种、生长期、培养基配方和环境条件等进行系统优化.结果:JF-1是虫草素生产的最佳菌株,现蕾期是收获提取虫草素的最佳时期;最佳的培养基配方为水料比1.1:1(mL·g-1,营养水中酵母膏、蛋白胨、葡萄糖的用量分别为22.6,6.0,25.4 g·L-1,营养水pH 6.6;最佳的环境条件为:光照强度4 400 lx,每日光照时间18 h,温度1822.结论:用以上方法固体

16、发酵生产虫草素,经过约13 d的培养,培养基中虫草素达到0.60%,比传统液体发酵方法的最高产量高近2倍,并且培养时间缩短2 d.8.期刊论文潘苏华.董李娜.PAN Su-hua.Dong Li-na蛹虫草胶囊虫草素定量分析-中国现代药物应用2007,1(11 目的 制定蛹虫草胶囊质量标准,建立高效液相色谱法进行虫草素定量分析.方法 采用高效液相色谱法测定蛹虫草胶囊中虫草素的含量.结果 蛹虫草胶囊虫草素含量为10.51 mg/g,平均加样回收率为100.43%,RSD为2.399%,精密度RSD为0.300%,重现性RSD为1.197%,稳定性RSD为0.637%.结论 可见高效液相色谱法测定

17、虫草素含量结果准确、方法科学可行.9.期刊论文陈千良.甘志杰.孙文基HPLC法测定人工蛹虫草子实体中虫草素-西北大学学报(自然科学版2003,33(5为测定人工蛹虫草子实体及培养基中的虫草素,采用高效液相色谱法(HPLC,以十八烷基硅烷键合相硅胶为固定相;磷酸盐缓冲溶液(pH6.5-甲醇(85:15为流动相;检测波长260 nm;其流速为1 mL/min.结果是人工蛹虫草子实体中虫草素含量在1.11%1.44%之间,平均值为1.29%,RSD为9.6%.天然冬虫夏草中仅测得痕量虫草素.结果表明:不同的人工蛹虫草样品中虫草素含量有一定差异,且高于天然冬虫夏草.本研究课题深入而系统地研究了蛹虫草固

18、体栽培技术和蛹虫草栽培下脚料中虫草多糖和虫草素的提取纯化工艺、检测方法、结构鉴定以及虫草多糖和虫草素综合提取的工艺路线,得到了满意的结果。 1、蛹虫草固体栽培需从优良菌种的选择、培养料的科学配制以及栽培的精心管理等几个环节加以注意,方可获得优质、高产。 2、蛹虫草栽培下脚料中虫草多糖的提取,热水提取法优于超声波水提法;虫草素的提取,超声波酒精提取法略优于热水提取法、酒精热回流提取法和超声波水提取法。 3、通过对影响虫草多糖和虫草素提取率的单因素进行分析,并通过四因素三水平的正交实验分析,最终确定用水80热回流提取3次,90min/次,料液比为1:20的工艺条件为提取虫草多糖的最佳工艺条件;确定用75%乙醇超声波提取三次,20min/次,料液比为1:10的工艺条件为提取虫草素的最佳工艺条件。 4、对影响虫草多糖与虫草素提取的工艺条件进行分析并进行综合利用提取放大试验得到综合提取工艺路线。结论为从蛹虫草栽培下脚料中综合提取虫草多糖和虫草素时应用20倍量的水,80热回流提取3次,每次2小时,提取液经醇沉法将虫草多糖和虫草素分开,采用Sevage法除去虫草多糖中的蛋白获得虫草多糖粗品;将醇沉上清液加入1%活性炭于60