HPLC法测定不同采收期及不同部位桔梗中桔梗皂苷D含量

1、吉林农业大学学报 2001,23(1 :5860,64Journal of Jili n A gricult ural U niversityHPL C 法测定不同采收期及不同 部位桔梗中桔梗皂苷 D 含量 许传莲 1 郑毅男 1 杨腊虎 2 刘墨祥 1 徐保军 3 (11吉林农业大学中药材学院 长春 130118; 21中国药品生物制品检定所 北京 100050; 31大连大学中药系 大连 116622摘 要 :, D 以 及不同部位中桔梗皂苷 D :9、 D ; 不同部位中以 , , 件 :分 析 柱 为 Hypersil NH 2(414mm ×20062, 检测波长 210n

2、m , 流速 018mL/min , 进样量在 011119g 范围 内 , , r =019998, 回收率 96186%。关键词 :桔梗 ; 桔梗皂苷 D ; 高效液相色谱法中图分类号 :S567. 2; R284. 1 文献标识码 :A 文章编号 :100025684(2001 0120058203HPL C Determination of Platycodin D in Different Parts ofGrandiflorum Harvested at Different TimeXU Chuan 2lian 1, ZHEN G Y i 2nan 1, YAN G La 2hu

3、2, L IU Mo 2xiang 1, XU Bao 2jun 3 (1. College of Chi nese Medici nal M aterial , Jili n A gricult ural U niversity , Changchun 130118, Chi na ; 2. N ational Instit ute f or the Cont rol of Pharm aceutical and B iological Products , Bei 2 j ng 100050, Chi na ; 3. Depart ment of Chi nese Medici ne ,

4、Dalian U niversity , Dalian 116622, Chi na Abstract :In order to utilize the resource of Grandiflorum reasonably and evaluate the quality of Grandiflorum , the content of platycodin D in different parts of Grandiflorum harvested in spring and autumn were determined by HPLC. The results showed that t

5、he content of platycodin D in Grandiflorum harvested in September and October was higher than that harvested in other times. Of various plant parts , the highest content was found in root , little was found in stems and leaves and platycodin D was not detected in flower , fruit and seeds. The HPLC s

6、ystem used a Hypersil column , a mixture of methanol isopropanol (38 62 as the mobile phase. UV absorption was monitored at 210nm. The flow rate was 018mL/min. The assay displayed a good linearity over the concentration range of 0. 11. 9g and the recovery rate was 96. 86%.Key words :Platycodon ; pla

7、tycodin D ; HPLC基金项目 :国家 “ 九五” 攻关计划资助项目 (962903202201作者简介 :许传莲 , 女 ,1966年出生 , 博士研究生 , 讲师 , 研究方向 :天然产物化学收稿日期 :20002072 30 桔梗 (Platycodon grandif lorum A 1DC 属桔 梗科植物桔梗的干燥根 , 是中医传统的祛痰镇咳 药 1。 桔 梗 中 含 有 多 种 皂 苷 , 主 要 为 三 萜 皂 苷 2,3, 药理实验表明桔梗皂苷 D 为主要的镇咳 活性成分 4。 文献记载桔梗春秋两季采挖 , 以秋 季采挖者质量较佳 5, 桔梗根部入药 。为了寻找 和合

8、理开发利用植物资源 , 在前文的基础上 6, 本文用 HPLC 法 , 以 N H 2柱为分析柱 , 探索了桔 梗中桔梗皂苷 D 的分离及测定条件 , 并测定了不 同采收期及不同部位样品中桔梗皂苷 D 的含量 , 为桔梗的栽培生产 、 质量评价和合理开发利用资 源提供依据 。1 材料与方法111 仪器与试药高效 产 P200, G J , -95色谱工作站 。甲醇为 色谱纯 , 异丙醇为二次蒸馏的分析纯 , 其它试剂为 分析纯 , 桔梗皂苷 D 对照品由本院徐保军硕士提 供 ,HPLC 法检测其纯度高于 9910%。桔梗样品 采自吉林农业大学药植园 , 由吉林农业大学樊绍 钵教授鉴定 。 11

9、2 色谱条件色谱柱 :Hypersil N H 2(414mm ×200mm ; 流动相 :甲醇 异丙醇 =38 62, 流速 018mL/min ; 检测波长 210nm ; 柱温 :室温 。 113 对照品溶液制备精密称定桔梗皂苷 D 对照品 210mg , 置于 10mL 容量瓶中 , 用流动相溶解并定容至刻度 , 过0145m 微孔滤膜备用 。 114 样品液制备准确称取不同采收期及不同部位样品粉末各 51009g , 置具塞锥形瓶中 , 加入 70%甲醇 150mL 浸泡 24h , 超声处理 15min , 重复 4次 , 离心过滤 , 滤液减压回收得浸膏 , 加 50m

10、L 丙酮沉淀 , 过滤 后滤液回收得浸膏 , 加入 30mL 水转移至分液漏 斗 , 加 50mL 乙醚萃取 2次 , 弃去醚层 , 水层加 30mL 水饱合正丁醇萃取 4次 , 合并正丁醇层减 压回收得浸膏 , 最后用 150mL 乙醚沉淀去杂质 , 得沉 淀 物 干 燥 后 , 分 别 精 密 称 取 不 同 采 收 期 (4月 、 5月 、 9月 、 10月 、 11月 417mg , 不 41, 花 、 果实各 1。211 线性关系考察准确 吸 取 对 照 品 溶 液 分 别 配 制 成 0101, 0104,0108,0112,0116mg/mL , 按上述条件进样 , 每次进样量为

11、 10L , 见色谱图 1, 以进样量微克 数为横坐标 , 峰面积积分值为纵坐标 , 绘制标准曲 线 。回 归 方 程 及 线 性 范 围 分 别 为 :Y =-268171+154271 04X , r =019998, 桔梗皂苷 D 在 011119g 呈良好线性关系 。 212 样品测定分别吸取 10L 样品进样 , 见色谱图 2, 含量 测定结果见表 1。结果表明 :秋季 9月份采挖的 桔梗中桔梗皂苷 D 的含量最高 ; 桔梗皂苷 D 主要 存在于根中 , 根皮 、 茎 、 叶 、 花及果实中未检测到 。图 1 桔梗皂苷 D 色谱图 图 2 样品色谱图 Fig. 1. HPLC chr

12、omatogram of platycodin D Fig. 2. HPLC chromatogram of sample extracts95第 23卷 第 1期 许传莲等 :HPLC 法测定不同采收期及不同部位桔梗中桔梗皂苷 D 含量表 1 不同采收期及不同部位桔梗皂苷 D 含量 Table 11Content of platycodin D in different plant parts and harvested at different time样 品 Sample 含量 /%Content RSD/%采收期 Harvesting time 9月 01641163 10月 0157

13、2101 11月 01301178 4月 01341188 5月 01551165植株部位 Plant parts根皮 茎 叶 花、 果实 注 :“ ” 未检测到 Note :not21310L , 连 续进样 5次 D 的峰面积 , 计算峰 面积平均值及相对标准偏差 RSD =415%, 结果 表明仪器精密度良好 。称取 9月份样品 5份各 2g , 按样品制备项下 方法提取 , 测定桔梗皂苷 D 的峰面积 , 计算峰面 积平均值及相对标准偏差 RSD =116%, 结果表 明该方法可行 。214 重现性试验取同一供试样品 , 按 113项下方法进行样品 溶液制备 , 按 112项下条件测定

14、 , 重复 5次 , 桔梗 皂苷 D 含量的 RSD =211%, 表明方法重现性好 。 215 提取条件的选择称取样品 5g , 分别以甲醇 、 70%甲醇 、 50%甲 醇为溶媒 。 分别加上述溶媒 30mL , 提取 5次 , 采 用 3种方法 (a. 每次 80 水浴回流提取 1h ; b 1每次 振 摇 提 取 15min ; c 1每 次 波 提 取 15。 , 丙 , , , :以每 mL 70%甲醇的超声波提取液中桔梗皂苷 D 含量最高 。216 回收率试验采取加样回收方法 , 取已知含量的桔梗样品 , 添加对照品溶液 , 按上述方法进行样品溶液制备 测定 , 桔梗皂苷 D 的

15、平均回收率为 96186%, 结果 见表 2。表 2 桔梗皂苷 D 回收率 (n =4 Table 21Recovery of platycodin D (n =4样品编号 Number of samples桔梗皂苷 D加入量 /mgPlatycodin D added测得量 /mgAmount detected回收率 /%Recovery平均回收率 /%Average recovery RSD/%3 讨 论1 笔者比较了中国药典 (1995年版 中的桔 梗皂苷提取方法与本实验所采用的样品制备方 法 , 结果表明 :未经丙酮沉淀及乙醚去杂处理 , 对 HPLC 分析产生了很大干扰 , 未名杂质

16、峰多 , 无法 与桔梗皂苷 D 峰达到基线分离 。本文所采用的 方法得到的桔 梗 皂 苷 杂 质 少 , 干 扰 小 , 有 利 于 HPLC 分析 。2 对不同采收期桔梗皂苷 D 的含量进行了 测定 , 结果表明 :以 9月 、 10月样品中桔梗皂苷 D 含量较高 , 进入秋冬季 11月 , 有效成分急剧衰减 , 春季 4月含量也较低 , 进入 5月开始营养生长 , 含 量又开始上升 。这与文献记载 “桔梗春秋两季采 挖 , 以秋季采挖者质量较佳” 相符 , 并且将秋季最 佳合理采收期定为 910月份 。 对不同部位的桔 梗皂苷 D 含量测定结果表明 :桔梗根中含量最 高 , 根皮 、 茎

17、、 叶 、 花及果实中未检测到 , 因此有研 究将桔梗地上部分作为新药源的结论尚需进一步 探索研究 。 (下转第 64页 06 吉 林 农 业 大 学 学 报 2001年3 讨 论1 本实验曾以 75%95%的甲醇溶液作为 流动相进行了测试 。结果表明 :样品在此条件下 分离度较差 , 改变甲醇与水的配比只能使整体皂 苷出峰时间改变 , 很难使皂苷之间的峰得到较好 地分离 , 而且出现的峰型小 , 测试的灵敏度低 。 在 选择流动相乙腈与水配比为 35 65、 45 55、 50 50、 48 52条件下测试 , 结果以乙腈与水的比例为 48 52较合适 。 不仅 Rg 3、 Rh 2与其它皂

18、苷类成分 达到基线分离 , 而且使 Rh 2保留时间不延后 , 保 证较好的柱效 , 出现的峰型好 , 灵敏度高 。2 在供试品溶液的制备过程中 , 针对本实验 的特殊材料 , 采用直接上大孔吸附树脂柱的方法 , 避免以往前处理需经脱脂 、 除糖, 察用 75。经反应检验 , , 若 改用 95%或无水乙醇洗脱时 , 可把脂溶性成分洗 脱下来 , 使样品溶液混浊 , 影响测试 。 结果以先用 50%甲醇洗脱 , 再改用纯甲醇洗脱为最佳方法 。 这样可使不同极性的皂苷成分全部洗脱下来 , 回 收率高 , 且溶剂用量少 。残渣中因极性大的皂苷 已被滤出 , 可直接用甲醇洗脱 , 方法简便易行 。参

19、 考 文 献1 王铁生 , 王化民等 1西洋参红果茶加工技术研究 J1人 参研究 ,1999,11(2 :40412 王本祥主编 1人参研究进展 M 1天津 :天津科学技术出 版社 ,199118386,1421503 金泽秀子等 1HPLC 法测定人参制剂中人参皂苷的含量 J1生药学 (日 ,1989,43(2 :121,1989(,1995,115:62656 朱萱萱等 1反相 HPLC 法测定药用人参中多种人参皂苷 的含量 J1中国生化药物杂志 ,1998,19(1 :2830 7 李向高 1红参炮制加工中的皂苷水解反应及其产物的研 究 J1吉林农业大学学报 ,2000,22(2 :19(上接第 60页 3 比较了不同系统和比例的流动相 , 如甲 醇 水 , 甲醇 0102moL/L 磷酸二氢钠 , 乙腈 水 , 乙腈 0102moL/L 磷酸二氢钠及甲醇 异丙醇等 不同比例系统 , 结果以甲醇 异丙醇 (38 62 分离 效果最好 。 在甲醇 水系统中 , 加入 2060mL 异丙醇对桔梗皂苷 D 色谱行为影响很大 , 样品峰 与杂质峰分离很好 , 适于桔梗多品种多批次的质 量控制 。参 考 文 献1 江苏新医学院编 1中药大辞典 (下册 M .上海 :科学技 术出版社 ,1986117752 徐保军 1桔梗化学成分及生物活性研究 D :硕士论