丹参营养器官中脂溶性成分的动态变化规律

1、丹参营养器官中脂溶性成分的动态变化规律         作者：秦海燕，索志荣，刘文哲 【摘要】 目的测定丹参营养器官中丹参酮I和丹参酮A的含量，并揭示丹参生长过程中，丹参酮I和丹参酮A的动态变化规律。方法采用反相高效液相色谱法，以Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）为色谱柱；甲醇-0.4%磷酸为流动相，             

2、0;               作者：秦海燕，索志荣，刘文哲【摘要】  目的测定丹参营养器官中丹参酮I和丹参酮A的含量，并揭示丹参生长过程中，丹参酮I和丹参酮A的动态变化规律。方法采用反相高效液相色谱法，以Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）为色谱柱；甲醇-0.4%磷酸为流动相，梯度洗脱，流速为1.0 ml/min；二极管阵列检测器：检测波长分别为246, 270 nm；柱温为30。结果丹参叶

3、和茎中均未检出丹参酮I和丹参酮A，根中丹参酮A和丹参酮I的含量变化呈“单峰”曲线，丹参酮A的含量在7月份最高，为2.94%，丹参酮I含量在5月份最高，为0.78%。结论4月至7月是丹参根中丹参酮积累的关键时期。 【关键词】  丹参； 营养器官； 丹参酮； 高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo determine the content of TanshinoneA and tanshinone in different vegetative organs of Salvia miltiorrhiza Bge and discover the accumulation

4、of TanshinoneA and tanshinone within a whole growth period. MethodsHigh performance liquid chromatography was used. The separation was performed on Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）column by gradient elution . The mobile phase consisted of CH3OH - 4% aqueous phosphoric acid. The flow rate

5、 was 1.0 ml/min. The detection was done at 246, 270 nm and column temperature was 30 .ResultsThere were no tanshinone in the stem and the leaf. TanshinoneA and tanshinoneroughly assumed "the single peak" in the root within a growth period.The highest content of tanshinoneA was in July, up

6、to 2.94% and tanshinonewas in May, up to 0.78%.ConclusionApril to July is the critical period of tanshinone accumulation in Danshen root.Key words：Salvia miltiorrhiza Bge;   Vegetative organs;   Tanshinone;   High performance liquid chromatography    丹参（S

7、alvia Miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，传统以根入药。其活性成分可分为脂溶性的二萜醌类和水溶性的酚酸类成分，邻醌型的丹参酮、丹参酮A在丹参中的量较高,有较强的生理活性,是丹参主要有效成分之一1，具有扩张血管,降低血液黏度,抗血小板聚集,改善微循环,保护心肌细胞以及抗菌消炎、抗癌等作用2。目前，关于丹参药用成分的药理、提取工艺、检测方法的研究较多，但有关丹参药用成分在整个营养器官动态变化的研究很少。本文采用高效液相色谱二极管阵列检测器（HPLCDAD），研究了丹参脂溶性成分丹参酮I和丹参酮A在根中的积累规律，旨在为丹参的种植、管理、采

8、收、品质鉴定及控制丹参药材质量提供理论依据。1 仪器与试药    HP1100高效液相色谱仪（美国Aglient公司），包括四元梯度泵（G1311A）， 二极管阵列检测器(G1315A)；DL-180型超声清洗器(浙江省象山县石浦天电子仪器厂)；FZ102微型植物试样粉碎机（河北省黄骅市齐家务振兴电器厂）；Milli - QG超纯水制备仪（美国Millipore公司）。    甲醇为色谱纯，水为超纯水，磷酸为分析纯。丹参酮I和丹参酮A对照品纯度均大于99.5%，购自中国药品生物制品检定所。    丹参（S

9、alvia Miltiorrhiza Bunge）实验材料采于西北大学苗圃内的栽培植株（2006年3月自商洛天士力丹参药材基地移栽）。于2007-04 12期间每月20日以随机抽样的方式选择丹参植株6株，摘取各样品株的根、叶片和茎，分别整理，60的恒温箱内烘干至恒重，研细，过6号筛后备用。2 方法2.1 对照品溶液的配制分别精密称取对照品丹参酮I 1.1 mg和丹参酮A2.2 mg，分别置10 ml量瓶中，用二氯甲烷甲醇（V/V = 1/9）混合溶剂溶解并定容，摇匀，得丹参酮I 浓度为0.11 mg·ml-1和丹参酮A浓度为0.22 mg·ml-1的单一成分对照品溶液，作为

10、储备液，其它不同浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。2.2 供试品溶液的制备精密称量丹参根、茎、叶粉末约120 mg，置25 ml烧瓶中，准确加入二氯甲烷甲醇（V/V = 1/9）混合溶剂10 ml，称重，超声提取30 min，冷却至室温，再称重，用提取液补足减失的质量，摇匀，取适量用0.45 m微孔滤膜滤过，即得丹参脂溶性成分供试品溶液。2.3 色谱条件美国Zorbax SB - C18（150 mm × 4.6 mm, 5.0 m）色谱柱；流动相为甲醇 0.4%磷酸，梯度洗脱，其时间程序为01013 min，甲醇体积分数相应为72%87%72%，流速1.0 ml·min-

11、1；二极管阵列检测器：检测波长分别为246, 270 nm；柱温30 。丹参酮I和丹参酮A的保留时间分别为8.1，10.8 min。对照品和丹参样品色谱图见图1。2.4 线性关系考察精密移取“2.1”项所配的丹参酮I和丹参酮A储备液一定体积于10 ml量瓶中，稀释，配成丹参酮I浓度分别为0.44，0.88，1.76，3.52，7.04，14.08 g·ml-1及丹参酮A浓度分别为4.4，8.8，17.6，26.4，35.2，70.4 g·ml-1的混合对照品溶液，将上述混合对照品溶液分别平行测定3次（均进样10.0 l），以平均峰面积Y对浓度C(g·ml-1)进行

12、线性回归，丹参酮I和丹参酮A回归方程和相关系数分别为：Y = 74.61C - 118.86，r= 0.999 4；Y = 55.58C - 94.75，r = 0.999 6。线性范围分别为0.44 14.08，4.4 70.4 g·ml-1。2.5 精密度实验 精密吸取丹参（6月根）脂溶性成分供试品溶液10.0 l，重复进样6次，进行测定，丹参酮I和丹参酮A峰面积积分值的RSD分别为1.7%，1.9%。2.6 稳定性实验 对丹参（6月根）脂溶性成分供试品溶液在8 h之内每隔1 h进行考察，结果丹参酮I和丹参酮A峰面积积分值的RSD分别为2.1%，2.1%（n = 9）。2.7 重复性实验 精密称量丹参（6月根）粉末约200 mg共6份，按“2.2”项操作制备脂溶性成分供试品溶液，进行测