BG11液体培养配方

1、BG11液体培养基就是： Stock1 定容100mL 柠檬酸 0.3g 柠檬酸铁胺 0.3g EDTANa2 0.05g Stock2 定容1000mL NaNO3 30g K2HPO4 0.78g MgSO4·7H2O 1.5g Stock3 定容100mL CaCl2·2H2O 1.9g Stock4 定容100mL Na2CO3 2g Stock5 定容1000mL H3BO3 2.86g MnCl2·4H2O 1.81g ZnSO4·7H2O 0.222g Na2MnO4·2H2O 0.391g CuSO4·5H2O 0.0

2、79g Co(NO3)2·6H2O 0.049g Stock1 取用2mL Stock2 取用20mL Stock3 取用2mL Stock4 取用1mL Stock5 取用1mL 总定容 1000mL D1 (Diatom medium) Component             Amount         Stock Solution   

3、  (1) NaNO3                   1 mL/L            12 g/100ml dH2O          (2) K2HPO4   

4、0;              1 mL/L             4 g/100 mL dH2O         (3) MgSO4·7H2O        

5、0;1 mL/L             7g/100 mL dH2O         (4 ) CaCl2·2H2O          1 mL/L            

6、60;2 g/100 mL dH2O       (5 ) KH2PO4                 1 mL/L             8 g/100 mL dH2O        

7、(6 ) Na2SiO3.9H2O        1 mL/L             10g/100ml dH2O(7) MnSO4                   0.1mL/L    

8、60;       0.2g/100ml dH2O(8) 柠檬酸铁                 1 mL/L              0.5g/100ml dH2O(9) A5 （Trace mental solution） 

9、; 1ml/L                   H3BO3                      2.86g/L dH2O       

10、60;  MnCl2·4H2O              1.86g/L dH2O          ZnSO4·7H2O              0.22g/L dH2O   

11、       Na2MoO4.2H2O            0.39g/L dH2O          CuSO4. 5 H2O              0.08g/L dH2O

12、0;         Co(NO3)2.6 H2O           0.05g/L dH2O(10) 土壤提取液               20 mL/L  土壤提取液配制方法:取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透

13、气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4冰箱中保存备用。 f/2  mediumComponent                            Amount      &#

14、160;    (1)  NaNO3                        75 mg/L(2)  NaH2PO4 · 2H2O          0.6 mg/L(3)  Vitamin B12  &

15、#160;               0.5 g/L (4)   Biotin                         0.5 g/L (5)  Thiamine HCl  

16、60;             100g/L (6)  Na2SiO3 · 9H2O          10 mg/L (7)   f/2 metals                

17、60; 1 mL/L         Na2EDTA · 2H2O      4.4g         FeCl3 · 6H2O           3.16 g         CoSO4 · 7H2O  &

18、#160;      0.012g         ZnSO4 · 7H2O         0.021g         MnCl2 · 4H2O          0.18 g     

19、    CuSO4 · 5H2O         0.007g        Na2MoO4 · 2H2O      0.007g         Distilled water          1000 m

20、L(8)    Seawater                         1000 mL BG-11是培养蓝藻使用最广泛的培养基，微量元素溶液 A5 是BG-11培养基微量元素的重要组成部分。    试剂名称g/L 备注NaNO31.5g  K2HPO

21、40.04g  MgSO4.7H2O0.075g CaCl2.7H2O0.036g  Na2CO30.02g  Citric acid(柠檬酸)0.006g  Ammonium ferric citrategreen(柠檬酸铁铵)0.006g或柠檬酸铁0.004gEDTA0.001 g 微量元素溶液A5 1ml  氨苄青霉素 (终浓度)50g/ml 蒸馏水919ml  * 微量元素溶液 A5  A

22、5溶液   1mlH3BO32.86g  MnCl2.4H2O1.81g  ZnSO4.7H2O0.222g Na2MoO40.39g  CuSO4.5H2O0.079g  Co(NO3)2.6H2O  0.049g   参考：中科院水生生物研究所淡水藻种库 一、目的要求了解培养基的配制原理。了解培养基常规配制程序。了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。二、基本原理    

23、正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础，由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相向。三、实验材科(一)药品待配各种培养的组成成分，琼脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L (升，统一用大写)HCl溶液。(二)仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。(三)玻璃器皿移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。(四)其他物品药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布

24、、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。四、实验内容(一)玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器皿的洗涤    玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸馏水冲洗，洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。  2灭菌前玻璃器皿的包装    (1)培养皿的包装  培养皿由一盖底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后

25、的培养皿须经灭菌之后才能使用。    (2)移液管的包装  在移液管的上端塞入小段棉花(勿用脱脂棉)。它的作用是避免外界及口中杂菌吹入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身长度约1-15cm。塞棉花时，可用一外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。    先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45度角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧

26、，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。(二)液体及固体培养基的配制过程    1液体培养基配制    (1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用量，然后进行准确称量。    (2)溶化  将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用玻棒搅动，加热溶解。    (3)定容  待全部药品

27、溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先配成较浓溶液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。    (4)调pH  一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至达到所需pH为止。    (

28、5)过滤  用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。    2固体培养基的配制    配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(15-2)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。(三) 培养基的分装    根据不同需要，可将己配好培养基分装入试管或锥形瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦

29、去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。    1试管的分装    取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹住玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。    装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度14左右为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完

30、全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高15(约34m1)；半固体培养基分装量为管高的13为宜。    2锥形瓶的分装    用于振荡培养微生物用时，可在250 m1锥形瓶中加入50 ml的液体培养基，若用于制作平板培养基用时，可在250 m1锥形瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂粉(按2计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。(四)棉塞的制作及试管、锥形瓶的包扎    为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通

31、入试管或锥形瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及锥形瓶口加上棉花塞等。    1试管棉塞的制作    制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。    制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入。棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的23在试管内，13在试管外(图514)。    目前也有采用金属或塑料试管帽代替棉塞。直接盖在试管口上。灭菌待用。    将装好培养基并塞好棉塞或盖好管帽的试管拥成一捆，外面包上