各种缓冲液的配制方法

1、各种缓冲液的配制方法各种缓冲液的配制方法NaHPG柠檬酸钠缓冲液PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)2.20.419.65.210.729.282.41.2418.765.411.158.852.62.1817.825.611.608.402.83.1716.835.812.097.913.04.1115.896.012.637.373.4.9415.066.13.226.78223.45.7014.306.413.856.153.66.4413.566.614.555.453.87.101

2、2.906.815.454.554.07.7112.297.016.473.534.28.2811.727.217.392.614.48.8211.187.418.171.834.69.3510.657.618.731.274.89.8610.147.819.150.855.010.309.708.019.450.55NaHPO2HQ分子量=178.050.2mol/L溶液含35.61g/L柠檬酸.H2。，分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸柠檬酸钠缓冲溶液(0.1mol/L)PH0.1mol/L柠檬酸(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)PH0.1mol/L柠檬

3、酸(ml)0.1mol/L柠檬酸钠(ml)3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.7316.04.056.413.6.4.43.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.9.210.88柠檬酸.H2。分子量=210.140.1mol/L溶液含21.01g/L柠檬酸钠.2H2。)分子量=294.12;0.1mol/L溶液含29.4g/L醋酸缓冲液(0.2mol/L

4、,18C)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)PH0.2mol/LNaAC(ml)0.2mol/LHAC(ml)3.60.759.254.85.904.103.81.208.805.07.003.004.01.808.205.27.902.104.22.657.355.48.601.404.43.706.305.69.100.904.64.905.105.89.400.60NaAC.3H2O,分子量=136.090.2mol/L溶液含27.22g/L（1）醋酸盐溶液的配制：醋酸醋酸钠缓冲液（pH3.6）取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即

5、得。醋酸一醋酸钠缓冲液（pH3.7）取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溟酚蓝指示液1ml及冰醋酸6080ml,至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液（pH3.8）取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.5)取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸一醋酸钠缓冲液(pH4.6)取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6,再加水稀释至100ml,即得。醋酸一醋酸钠缓冲液(pH

6、6.0)取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml,即得。用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)(在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度，Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5(1.8乘10的-5次方),PKa=-lgKa=4.75,将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L,或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L,则C(NaAc)=0.56mol/L称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取

7、冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL。将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mLzk中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。苯二甲酸氢钾氢氧化钠缓冲液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L苯二甲酸氢钾(ml)加水至(ml)4.00.4025.00100.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.

8、005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml。磷酸缓冲液（:0.2mol/L)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.2mol/LNaHPO(ml)PH0.2mol/LNaHPO(ml)0.2mol/LNaHPO(ml)588.092.07.061.039.06.012.387.77.272.028.06.218.581.57.

9、481.019.06.26.573.57.87.013.0466.637.562.57.891.58.56.849.051.08.094.75.3NaHPO.2H2O,分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/LNaHPO.2H2O，分子量=156.03,0.2mol/L溶液含31.21g/LNaHPO.H2O,分子量=138.03,0.2mol/L溶液含27.6g/LNaHPO.12H2O,分子量=358.22,0.2mol/L溶液含71.64g/L磷酸盐缓冲液(PB0配制方法0.01MPBSPBS(135mMNaCl,2.7mMKCl,1.5mMKH2PO4,and8mMK

10、2HPO4pH7.2)PBS缓冲液(pH7.27.4):NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/LKH2PO41.4mmol/L称7.9gNaCl,0.2gKCl,0.24gKH2PO4(or1.44gNa2HPO4)l1.8gK2HPO4,溶于800ml蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸僭水定容至1L。保存于4c冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。母液的配制：0.2MNa2HPO4称取71.6gNa2HPO4-12H2

11、。溶于1000ml水0.2MNaH2PO4称取31.2gNaH2PO4-2H2Q溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制:先配0.2MPB(pH=7.4)100ml):取19ml0.2mol/L的NaH2PO481ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB)加水稀释至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,力口水稀释至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB)加水稀释至1000ml即可。若需要N

12、aCl的话，加入NaCl至0.9%(g/100ml)即可。另：其它各种另PH值的0.2MPB100ml)配方：pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.1 85156.2 81.518.56.3 77.522.56.4 73.526.56.5 68.531.56.6 62.537.56.7 56.543.56.8 51496.9 45557.038627.1 33677.2 28727.3 23777.4 19ml81ml7.5 16847.6 13877.7 10.590.57.8 8.591.57.

13、9 7938.05.394.70.01M磷酸盐缓冲液（PBS配制方法称取8gNaCl、0.2gKCk1.44gNa2HPO寻口0.24gKH2PO4g于800ml蒸储水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4）最后加蒸个留水定容至1L即可。在15lbf/in2（1034X105Pa）高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4c冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度0.01M指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na离子或K离子的浓度，Na离子和K离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话，则需要在配置的时候分别加入100u/ml青霉素和链霉素之后再调PH定容、灭菌消毒。PH 7.67.4

14、7.0H2O10001000NaCl8.58.58.5Na2HPO4 2.22.2NaH2PO4 0.10.47.2100010008.52.22.20.20.3根据经验来看，新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间，可是在温度的影响下，尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了，PH值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气，要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PB薮冲液称取NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO4?

15、12H2O63g,KH2PO24g,溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用PBS撰冲液取3006Tween-20力口入PBS100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍，配置为浓缩液，工作时候十倍稀释，那么，在刚配好浓缩液时，PH在6.5左右，明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调，但是有更方便的方法。十倍稀释以后，PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试，配好之后再测一次PH8.0的PBS配方详细1. NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO44.3mmol/L,KH2P

16、O41.4mmol/L2 .向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。3 .滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1L。4 .高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM3aCl2和0.5mMMgClZ0.05mol/LPBS（磷酸缓冲液PhosphateBufferSolution,PBSR勺配制：甲液：0.05mol/LNa2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠9.465g7.099g,加蒸储水至1000ml;乙液：0.05mol/LKH2P04溶液：称取磷酸二氢钾,9.07g6.803g,加蒸储水至1000mt将

17、甲乙液分装在棕色瓶内，于4c冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表：pH甲液ml乙液ml5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制pH=6.8的PB§可用甲、乙液各50ml混合即可。硼酸缓冲液（0.2mol/L硼酸盐）P0.05mol/0.2mol/LP0.05mol/0.2mol/LHL硼砂(ml)硼酸

18、（ml）HL硼砂(ml)硼酸(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0硼砂NaBQNOHzO,分子量=381.43,0.05mol/L溶液=0.2mol/L硼砂含19.07g/L硼酸，分子量=61.84,0.2mol/L溶液含12.37g/L硼砂易失去结晶水，必须在带塞得瓶中保存；硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替盐酸-氯化钾缓冲液P0.1mol0.02mo加P0.1mol0.02mo加H/LHCl(ml)l/LKCl(ml)水至(ml)H/LHCl(ml)l/LKCl(ml)水至(

19、ml)1.194.562.701001.723.7638.101001.275.1012.451001.818.6840.601001.359.6820.151001.914.9842.501001.447.4026.301002.011.9044.051001.537.6431.201002.19.4645.03100129.9035.00127.5246.2510.600.200.02mol/LKCl溶液：溶7.455g氯化钾于水中,稀释至500ml苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液P0.1mol0.02mo力口P0.1mol0.02mo力口H/LHCll/L苯水H/LHCll/L苯水(ml)二甲酸至(ml)二甲酸至氢钾(氢钾(ml)m(ml)mii)246.6025.001314.8025.0010.0.0202239.6025.00139.9525.0010.0.0404233.0025.00136.0025.0010.0.06062.826.5025.001003.82.6525.00100320.4025.001.0000.02mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml磷酸二氢