SPOT-软件操作手册(共7页)

1、精选优质文档-倾情为你奉上SPOT 软件操作手册一、图像获取功能用spot拍摄图像的操作流程1、调节显微镜，直到可以清楚地看到标本。2、将显微鉴定光路转换到拍摄状态。3、打开控制软件，点击屏幕右下角的拍摄协议窗口，选择一个合适的协议。4、点击窗口内（右上角）的LIVE图标，相机开始实时预览，你将看到要拍摄的区域。将焦距调到最清楚（直接调焦，从显示器上就可以直接看到变化），然后关闭LIVE窗口。5、点击get image拍摄，拍摄后的图像出现在屏幕上，至此已经完成了一次基本拍摄。注意：1）开机顺序最好是先打开相机电源，再打开控制软件。2）拍摄时一定要注意显微镜的光路是否转换到拍摄状态。3）上一次

2、所作的所有的参数设置都会被计算机默认保留，所以拍摄前最好察看一下。4）spot 2及以前的型号没有LIVE功能。5）请确定滤光块的位置是否正确（明场时使用BF）SPOT软件提供的厂家设定协议可满足大多数拍摄环境，如果这些协议不能满足实际需要，可对参数进行修改或建立自己的协议。二、建立自己的拍摄协议1、点击setup菜单，2、选取image setup。（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点右键，选择Add）3、选取Add，选择拍摄的模式，如图为协议取一个名字，5、设定各项参数6、点击确定，这是自己的协议将出现在屏幕右下角的协议窗口，以后拍摄时只须选中即可，不必再惊喜逐项设定。三、设置拍摄参数

3、操作流程1、点击setup菜单。2、点击image setup；（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点左键，选择modify）3、选取一个拍摄协议，点击modify。选取图像类型（8位单色/12位单色/24位RGB/36位RGB/48位RGB）拍摄彩色图像时，一般选择24位RGB，因为一般第三方软件均支持此方式。如果是拍摄荧光，在滤光片的选择上最好选择要拍摄的荧光的颜色，这样速度快，图像质量好（例如拍摄绿色荧光，则只选择绿色滤光片）选定曝光方式-自动/手动一般情况下，选择自动曝光，这样质量会比较好，方便调节参数。GAIN值所代表的意思是为CCD芯片中最亮的一点所容纳的电子数，其中1为容纳最多

4、电子数，即满井电子数，2代表1/2满井电子数，以此类推，16代表1/16满井电子数。拍摄透射光时，可以选择任意值，推荐为8；拍摄荧光时，推荐使用1或2。调节曝光因子，数字越大，实际曝光时间越长适用于拍摄荧光，特别是以下情况：如果在拍摄的图像中有一点特别亮，其他的都很暗，并且这个亮点是一个杂点或者不需要的，我们需要的则是那些暗的。这时我们就可以调节这个值（如调节为2.3，它的意思就是在实际的曝光基础上再乘一个2.3的系数）这样再拍摄，就会发现原来的亮点会曝光过度，但是原来不清楚的图像现在变得清楚了BINNING选择光线弱时，可选定BINNING方式，以提高灵敏度，节省时间。数字越大，灵敏度越高，

5、推荐拍摄弱荧光时使用2*2。选择时要注意以下情况：如果要做图像叠加，则一定要使用相同的Binning，否则图像会错位！选择曝光顺序如果相机为3次曝光相机，则曝光顺序可以调整（特别是拍摄比较容易淬灭的荧光时），将容易淬灭的荧光先拍摄。顺序即是RGB的各种组合（R-代表红色，G-代表绿色，B-代表蓝色）选定芯片成像区域Full Chip-整个芯片成像，Center-中心区域成像，通过设定百分比决定区域的大小，Region-设定成像区域的坐标。点击要采取的后处理方式，Spot会在获取图像之后对其进行相应处理后再显示在屏幕上。四、常用的拍摄技巧1、在使用LIVE功能时，选择cortrol可以调节一些参

6、数。（如预览图像显示的颜色，Binning格式，图像的亮度速度与质量的关系等。其中在拍摄弱荧光时推荐Binning使用2*2或3*3，亮度值可稍微调高一点，速度与质量的选择偏向于速度）注：这些参数的默认值一般为：bright为1.0，grama为1.42、拍摄时如果不想把整幅图片都拍下来的话，也可以这样作：先拍摄一幅图片，从中选择感兴趣的区域，用鼠标划出来，然后选择camera-Set Chip Imaging Region然后会出现对话框，点击OK，这样再拍摄时就会只拍摄你感兴趣的区域。注：做这些工作的前提是载物台一定不能动，如果要拍摄另一个视野则先要把成像区域改为full chip（做法如

7、下：右键点击右下角的拍摄方案，选择modify，再选择full chip即可。）3、明场拍摄方案一般就使用默认的数据就可以了，拍摄荧光时，可能要做一些调整。例如如果荧光比较暗或淬灭比较快，就可以把Bining改为2*2，Gain值改为2或4。4、白平衡功能（适用于明场拍摄）有时由于灯的缘故拍摄出来的图片会整体发黄或发蓝，这个时候就可能要使用白平衡来解决问题。具体做法如下：在屏幕菜单中选择White Balance（右侧一个天平形状的图标），将载玻片聚焦好然后转移到一个空视野的区域，光路转到拍摄状态，点击Begin-OK即可。注：白平衡与光的强度密切相关，光的强度变化了可能就需要做白平衡。5、平

8、场校正-有时候拍摄出来的图片会四个角发暗，或由于镜头较脏，使得图片上一直有一些暗斑，具体调整方法如下：首相将载玻片在目镜下聚焦好，然后拿走玻片，将光路转换到拍摄状态，点击camera-Get Flatfield Image，相机自动拍摄，然后会出现对话框，给它起一个名字点击ok就可以了。五、图像编辑功能1、图像增强使用图像增强功能可以提高图像质量，突出重点。做法如下：1）点击Edit菜单2）选取Adjust RGB或（HSL/HSV），再选定Adjust Histogram，移动滑动条（两个三角）来改变图像显示效果；这个操作主要是为了去掉拍摄时的噪音，使图像变得更清晰，后面的那个三角向前拉会使

9、图像变得更亮，在拍摄单色光的时候特别要调节一下，只选择单色光波峰所在的区域，图像效果最好。3）选取Filter，可对图像进行平滑，锐化等操作。2、图像叠加1）点击Edit菜单，2）选定Merge Images；然后选择要叠加的图像，即白色框内的显示的位置，也可以从硬盘上直接选择图像，将其合成一幅图像。该功能在拍摄多探针荧光图像等情况下非常有用。3、剪切图片1）在图片上选择感兴趣的区域用鼠标划出来，然后点击edit-crop即可。2）伪彩色填充3）有时我们拍摄荧光使用mono模式拍摄，但又想将他填充成单彩色图像。（或选定edit-Convert to grayscale，可将彩色图像转换成灰度图

10、像，再选择change pixel bit depth，选择8bit。）可以这样做选择edit-set palette就可以使用伪彩色来填充。4、伪彩色方案的设定系统已经给了4个默认设置，但有时不符合心意，此时我们就可以自己设置颜色方案。做法如下：点击setup-palette-add在左侧的调色板上选择符合心意的颜色，然后为它起一个名字，点击OK。使用时在set palette里的下拉菜单里就有你自己设的方案，就可以直接使用，如果觉得颜色不符合心意，还可以修改，步骤是setup-palette-选择要修改的方案的名字-modify就可以修改了。六、图像测量功能Spot提供了方便的测量功能，可

11、直接再画面上进行测量并显示出实际测量值，在测量之前，需要先进性校准。1、校准1）先拍摄一张定标尺的图像2）点击setup菜单3）选定Calibration Setup，出现对话框；4）选定Add5）为将要建立的标准取一个名字（最好是显微镜的物镜倍数）6）将光标放在图像上，此时光标变成十字，在定标尺图像的某一位置点击，再将光标移到另一位置点击；最好是包括整数个一黑一白跨度7）在对话框最后一行键入实际长度和单位，（一般一黑一白代表100个微米）8）点击OK。2、添加比例尺1）点击edit-add calibration mark2）选择拍摄时的物镜倍数，然后在要加比例尺的图像上用鼠标左键点一下，就

12、可以将比例尺加到图像上，要保存点击stamp。比例尺的大小，方向，颜色，位置，线条的粗细，都可以调整，方法如下：在对话框上直接选择要修改的对象，调整即可。注：在做操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改3、测量1）点击Edit菜单2）选取Add Measurement，出现对话框3）选定一个测量标准（一般为拍摄时的物镜倍数）4）选定测量类型（直线距离/角度/曲线距离/区域面积）5）在图像上移动，点击鼠标即可进行测量，结果会显示在图像上；6）如果想保留测量结果，点击对话框上的Stamp即可。注：在作操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改。七、图像标注功能

13、Spot的图标标注功能可在图像上添加箭头，线条，矩形，文字，图片，水印，拍摄日期，备忘率等元素，将图像做必要的描述，突出重点，方便发表和查阅。1、选择标注工具1）点击Edit菜单2）选定Add Annotate，此时屏幕上方菜单发生改变，出现Object，Attribute，Done三个新选项。3）点击Obiect4）选定自己需要的元素或选择view-show tools来使用快捷菜单，在图像上拖动鼠标，即可将其添加在图像上。2、改变工具样式1）如果对某工具的样式不满意，点击Attribute2）选定要修改的工具，设定其参数即可3）在图像上标注完成之后，点击Done，保存所做的操作，即可恢复原

14、来的菜单。3、添加备忘录可以将这张图片与其它片子的不同之处记下来，方便以后查阅，对比等。文字将会与图片一起保存为一个文件。以后只要打开图片点击meno即可看见以前写的记录，并且可以任意修改，具体做法如下：点击edit-meno，将所有信息写下即可。八、常见问题及解决方法屏幕提示Exposure time is too short原因：光线太强解决：将光源调弱即可。或使用挡光片等。屏幕提示 Image too dim原因：可能是光线太暗解决：将光强调亮即可，也可能是由于没有将显微镜的光路转换到拍摄状态。一直计算曝光时间，不进行其他操作原因：显微镜的目镜与VIDEO端口的切换拉片没有拉出，相机没有

15、感光或是由于拍摄时没有将光路转换到拍摄状态解决：将拉片拉出即可。骗色严重（整幅图片偏黄或偏蓝）原因：白平衡不正确解决：做一次白平衡，具体步骤如下：1）点击White balance 图标，按照屏幕提示，移动玻片，使视野中只有空白区，点击OK，2）软件将自动计算白平衡，并提示你确认将所得到的白平衡存储到哪一个拍摄协议中去。3）选定一个拍摄协议，点击ok，白平衡只针对透射光显微照相图像模糊原因：聚焦不清楚解决：用FOCUS或LIVE功能来聚焦。1）点击Focus或LIVE图标，画面上出现一个矩形框和一个对话框2）点击矩形框将其拖到画面上比较容易看出聚焦效果的区域或自己感兴趣的区域3）在对话框内选定

16、用来辅助聚焦的滤镜的颜色（不同的颜色会影响画面更新的速度。比如拍摄绿色荧光时，使用绿色滤镜会获得较快的更新速度）4）在对话框内点击Begin，转动显微镜的调焦旋钮，同时观察屏幕上的聚焦结果，聚焦满意时，点击stop，再拍摄图像。拍彩色图像时颜色显示是真，缺少层次原因：显示器色彩显示模式错误解决：进入Windows的控制面板，将显示器设置为24位彩色或更高。打开软件时屏幕提示得不到相机的响应，打开后多数图标变灰原因：打开软件时相机电源没有打开解决：打开电源，点击Camera菜单，选Initialize，软件将自动和相机建立联系。图标恢复正常显示。相机不工作原因：可能电源保险丝烧断解决：更换保险丝即可（事先征得CTS工程师的认可）汞灯点不亮原因：1、汞灯使用寿命已完。2、由于汞灯启动的电压很高，有时插线板上接了过多的设备，造成电压过低，引起故障。解决：更换灯泡，将汞灯电源使用单独的插线板拍到的画面范围和目镜视野相比太小或不一致原因：只使用了局部芯片来成像解决：点击Setup菜单，选Image setup，在成像区域选择部分，将芯片成像区域设成更大的数值或选择Full chip。想修改某个拍摄协议，却发现出现的对话框变灰而无法修改原因：使用了锁定协议的功能解决：惦记对话框右下角Lock前面的点选框，框内的勾号消失，即可对各项参数进行修