中药复方“通脉口服液” 对肾小球系膜细胞增殖及分泌ＩＬ －１β

1、中药复方“通脉口服液” 对肾小球系膜细胞增殖及分泌          作者：钟丹 杨霓芝 赵代鑫 刘明平 【摘要】 目的观察中药复方“通脉口服液”对体外培养条件下大鼠肾小球系膜细胞（）增殖和分泌 的影响。方法应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清、黄芪含药血                 

2、0;           作者：钟丹 杨霓芝  赵代鑫 刘明平【摘要】  目的观察中药复方“通脉口服液”对体外培养条件下大鼠肾小球系膜细胞（）增殖和分泌 的影响。方法应用细胞培养技术进行肾小球系膜细胞的传代培养，采用血清药理学方法，制备通脉口服液含药血清、黄芪含药血清、三七含药血清，采用 法观察各组含药血清对正常培养条件下及 刺激状态下肾小球系膜细胞增殖的影响， 法测定 刺激下通脉口服液组细胞上清中 的含量。结果3组含药血清均可抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖，三组之间比较，通脉

3、口服液组作用要优于黄芪组及三七组。 结果表明：通脉口服液含药血清可以抑制肾小球系膜细胞分泌 。结论中药复方“通脉口服液”可抑制肾小球系膜细胞的增殖及 诱导的系膜细胞 的产生，肾小球系膜细胞是通脉口服液防治慢性肾炎，延缓肾小球硬化的重要靶细胞之一。 【关键词】  通脉口服液 慢性肾小球肾炎 细胞培养 白细胞介素Abstract:Objective （ ） （）Methods vitro （）， （） （） u ， Results ， b ， Conclusion i ， ， ock Key words: ；  ；  ；     

4、; 系膜细胞过度增殖是导致肾小球硬化的重要原因，且其分泌的白介素（ ）在这一病理过程中起了关键作用 。因此积极寻找抑制系膜细胞过度增殖和调控 产生与表达的药物对防治肾小球硬化具有重要意义。通脉口服液是广东省中医院肾内科杨霓芝教授在多年临床和实验研究的基础上，制订的防治慢性肾炎的基本方药。其主要药物包括黄芪、三七等，数药合用，起到益气活血的作用，直接针对慢性肾炎基本发病机理而设。既往研究已表明通脉口服液可以有效地改善慢性肾炎患者的临床症状及肾功能 ，减轻慢性肾炎模型动物的肾脏病理损害 。在本研究中，我们观察了通脉口服液对肾小球系膜细胞增殖及分泌 的影响，希望能在更深层次上探讨其防治肾小球硬化的作

5、用机理。1  器材与方法1  药物中药复方通脉口服液： 支，由广东省中医院提供，批号；黄芪、三七水煎液：由广州中医药大学中药学院实验中心提供。  动物 雄性大鼠 只， 级，由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：，许可证号： ×（粤）。  细胞大鼠肾小球系膜细胞购至武汉大学典藏细胞库（编号： ）。  仪器及试剂超净工作台（苏州净化设备厂）；倒置显微镜（日本 公司）； 恒温培养箱（美国 公司）；酶联免疫检测仪（ 型）；相差显微镜（日本公司）；超低温冰箱（美国 公司）；四甲基偶氮唑盐（）、脂多糖（）均为 公司产品； 试剂盒购自上海森雄

6、科技实业有限公司。5  方法  肾小球系膜细胞（）培养肾小球系膜细胞（）购回立即吸掉培养液，加入 的 培养液，第 天开始取细胞株进行传代培养：吸掉培养液，加约 胰酶消化液（内含胰蛋白酶和），轻摇培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面。轻轻吹打细胞，吸出消化液和细胞，加入 离心管内，离心（ ， ），吸出上清液，加入培养液，再次离心（ ， ），吸出上清液，加入含的培养液。分装 个 培养瓶，放入 恒温培养箱（， ，饱和湿度）培养。 换 次液。每 天进行传代，共传 代。取第 代肾小球系膜细胞进行下游操作。2  药物及空白血清制备参照文献， 方法制备药物血清，将 大鼠随机分为 组

7、，即中药复方通脉口服液组、空白血清组、黄芪水煎液组、三七水煎液组，每组 只。各药物组均按临床成人用量的 倍即 （生药），灌胃给药，连续 ，第 天重复给药 次，间隔时间 ，并于末次给药后 ，无菌操作，眼眶静脉取血，静置 ，待血凝固后离心（ ， ），分离血清，并将含药血清置于水浴箱中，水浴 灭活处理。置于冰箱保存备用。空白血清组大鼠不作任何处理，在药物血清组采用的同时采血，分离血清，方法同上。  分组及细胞活力实验实验分为空白对照组（加体积分数为的正常大鼠血清）、通脉口服液组（加体积分数为的含药血清）、黄芪组（加体积分数为的含药血清）、三七组（加体积分数为的含药血清）、 组（加体积分数为

8、的正常大鼠血清和终浓度为 的）、 通脉口服液组（加体积分数为的含药血清和终浓度为 的）、 黄芪组（加体积分数为的含药血清和终浓度为 的）、 三七组（加体积分数为的含药血清和终浓度为 的），共 组。细胞活力试验采用 染色、细胞计数方法，结果表明各组含药血清处理 后，细胞存活率均达以上，适合进行下游操作。  细胞增殖检测采用四唑盐（）比色法，取细胞悬液于相差显微镜下计数，用含 的 培养液调整细胞浓度到 × ，转种于 孔培养板中， 孔，则每孔细胞数为 × 。， ，饱和湿度条件下培养 ，各孔均换液，加入不含 的 培养液 以同步各组细胞于 期。同步 后，分为正常血清组及 刺

9、激组：正常血清组加入，原条件下继续培养； 刺激组在各孔中加入 浓度的（每孔总液体量为 ，则 终浓度 ），每组设 个复孔。于培养， 时分别取出相应的培养板，每孔加入 （ ），继续培养 ，小心吸弃各孔培养液，加入 ，室温避光，轻轻振荡，使结晶充分溶解。选择 波长6，在酶标仪上读出OD值  法测定系膜细胞 蛋白分泌用含的 调整细胞浓度到 × × ，转种于 孔培养板中， 孔，则每孔细胞数为 × × 。， ，饱和湿度条件下培养 ，各孔均换液，加入不含 的 培养液 以同步各组细胞于 期。然后分为:空白对照组（加）； 组（ ） 通脉口服液组（通脉口服液含药血清 ），共 组，每组设复孔 个。 ，饱和湿度条件下继续培养。于培养， 时分别取出相应的培养板，收集各组上清液，采用 方法，酶标仪测定 吸光度，据标准曲线测定其中 的浓度。7  统计学处理各组数据用珋 ±s 表示，采用 统计软件包对检测数据进行统计分析。组间比较采用方差分析，方差不齐者改用秩和检验的 方法进行多个样本比较及两两比较。2  结果1  各组含药血清对系膜细胞增殖的