CAPCTM48SOP详细操作流程

1、COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan 48 Standard Operating Procedures标准操作流程Version 1.0 1 COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan 48的配置如下：配置到COBAS TaqMan 或COBAS TaqMan 48 的转移模式各种实验所需的架子和耗材在COBAS AmpliPrep 仪器上的相应位置COBAS AmpliPrep _ COBAS TaqMan 48通过K-carrier 架手工转移K-carrier 到COBAS TaqMan 48 中a. K-tubes放在样本架上b. 带有K-tips

2、 的K-tip 架c 将带有样本或质控的S-tubes 放在 样本架上d. 带有SPUs 的SPU-架e. CS1放在一个试剂架f. CS2, CS3, CS4放在一个试剂架g. 将空的K-carrier 放在 K-carrier 架上样本核酸提取完成后:K-carrier上的K-tubes 手工转移F-HM-PF-HJ-LAB-EM-P(M-P)2. COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 48上使用试剂及耗材的保存及注意事项：1). 所有试剂（HBV/HCV/HIV-1 test试剂）2-8保存，即拿即用；2). 试剂启用后，如HBV2.0可保存63 days (2-

3、8)；3). 试剂启用后，在Cobas Ampliprep上累计使用时间最多64 hrs；4). CTM(-)阴性质控、L(+)弱阳性质控、 H(+)强阳性质控，使用后的扔掉；5). 洗液2-30保存，打开后可使用28 days；6). 耗材（S-tube/样本条码/K-tip/K-tube/SPU）常温保存。3. COBAS AmpliPrep /COBAS TaqMan 48上使用样本的保存、运输及注意事项：1). HBV和HIV检测所需要的样本为EDTA-血浆；HCV检测所需要的样本为EDTA-血浆或血清。2). 全血在225 下运输，24hrs内 (HBV DNA检测)或6hrs内(H

4、IV-1 RNA或 HCV RNA 检测) 收集出血浆 (室温800-1600g离心 20分钟)；3). HBV DNA检测：血浆可在室温下(25-30 )保存最多3天，在28 最多保存7天， 或者-20-80 下长期保存，至少6周； HCV RNA检测：血浆可在28 最多保存3天，或者-70 或更低温度下长期保存； HIV-1 RNA检测：血浆可在室温下(25-30 )保存最多1天，在28 最多保存5天， 或者-20-80 下长期保存；4). 血浆样本建议1100-1200 L进行保存；5). 血浆冷冻时，最多冻融5次不损失HBV DNA，最多冻融2次不损失HCV RNA，最多冻 融5次不损

5、失HIV-1 RNA；6). 标本的运输：HBV DNA检测和HIVRNA检测 :全血必须在225°C运送,血浆可在28°C或在-20°C到-80°C冷冻运送。HCV RNA检测 : 全血必须在225°C运送,血浆可在28°C或在-70°C冷冻运送。4. COBAS AmpliPrep / COBAS TaqMan 48 HBV DNA/HCV RNA/HIV-1 RNA 定量检测操作流程：A仪器初始化及维护A1 打开COBAS AmpliPrep 和 COBAS TaqMan48 开关，等待仪器初始化完

6、成，为 stand-by 状态。A2登陆电脑及 AMPLILINK 软件(建议电脑应该每日关机)a) 登陆Windows® XP操作系统（ User ID 和 password）b) 双击桌面上AMPLILINK 软件图标c) 登陆AMPLILINK 软件（ User ID 和 password）A3通过软件Status界面检查洗液量是否足够，如不够需要更换新的洗液A4检查软件维护界面Due 按钮下列出的需要进行的维护内容，按照维护手册进行相应内容的维护工作 COBAS AmpliPrep 仪器自动进行系统初始化工作B加载试剂将所有试验需要的试剂匣从 2-8°C 冰箱拿出，

7、立即放在试剂架上并放入 COBAS AmpliPrep 仪器中，试验开始前在仪器上平衡至少30分钟。不要将试剂匣放在仪器外进行温度平衡，以免在试剂匣表面形成水凝结，造成条码的损坏。如果在试剂匣表面有水凝结，不要对条码部位进行擦拭，以免损坏条码造成仪器无法对条码进行辨识。B1将CS1 试剂匣放在一个试剂架上，将试剂匣 CS2, CS3 和CS4 放于另一个试剂架上B2将放有CS1的试剂架放入到COBAS AmpliPrep 仪器中的A位置B3将放有CS2, CS3 和 CS4的试剂架放入到COBAS AmpliPrep仪器中的B、C、D、E的任一位置C加载耗材 注意：根据检测的样本数计算需要的C

8、OBAS AmpliPrep 试剂匣数目, 样本处理单元(SPU), 样本管(S-tube), K-枪头(K-tips) 和 K-管(K-tubes) 的数量。 每个样本或质控分别需要 一个SPU, 一个S-tube, 一个K-tip 和一个K-tube 。C1加载样本处理单元 (SPUs)· 计算需要SPU数量，一个样本或质控需要一个SPU · 将SPUs 放入到SPU 架中· 向下压SPU的边缘部分（不要碰到S-tip的部分）使SPU完全坐稳在SPU架的 底部· 确认 SPUs 正确的放入在SPU 架中 (若SPUs放置不正确，可能造成仪器运行中停止

9、)· 将SPU 架放入到COBAS AmpliPrep仪器的 J, K 或 L位置C2将空的K-carriers 与K-carrier 架关联，放在COBAS AmpliPrep 的O ,P 位置C3加载K-tip 架于COBAS AmpliPrep 上M, N位置D创建命令和加载样本D1样本架准备· 将样本的条码夹放在样本架上相应有样本管 (S-tube)的地方 · 将专用于质控的条码夹放在样本架上与阴性质控(-) C, 弱阳性质控L(+) 和 强阳性质控相对应的地方· 注意对相应的质控使用正确的质控条码夹D2& D3通过AMPLILINK 软

10、件创建命令 （见下图）· 在软件orders界面下的Sample rack 按钮下创建样本及质控的命令· 选择相应的检测项目，并进行保存· 打印创建好的样本及质控工作表7654321D4&D5在生物安全柜中进行样本准备· 涡旋混匀样本及质控3-5秒· 将1000 µl 样本及质控转移到相应的样本管S-tube中· 避免将颗粒或凝块状物质转移到样本管S-tube中· 装有样本及质控的样本管放到样本架相应的位置（与创建好的命令工作表 中的位置一致）· 确保质控条码上的lot 号码与质控的lot 号码一

11、致· 确保相应的质控使用正确的质控条码夹 · 避免样本或质控污染样本管S-tube的上部· 转移每个样本或质控需要一个新的加样枪头D6· 加载带有样本管和K-tubes的样本架于COBAS AmpliPrep 仪器的F, G 或 H位置· K-tube需要放置于样本架上相应的样本管旁边的位置上 E开始运行COBAS AmpliPrep 仪器E1在AMPLILINK 软件上启动运行COBAS AmpliPrep· 检查Status 界面下，确保没有样本、质控或试剂被锁住 · 确保所有的样本和耗材都已加载到COBAS Ampli

12、Prep中· 点击Start 按钮FCOBAS AmpliPrep 仪器运行结束后， 手工转移提取好的样本到 COBAS TaqMan48应避免将所有提取好的样本及质控直接放置于日光或光源下 F1· 检查AMPLILINK 软件中可能显示的标记flags及错误信息F2· 在COBAS AmpliPrep处理好的样本及质控必须在120 分钟内转移到COBAS TaqMan 48 中开始反应不要冷冻或在2-8°C储存处理好的样本及质控 F3· 通过K-carrier 转移工具，手工转移带有 K-carrier 的 K-carrier 架到COBAS TaqMan 48 中F4丢弃COBAS AmpliPrep 仪器中的废物G开始运行COBAS TaqMan 48G1系统自动开始COBAS TaqMan 48 运行· 如果K-carrier上的K-tube数目少于6个，需要用空的K-tube填补K-carrier上空缺位置，AMPLILINK软件会指导需要填补的位置。打开扩增仪的外部盖子，将 K