反相HPLC法测定阿奇霉素软胶囊的含量

1、反相HPLC法测定阿奇霉素软胶囊的含量         【摘要】 目的 采用反相高效液相色谱法测定阿奇霉素软胶囊中阿奇霉素的含量。方法 用耐碱性的十八烷基硅烷键合硅胶柱为固定相，以水0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用氢氧化钠试液调节pH值至10.3)乙腈(16.723.360)为流动相，流速1.5ml/min，柱温40，检测波长210nm        【摘要】  目的 采用反相高效液相色谱法测定阿奇霉素软胶囊中阿奇霉素的含

2、量。方法 用耐碱性的十八烷基硅烷键合硅胶柱为固定相，以水0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用氢氧化钠试液调节pH值至10.3)乙腈(16.723.360)为流动相，流速1.5ml/min，柱温40，检测波长210nm。结果 阿奇霉素主成分峰与相邻杂质峰分离状况良好；空白辅料植物油不干扰阿奇霉素主成分的分离检测。阿奇霉素在0.20521.9207g/ml的浓度范围内质量与峰面积呈良好的线性关系；在添加了空白油辅料的体系中在0.19952.0147g/ml的浓度范围内质量与峰面积呈良好的线性关系。在添加了空白油辅料的体系中阿奇霉素的最低检测浓度为1.04832.0966g/ml，最低定量浓度为4.

3、193210.483g/ml。准确性试验的平均回收率为101.4%，RSD为0.2%(n=9)；重复性试验的平均含量为98.0%，RSD为1.0%(n=9)。结论 方法专属性强，精密、准确、耐用，可替代抗生素微生物检定法作为阿奇霉素软胶囊的含量测定方法。 【关键词】  高效液相色谱法； 阿奇霉素； 软胶囊； 含量测定    ABSTRACT  Objective  To established a high performance liquid chromatography method for determination of az

4、ithromycin soft capsules.  Methods  A high pH stability column (Agilent Zorbax Extend-C18, 4.6mm×150mm, 5m) was used; the mobile phase consisted of water0.01mol/L dibasic sodium phosphate buffer solution (the pH value was adjusted to 10.3 by sodium hydroxide T.S.)acetonitrile (16.7 23

5、.360); the flow rate was 1.5ml/min; and the UV detection wavelength was at 210nm.  Results  The good resolution between peaks of azithromycin and of the adjacent  purity was obtained. The blank excipient soybean oil did not interfere with the detection of azithromycin. The linear rang

6、e for azithromycin was 0.20521.9207 g/ml, and the actual linear range for azithromycin in simulated samples spiked with soybean oil excipient was 0.19952.0147 g/ml. The LOD of azithromycin in simulated samples spiked with soybean oil excipient was 1.04832.0966 g/ml, and the LOQ was 4.193210.483 g/ml

7、. The average recovery 101.4% was obtained with a RSD of 0.2%; and the average content 98.0% was obtained from the precision test; and the RSD was 1.0% (n=9).  Conclusion  The method is specific, precise, accurate and robust. Its suitable for the content determination of azithromycin soft

8、capsules.    KEY WORDS  HPLC;  Azithromycin;  Soft capsules;  Content determination    阿奇霉素是一种15元环含氮大环内酯类抗生素，其抗菌谱广，临床疗效显著。阿奇霉素软胶囊是目前国内较为流行的新颖药物剂型，与其他口服制剂相比，具有吸收快、生物利用度高、密封性和防潮性更好，服用方便等优点。对阿奇霉素及制剂的质量分析，日抗基和中国药典2005年版二部均采用微生物检定法测定其含量，USP23版起则收载了HPLC法，但

9、采用电化学检测器，色谱柱也是选用以氧化铝为基质的键合柱，以应对高pH值的色谱体系。这些限制直接导致该法难以普及应用，也不能获得常规反相色谱系统通常所能达到的色谱性能。近10年来，国内药学分析领域的色谱工作者为了开发适用的阿奇霉素色谱分析方法，已作了不懈的努力，诸多成果已见报道116。但从中国药典2005年版二部增修订品种阿奇霉素系列质量标准草案的起草和复核过程来看，尚难选定一种合适耐用的HPLC分析方法可以胜任国家标准方法制订之要求。本文以新颖而成分相对复杂的剂型阿奇霉素软胶囊为研究对象，着手开发了常规而具特色的HPLC法，选用耐碱性但又常用的Agilent公司Extend系列十八烷基硅烷键合

10、硅胶柱测定阿奇霉素的含量，获得了满意的研究结果。    1  仪器与试药    Agilent 1100型组合式全自动高效液相色谱仪，配备Agilent G1314A VWD检测器、Agilent G1313A ALS自动进样器及Agilent Chemstation化学工作站；电子分析天平为Sartorius BP 211D型。阿奇霉素软胶囊三批，规格为125mg，批号为20050901、20050902、20050903，由浙江维康药业有限公司研制生产。阿奇霉素对照品为美国USP对照品，批号为H0C212，标签含量为94

11、3g/mg。乙腈为色谱纯；磷酸氢二钠、氢氧化钠均为分析纯；水为重蒸水。    2  方法与结果    2.1  色谱条件与测定方法    色谱柱为Agilent公司Extend-C18柱(4.6mm×250mm，5.0m，pH耐受范围为212)。流动相为水0.01mol/L磷酸氢二钠溶液(用氢氧化钠试液调节pH值至10.3)乙腈(16.723.360)；柱温40；流速1.5ml/min，检测波长210nm。    取装量差异项下的内容物，混合均匀

12、，精密称取适量(约相当于阿奇霉素250mg)，置250ml量瓶中，加甲醇125ml，在微温水浴中放置并不时强力振摇使阿奇霉素充分溶出，取出，稍放冷，加流动相稀释至近刻度，再置超声波浴中强力超声810min，取出，放冷至室温，加流动相稀释至刻度，摇匀，用滤膜缓缓推注滤过，精密量取续滤液20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿奇霉素标准品约50mg，置50ml量瓶中，加甲醇25ml，振摇使样品溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20l，同法测定。按外标法以阿奇霉素主成分峰面积计算供试品中阿奇霉素的含量。    2.2  测定方法的建立 

13、60;  (1)检测波长、溶解介质及试验浓度的确定  本品所含主药阿奇霉素无特征性紫外吸收，故以末端吸收波长210nm进行检测。    本品为油性软胶囊，内容物为植物油基质混悬液，需选择合适的溶剂提取主药阿奇霉素。为避免使用强溶剂可能显现的溶剂效应，针对阿奇霉素的溶解特性进行反复摸索尝试，最后确定用甲醇提取加流动相稀释制备供试品溶液。回收率试验结果证实该方案提取效果好。    考虑到本法用于含量测定，对主色谱峰面积的准确计量至关重要，故应选择合适的供试品溶液的浓度，力求减小阿奇霉素次组分、杂质和或降解物对主成分的干扰。本品剂型特殊，主药阿奇霉素被混悬包裹于药用辅料植物油基质中，不易提取，若将供试品溶液浓度定得过高，易导致主药提取不完全，过高浓度的辅料并可能对主药检测构成干扰，势必影响测定结果的准确性。若将供试品溶液浓度定得过低，因阿奇霉素紫外响应不强，主色谱峰面积过小，也会影响积分结果的准确性，导致方法的精密度下降。若保持溶液浓度为1mg/ml，进样体积增加至50l，进样测试，发现主成分峰理论板数有一定程度下降。上述研究表明，将供试品溶液浓度定为1.0mg/ml，进样体积定为20l最合适。    (2)系统适用性试验  阿奇霉素是多组分并存的红霉素族衍