和络舒肝胶囊对日本血吸虫病肝纤维化的治疗作用研究

1、和络舒肝胶囊对日本血吸虫病肝纤维化的治疗作用研究 08-06-03 17:11:00 作者：徐标编辑：studa20【关键词】 胶囊 摘要：目的研究和络舒肝胶囊对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的治疗作用及其机理, 并与吡喹酮的作用对比。方法80只小鼠随机分为4组。其中3组小鼠感染日本血吸虫8周后，分别以和络舒肝胶囊0.1粒/只/d治疗8周、吡喹酮500 mg(kgd)-1治疗2 d以及不作任何治疗(实验对照组)，第4组小鼠作为正常对照组。应用免疫组化染色及HE染色法，观察和分析和络舒肝胶囊及吡喹酮治疗前后各组小鼠肝组织病理改变及血小板衍生生长因-BB (platelet-derived growth

2、 factor, PDGF-BB)和，型胶原的表达变化。结果和络舒肝胶囊治疗后肝纤维化组织病理损伤减轻，PDGF-BB和，型胶原含量均明显低于实验对照组(P0.01)和吡喹酮组(P0.01或P0.05)。结论和络舒肝胶囊对小鼠日本血吸虫肝纤维化具有较好的治疗作用，其远期抗肝纤维化效果优于吡喹酮。 关键词：和络舒肝胶囊； 日本血吸虫病； 肝纤维化； 血小板衍生生长因-BB； 胶原 Therapeutical Effects and Mechanisms of Heluoshugan Capsule on Schistosome-infected Mice with Liver Fibrosis

3、Abstract:ObjectiveTo study the therapeutical effects and mechanisms of Heluoshugan capsule on schistosome-infected mice with liver fibrosis. Compare the effects with praziquantel.MethodsEighty mice were divided into four groups: three groups were infected with Schistosoma japonicum. After eight week

4、s, one group was treated with Heluoshugan capsule 0.1capsule per mice every day for 8 weeks, one group was treated with praziquantel 500mg/(kgd) for 2 days and the other was taken as experimental control without any treatment. The fourth group was taken as normal control. Immunohistochemical technol

5、ogy and HE staining were applied to observe the content of hepatic PDGF-BB，type and type collagen in mice infected with S. japonicum before and after treatments.ResultsHeluoshugan capsule treatment significantly relieved pathologic damages in liver tissue with fibrosis, reduced the content of PDGF-B

6、B, type and type collagen compared to the experimental control (P0.01) and the group treated with praziquantel (P0.01or P0.05). ConclusionHeluoshugan capsule has better therapeutical effects on Schistosome-infected mice with liver fibrosis and the effects surpass praziquantel in the long run. Key wo

7、rds:Heluoshugan capsule; Schistosoma japonicum; Liver fibrosis; PDGF-BB; Collagen 日本血吸虫病的肝纤维化是导致门静脉高压、腹水和上消化道出血的主要原因,也是日本血吸虫病患者死亡的主要原因,目前国内外尚无理想的抗纤维化药物。文献报道, 和络舒肝胶囊有保护肝损伤及抗纤维化作用1，2,但未见其对血吸虫病肝纤维化作用的研究。本文研究和络舒肝胶囊对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中血小板衍生生长因-BB (platelet-derived growth factor, PDGF-BB)和、型胶原含量表达的影响, 观察肝组织病理变

8、化，并与传统杀虫药吡喹酮的作用对比，以评估和探讨和络舒肝胶囊抗日本血吸虫病肝纤维化的作用及其机理。 1 材料与方法 1.1 实验药物和络舒肝胶囊由山东通化东宝药业股份有限公司生产,批号001001。主要成分由香附、鳖甲、虎杖、莪术等27种中药材组成。规格:每粒相当于总药材0.93g。使用前用生理盐水配制；吡喹酮粉末由同济医学院寄生虫教研室提供。 1.2 小鼠血吸虫病肝纤维化模型的建立及动物分组雌性昆明小鼠80只,2025 g,46周龄(购自同济医学院动物实验中心)。将小鼠随机均分4组,每组20只:实验对照组：每只小鼠人工感染日本血吸虫尾蚴(购自武汉市血吸虫病防治研究所,下同)25条, 感染后以

9、生理盐水灌胃8周，1 ml/(只d); 吡喹酮治疗组:感染尾蚴8周后用吡喹酮灌胃治疗2 d,剂量为500 mg(kgd)-1， 溶于生理盐水，1 ml/(只d); 和络舒肝胶囊组：感染尾蚴8周后用和络舒肝胶囊灌胃治疗8周,剂量为0.1粒/(只d),溶于生理盐水，1 ml/(只d)；正常对照组：未感染血吸虫尾蚴，正常方法饲养16周。第16周末分别取各组小鼠肝组织作病理学检测和免疫组化分析。 1.3 检测项目、试剂及方法 1.3.1 肝组织切片HE染色光镜检查常规石蜡切片经HE染色后光镜下观察肝组织的病理变化。肝纤维化级别标准依病情轻重分3级,“+”为汇管区有轻度纤维组织增生,并向外伸展;“ +”

10、为较明显的纤维组织增生,并包绕肝小叶或与邻近汇管区纤维组织相互衔接;“+ ”肝组织纤维化;纤维组织沿门静脉分支高度增生,肝组织被挤压。 1.3.2 PDGF-BB和，型胶原的免疫组化检测 1.3.2.1 试剂兔抗小鼠PDGF-BB抗体(美国SANTACRUZ生产)、兔抗小鼠型及型胶原抗体、SABC试剂盒、包括正常山羊血清封闭液、生物素化山羊抗兔IgG、SABC试剂(链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物)、抗原修复液、复合消化液、DAB显色试剂盒等, 均购自武汉博士德生物工程有限公司。 1.3.2.2 免疫组化染色方法采用链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法:3%H2O2室温10 min灭活内源性酶,蒸馏水洗2min3次, 滴加复合消化液, 室温消化5 min, 0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加正常山羊血清封闭液,室温孵育10 min, 甩去多余液体,分别滴加兔抗小鼠PDGF-BB兔抗小鼠 型和 型胶原,37孵育30 min,0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加生物素化山羊抗兔IgG, 37孵育20 min,0.01 mol/L PBS洗2 min3次, 滴加SABC试剂, 37孵育20 min,0.01 mol/L PBS洗5 min4次, DAB显色,镜下控制反应时间,蒸馏水洗