气相色谱-质谱法对当归及其炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究

1、 炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究华永丽 郭延生 吴海燕 曲亚玲 *(甘肃农业大学动物医学院 , 兰州 730070摘 要 建立了一种基于气相色谱 -质谱技术 (GC -MS 的化 学 指 纹 图 谱 , 以 发 现 当 归 及 其 不 同 炮 制 品 潜 在 标 志物的方法 利用 GC -MS 获得当归及其不同炮制品挥发油化学指纹图谱 , 对产生的 75样 本 259变 量 数 据 进行归一化 修正 80%规则和数据缩放等方法预处理 , 通过正交校正偏最小二乘法 (OPLS 模式识别方法对样 品进行模式识别 , 根据模型的变量重要性因子 (VIP 和非参数检验结果筛选出 12个潜在标志

2、物 经相关分析 和结构鉴定 , 其中 11个化合物分别被鉴定为丁内酯 萜烯醇 6-丁基 -1, 4环庚二烯 2-壬酮 6-十一烷酮 2-甲氧 基苯酚 -榄香烯 4,5,6,7-四 甲 基 苯 酞 Z -丁 烯 基 酞 内 酯 亚 油 酸 甲 酯 1,7-异 丙 基 -4-甲 基 -1,4,5,6,7,7a -六 氢 -2H -茚 -2-酮 关键词 中药材 ; 炮制 ; 化学指纹 ; 气相色谱 -质谱联用 ; 当归 ; 标志物 2011-07-21收稿 ; 2011-11-24接受 本文系国家自然科学基金 (No.30972210 资助项目 *E -mail:weiym 1 引 言近年来 , 中

3、药化学指纹图谱已广泛应用于中药质量标准研究 涉及的方法包括 :高效液相色谱指纹图谱 13 气相色谱指纹图谱 4 薄层色谱指纹图谱 5 高速逆流色谱指纹图谱 6 毛细管电泳指纹图谱 7,8和红外光谱指纹图谱 9,10等 这些方法以 识别指纹图谱 的表现形式控制中药饮片及复方的质量 , 而建立 在中药指纹图谱基础之上的大量化学数据中 , 发现潜在的标志物对评价中药饮片质量是非常有意义的 当归为伞形科当归属植物当归 (A n ge l i c a s i n e s i s (Oliv.Diels 的干燥根 11, 主产于甘肃岷县 漳县 渭源 宕昌等 , 是甘肃的道地药材之一 12 当归中含有内酯类

4、 生物碱类 有机酸类或酚类以及中性挥发 油等多种成分 在中医药临床中 , 可根据实际需要 , 对当归采用不同的炮制处理 , 以发挥不同的疗效 当归常用炮制品有油当归 酒当归 土当归 当归炭等 13 本研究以当归及其不同炮制品为例 , 以气相色 谱 -质谱联用 (GC -MS 为分析方法 , 运用统计分析手段 , 建立从化学指纹图谱中发现不同炮制品潜在标 志物的方法 2 实验部分2. 1 仪器 试剂与材料 6890N/5973N型 GC -MS 气质联用仪 (美国 Aglient 公司 ; 挥发油提取器 (5mL -24#标准口 , 天津市 天玻玻璃仪器有限公司 , DM 内热式玻璃纤维电热套

5、(山东省永兴仪器厂 当归药材采自甘肃 , 由甘肃农业大学动物医学院魏彦明教授鉴定为 A . S i n e n s i s (表 1 石油醚 乙 醚 无水 Na 2SO 4等均为分析纯 , 实验用水为二次蒸馏水 炮制所用辅料黄酒 香油均购于当地超市 ; 土 粉由甘肃中医学院炮制教研室提供供炮制用辅料 2. 2 当归不同炮制品的制备 11, 13(1 酒当归 取当归片 , 加黄酒拌匀 , 稍闷 , 待酒被吸尽后 , 用文火炒至深黄色 , 微具酒香气时 , 取出放凉 , 每 100kg 当归 , 用黄酒 10kg ( 2 土当归 将土粉置锅内炒热 , 倒入当归片 , 微炒至当归片粘满细 土时 (称

6、为挂土 取出 , 筛去土粉 , 放凉即可 , 每 100kg 当归 , 用土粉 30kg ( 3 当归炭 取当归片 , 置锅 内 , 用中火炒至当归外表焦黑色 , 内部棕褐色 , 略具焦气 , 质枯脆时 , 取出放凉 ( 4 油当归 取净当归第 40卷 分析化学 (FENXIHUAXUE 研究 第期片 , 加入 3%的香油拌匀 , 闷润 , 文火炒至色泽加深 , 微显焦斑 , 待显油润有香气时出锅 , 晾凉 样品编号 见表 1表 1当归及不同炮制品标号及样品信息Table 1Origins of A n g e l i c a sinensis(oliv.Dielsand sample cod

7、e of processed products生当归标号 Unprocessed A n g e l i c a No. 甘肃采样点Source ofGansu采样时间Date of collectionCode of processed products酒当归Parchingwith -win当归炭Charring土当归Parchingwith soil油当归 Parching with oils1漳县金钟镇Jinzhongzhen, Zhangxian2009-09j1t1tu1y1s2岷县中寨镇Zhongzhaizhen, Minxian2009-09j2t2tu2y2s3岷县西寨镇Xi

8、zhaizhen, Minxian2009-09j3t3tu3y3s4岷县麻子川Mazichuan, Minxian2009-09j4t4tu4y4s5渭源田家河Tianjianhe, Weiyuan2009-09j5t5tu5y5s6渭源五竹Wuzhu,Weiyuan2009-09j6t6tu6y6s7渭源会川Huichuanzhen, Weiyuan2009-09j7t7tu7y7s8岷县禾沱乡Hetuoxiang, Minxian2009-09j8t8tu8y8s6岩昌阿坞乡Awuxiang, Tanchang2009-09j9t9tu9y9s10漳县大草滩乡Dachaotanxiang

9、, Zhangxian2009-09j10t10tu10y10s11岩昌哈达铺镇Hadapuzhen, Tanchang2009-09j11t11tu11y11s12漳县石川乡Shichuanxiang, Zhangxian2009-099j12t12tu12y12s13岷县十里乡Shilixiang, Minxian2009-09j13t13tu13y13s14渭源锹谷Qiaoguxiang, Weiyuan2009-09j14t14tu14y14s15渭源清水乡Qingshuixiang, Weiyuan2009-09j15t15tu15y152. 3挥发油提取(1水蒸汽蒸馏提取方法 按

10、中国药典 “ 2005年版一部 (附录 , 提取样品挥发油 , 以无水 Na 2SO 4脱 水 (2有机溶剂提取法 准确称取样品 200g , 粉碎后过 40目筛 , 加入 600mL 石油醚 , 50 回流提取 2次 , 合并回流提取液 , 浓缩得到黄棕色的挥发油 2. 4气相色谱 -质谱分析条件OV1701色谱柱 (50m 0.2mm 0.25mm 载气 :氦气 , 柱温采用程序升温 :以 8 /min升温速率从 40 升至 150 , 恒温 10min ; 以 4 /min从 150 升至 220 , 恒温 10min ; 以 2 /min升温速率从 220 升至 250 , 恒温 1m

11、in 汽化温度 280 , 尾吹 40mL/min质谱接口温度 250 , 电离方式 EI, 发射电流 150mA, 检测器电压 350V , 离子源温度 200 , 电子能量 70eV , 扫描范围 :33550AMU 2. 5指纹图谱建立和标志物的筛选图谱采用 中药色谱指纹图谱相似性计算 软件进行分析 , 建立指纹图谱 通过对不同产地的当归 及其不同炮制品挥发油进行 GC -MS 化学指纹图谱技术分析 , 从中筛选标志物 标志物的筛选分为数据 采集 数据预处理 数据分析 标志物确定等过程 142. 5. 1数 据 采 集 从 GC -MS 联 用 仪 Chemstation 采 集 的 信

12、 号 和 质 谱 数 据 以 ASCII 的 文 件 的 格 式 (*.csv 输出 , 导出的原始数据采用 Origin 8.0软件进行预处理 2. 5. 2G C -M S 数据预处理 采用 Origin 8.0软件进行对每一个峰进行校准并积分 , 图谱经过峰检测及 峰匹配后 , 得到每个样品的峰位对照表 , 此表由化学成分的保留时间 质量数和相应的峰面积组成 用峰面积归一化的方法计算当归及其炮制品 75个样品的峰组成的相对含量 2. 5. 3 模式识别 (样品分型 峰排列完成后产生一个由代谢物的峰面积组成的二维的数据矩阵 此矩阵被导入 SIMCA -P 软件 (瑞典 Umetrics A

13、B 公司 进行模式识别分析 , 使用 OPLS 方法建模 3 结果与讨论3. 1 当归及其炮制品样品挥发油提取方法的确定分别采取有机溶剂石油醚提取法和传统的水蒸汽蒸馏法提取样品中挥发油 (图略 水蒸汽蒸馏法 提取的挥发油收率为 0.20%0.34%, 而石油醚提取的挥发油收率为 0.79%1.04%; 两种方法提取其主 要成分均为 Z -藁本内酯 甲酸 1S -蒎烯 6-十一烷酮 罗汉柏烯 -雪松烯 2-甲氧基苯酚 (+ -香橙烯 -(甜 没药烯 (- -匙叶桉油烯醇 Z -丁烯基酞内酯 E -藳本内酯 , 它们在水蒸汽蒸馏法中占样品总峰面 积 94.28%, 在石油醚提取法中占总峰面积 87

14、.91% 后续实验采用有机溶剂石油醚提取当归中挥发油 3. 2 当归及不同炮制品测定及 G C -M S 指纹图谱的建立按上述 GC -MS 分析条件测定 75份当归样品得其总离子流色谱图 , 见图 1 将色谱图导入 中药色 谱指纹图谱相似性计算 软件 , 生成 对照图谱 , 计算出 15个样品与对照谱图的相似度 结果表明 , 甘 肃不同产地同一炮制品样品色谱峰基本相似 , 相似度均大于 0.900 除当归炭以外 , 其它炮制品之间差 异不显著 , 见表 2 图 1 75个当归样品的 GC -MS 指纹图谱 Fig.1 GC -MS fingerprint chromatograms of 7

15、5samples a:当归 (UnprocessedA n g e l i c a ; b :酒当归 (ParchingA n g e l i c a with wine ; c:油当归 (ParchingA n g e l i c a with spice oil ; d:土 当归 (ParchingA n g e l i c a with soil ; e:当归炭 (CharredA n ge l i c a 表 2 当归及不同炮制品之间相似度系数Table 2 Similarity comparison of the chromatographic pattern between Ang

16、elica processed products样品 SamplesSTYJTU S 0.951 0.019a0.749b 0.925b 0.934b 0.917b T 0.908 0.054a0.720b 0.622b 0.761b Y 0.935 0.003a0.956b 0.893b J 0.945 0.016a0.904b TU0.964 0.029aS :生当归 , T :当归炭 , Y :油当归 ; J :酒当归 ; TU :土当归 a :样品色谱与炮制品标准谱的相似度 ; b :标准谱之间的相似度 S:Unprocessed A n g e l i c a ; T:Charred

17、 A n g e l i c a ; Y:Parching A n g e l i c a with spice oil ; J:Parching A n g e l i c a with wine, TU:Parching A n g e l i c a with soil. a :The correlation coefficient of each chromatogram to themselves simulative mean chromatogram, mean S.D. ; b :The correlation coef -ficient between mean chroma

18、tograms.-3. 3 标志物的筛选和确认采用 NIST AMDIS 软件分析筛选出的 EI -MS 质谱信息 通过对此检测到的代谢物的 EI 质谱碎片 和数据库中所存储的标准物质的质谱信息进行物质鉴定 用峰面积归一化的方法对比 75份当归样品 的峰组分的相对含量 , 得到 75(样本 259(变量 的峰表 根据 Bijlsma 等 15报道的缺失值处理方法 , 采 用修正 80%去除缺失值 , 即去除某一组 (生当归 当归炭 酒当归 油当归 土当归 中出现频率低于 80%的化学成分 , 得到 75(样本 186(变量 数据矩阵 将所得的数据矩阵按峰强度划分为大 中 小 3部分 响应大的离

19、子常在判断分析中占优势 , 从而屏蔽一些确实在各组之间差异明显但响应中等的离子 响应太小的离子由于分析方法的局限性通常测 量误差比较大 , 准确性欠佳 因此采用去除峰面积大于平均峰面积 10倍的大峰和小于平均峰面积 1/10的小峰的方法 , 计算每个样品总峰面积的平均值为 1.64 106, 平均每个样品可以检测到 134个峰 , 所以 认为平均峰面积是 1.22 104 去除在 5组中平均峰面积大于 1.22 105的 2个变量和平均峰面积小于平 均值的 54个变量 , 可以得到 75样品 130变量的数据矩阵 , 利用此矩阵进行判别分析 在 OPLS 模型中提取 VIP 值最大的前 17个

20、变量 (VIP 1.5 这 17个变量的载荷矩阵图中距原点 的距离均较大 (见图 2和表 3 , 表明它们对分类的贡献较大 对这 17 个变量和在模型识别之前因峰面图 2 正交校正偏最小二乘法分析当归及不同炮制品得分矩阵图 Fig.2 Orthogonal projection latent structure (OPLS score plot of Radix A n ge l i c a e Sinensis and their different processed products模型参数 :R 2X =0.311, R 2Y =0.930, Q =0.78 图中每一个点代表一个样品

21、, 1当归炭 ; 2土当归 ; 3酒当归 ; 4油当归 ; 5当归 Modeling Diagnostic :R 2X =0.311, R 2Y =0.930, Q =0.78. A :; 1, Charred A n g e l i c a ; 2, A n ge l i c a fried with soil; 3, A n g e l i c a fried with wine; 4, A n g e l i c a fried with spice oil; 5, Unprocessed A n ge l i c a . 积过大排除的 2个变量进行手动积分和非参数检验 , 验证这些变量

22、在 5组当归样品之间的统计差异 , 排 除检验结果中 p 0.05的 7个变量 通过对目标变量进行手动积分 , 并综合 VIP 值和非参数检验进行 标志物筛选 , 确定 12个变量为当归及不同炮制品之间的标志物 通过对比 , 在 12个变量中鉴定出 11种化合物 , 分别为丁内酯 萜 烯 醇 6-丁 基 -1, 4环 庚 二 烯 2-壬 酮 6-十一烷酮 2-甲氧基苯酚 -榄香烯 4,5,6,7-四甲基苯酞 Z -丁烯基酞内酯 亚油酸甲酯 1,7-异丙基 -4-甲基 -1,4,5,6,7,7a -六氢 -2H -茚 -2-酮 (见表 4和图 3 对模式识别 OPLS 模型中提取 VIP 值最大

23、的 17变量和在样品分型之前排除的 2个变量进行手动 积分 , 并对其进行非参数检验 , 结果见表 3 结果表明 , 当归炭中丁内酯 6-丁基 -1,4环庚二烯 2-壬酮 6-十一烷酮 -榄香烯 4,5,6,7-四甲基 苯 酞 1,7-异 丙 基 -4-甲 基 -1,4,5,6,7,7a -六 氢 -2H -茚 -2-酮 78.25min 的 待检化合物 亚油酸甲酯百分含量与生当归 油当归 酒当归和土当归差异明显 (p 0.05 , 这些化合物可 以作 为 当 归 炭 识 别 的 标 志 物 ; 而 生 当 归 中 萜 烯 醇 2-甲 氧 基 苯 酚 Z -丁 烯 基 酞 内 酯 和 保 留

24、时 间 为 78.25min 的化合物百分含量与炮制品之间差异明显 (p 0.05 , 可以作为生当归与其它 4种炮制品识别表 3 当归潜在标志物的正交校正偏最小二乘法分析结果Table 3 Feature index of OPLS results of different processed productsVIP 值 VI Pvalue 保留时间 Rention time(min峰面积归一百分含量 Percent content of peak area normalization (%当归炭 Charring 土当归 Parching with soil酒当归 Parching wit

25、h wine油当归Parching with oil生当归 Unprocessed化合物 Compound1.9816.060.01 0.010000丁内酯 Butyrolactone 1.6517.700.14 0.090.10 0.100.09 0.100.23 0.120.68 0.21萜烯醇 Terpinen -4-ol 2.5318.170.09 0.0800006-Butyl -1,4-cycloheptadiene 2.3018.321.19 0.830.21 0.120.15 0.130.30 0.070.22 0.122-壬酮 2-Nonanone 1.8524.430.27

26、 0.130.08 0.060.10 0.07006-十一烷酮 6-Undecanone 2.5631.941.0 0.200.86 0.161.43 0.231.44 0.367.03 0.702-甲氧基苯酚 2-Methoxy -4-vinylphenol 2.2236.023.42 0.710.21 0.100.92 0.190.17 0.050.12 0.08-榄香烯 -Elemene 1.5149.291.24 0.170000.40 0.164,5,6,7-四甲基苯酞 4,5,6,7-teramethyl phthalide 1.9354.907.65 0.87011.33 1.1

27、415.47 0.8522.14 1.98Z -丁烯基酞内酯 Z -butylidene phthalide1.6155.237.44 1.4827.09 4.6114.27 1.395.78 1.725.22 0.991,7-异 丙 基 - 1, 4, 5, 6, 7, 7a -六 氢 -2H -茚 -2-酮 -4-methyl -1, 4, 5,6,7,7a -inden -2-one 2.3778.2526.04 2.9800.46 0.3201.72 0.81未鉴定 Unknown1.7589.039.96 1.8418.09 2.9013.93 1.514.72 1.932.82 1

28、.14亚油酸甲酯 Methylinoleate表 4 潜在标志物的 GC -MS 检索结果 Table 4 Result of similarity searches were conducted in Library searching of organic mass spectrum峰号Peak No.保留时间 Rention time (minm /z 分子式Molecular formula 化合物 Compound相似度 Probability (% 116.0686C 4H 6O 2丁内酯 Butyrolactone89.45217.70154C 10H 18O 萜烯醇 Terpi

29、nen -4-ol 86.91318.17150C 8H 6O 丁基 -1, 4环庚二烯 6-Butyl -1,4-cycloheptadiene6-88.28418.32142C 9H 18O 2-壬酮 2-Nonanone 85.02524.43170C 11H 22O 6-十一烷酮 6-Undecanone 88.11631.94150C 19H 10O 22-甲氧基苯酚 2-Methoxy -4-vinylphenol 89.52736.02204C 15H 24-榄香烯 -Elemene 90.46849.29193C 12H 17O 24,5,6,7-四甲基苯酞 4,5,6,7-t

30、eramethyl phthalide 86.35954.90188C 12H 12O 2Z -丁烯基酞内酯 Z -butylidene phthalide 88.281055.23192C 13H 20O 1,7-异丙基 -4-甲基 -1,4,5,6,7,7a -六氢 -2H -茚 -2-酮 -4-methyl -1,4,5,6,7,7a -hexahydro -2H -inden -2-one 85.021178.25-未鉴定 Unknown-1289.03294C 19H 34O 2亚油酸甲酯 Methylinoleate87.38图 3 当归 GC -MS 色谱图 Fig.3 GC -

31、MS chromatograms of A n ge l i c 峰编号同表 4(Peak numbers are the same as inTable 4 的标志物 ; 土当归中 1,7-异丙基 -4-甲基 -1,4,5,6,7,7a -六 氢 -2H -茚 -2-酮和亚油酸甲酯百分含量明显高于其它 炮制品 (p 0.05 , 可 以 作 为 土 当 归 的 识 别 标 志 物 挥发油类的成分通常采用 GC -MS 方法测定 , 而香豆 素类 黄 酮 类 生 物 碱 类 等 可 用 LC -MS 检 测 本 研 究以当归中挥 发 油 为 主 , 对 于 中 药 中 常 见 的 难 挥 发

32、和易分解的组 分 可 能 不 容 易 检 出 , 尚 有 待 于 使 用 其 它方法进一步分析 本研究基于 GC -MS 分 析 平 台 建 立 了 从 化 学 指 纹图谱中筛选生当归及其不同炮制品中标志化学成 分的方法 通过 OPLS 方法建立的模型分析 , 生当归 和当归炭 酒当归 油当归 土当归的 GC -MS 的化学 第期华永丽等 :气相色谱 -质谱法对当归及其炮制品挥发油的指纹图谱和潜在标志物研究1,7此处为逗号分 析 化 学 第 40 卷 成分具有明显差异 , 化学成分 发 生 了 显 著 变 化 , 从 中 筛 选 12 个 变 量 ( 12 个 化 合 物 被确认为潜在标志 物

33、, 可以作为当归不同炮制品鉴定的标志性产物 R e f e r e n c e s ( : 1 T i a nR T, X i ePS, L i u H P. J. C h r o m a t o r. A, 2 0 0 9, 1 2 1 6 1 1 2 1 5 02 1 5 5 g ( : 2 J i nY, L i a n F uQ. JC h r o m a t o rA , 2 0 0 9, 1 2 1 6 1 1 2 1 3 62 1 4 1 Xiao gT, g Y S, Feng J T, Ke Y X, Liang X M , , , 3 YU X i a o M e i XU

34、 H o n Y i n L I AN GY i Z e n Y IL u n C h a o . N a t u r a l P r o d u c tR e s e a r c ha n dD e v e l o e n t, 2 0 0 7, g g pm ( : 1 9 6 1 0 0 91 0 1 2 ( : 4 R u a nG H, L iG K. J. C h r o m a t o r. B, 2 0 0 7, 8 5 0 1 2 2 4 12 4 8 g ( : 禹晓梅 ,徐红颖 ,梁逸曾 ,易伦朝 .天然产物研究与开发 , 2 0 0 7, 1 9 6 1 0 0 91

35、0 1 2 ( : 5 C u iSF, F uB Q, F r a n kSCL. J. C h r o m a t o r. B, 2 0 0 5, 8 2 8 1 2 3 34 0 g ( : 6 G u M, Z h a n S uZG. J. C h r o m a t o r. A, 2 0 0 4, 1 0 4 1 1 2 2 3 92 4 3 gGF, g , ( : 7 S u nG X, S h iC Y. J. C h r o m a t o r. S c i . 2 0 0 8, 4 6 5 4 5 44 6 0 g , ( : 8 Y uK, G o n L i nZ

36、Y, C h e n J. P h a r m a c e u t . B i o m e d. 2 0 0 7, 4 3 2 5 4 05 4 8 gYF, gY. ( : 徐永群 ,孙素琴 ,袁子民 .分析化学 , 2 0 0 2, 3 0 1 2 1 2 3 11 2 3 3 ( : 董 彬 ,孙周胡 .光谱学与光谱分析 , 2 0 0 2, 2 2 2 2 3 22 3 4 , , , ( : 9 XU Y o n Q u n S UNS u Q i n YUANZ i M i n . C h i n e s eJ. A n a l . lC h e m. 2 0 0 2, 3 0 1

37、 2 1 2 3 11 2 3 3 g , ( : 1 0 D ON GB i n S UNZ h o u H u . S e c t r o s c o n dS e c t r a lA n a l s i s, 2 0 0 2, 2 2 2 2 3 22 3 4 g p p ya p y 1 1 S t a t eP h a r m a c o o e i aC o mm i t t e eo ft h eP e o l e sR e u b l i co fC h i n a . P h a r m a c o o e i aC o mm i s s i o no h eP e o l

38、 e s p p p p ft p : , R e u b l i co h i n a. 2 0 0 5e dP a r t B e i i n C h e m i c a l I n d u s t r r e s s 2 0 0 5: 8 9 j g yP p fC 国家药典委员会 .中国药典 ( 化学工业出版社 , 2 0 0 5 版一部 .北京 : 2 0 0 5: 8 9 : 肖小河 ,夏文娟 ,陈善墉 .中国中药杂志 , 1 9 9 5, 2 0( 6 3 2 33 2 6 , , , : 1 2 X I A OX i a o H e X I AW e n J u a n C H

39、 E NS h a n Y o n . C h i n a J o u r n a l o h i n e s eM a t e r i aM e d i c a, 1 9 9 5 2 0( 6 3 2 3 3 2 6 g fC : 1 3 G a n s uP r o v i n c eH e a l t hD e a r t m e n t . G a n s uP r o c e s s i n t a n d a r do fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e . 1 s tE d . L a n z h o u p gS

40、 , G a n S uP e o l eP u b l i s h e r s 1 9 9 9: 5 3 p 甘肃省卫生厅 .甘肃省中药炮制规范 .兰州 :甘肃人民出版社 , 1 9 9 9: 5 3 , : 1 4 R o s t o nG, D a v i dB,A eK.M e t a b o l o m i c s 2 0 0 7, 3( 3 2 3 12 4 1 y g ( : 1 5 B i l s m aS, B o b e l d i kL,V e r h e i A n a lC h e m, 2 0 0 6, 7 8 2 5 6 75 7 4 j jE. D e t e

41、r m i n a t i o no fP o t e n t i a lB i o m a r k e r s i nV o l a t i l eO i l s E x t r a c t e df r o mA n e l i c aa n dI t sD i f f e r e n tP r o c e s s e d g P r o d u c t sb a sC h r o m a t o r a h M a s s yG g p y S e c t r o m e t r i n e r r i n t p yF g p ( S c h o o l o e t e r i n a

42、 r e d i c i n e, G a n s uA r i c u l t u r eU n i v e r s i t L a n z h o u7 3 0 0 7 0 fV yM g y, , ,WU H ,QU Y ,WE HUA Y o n L i GUO Y a n S h e n a i Y a n a L i n IY a n M i n g g g - d i f f e r e n tp r o c e s s e s f r o mA n e l i c ah a sb e e nd e v e l o e d . T h e c h e m i c a l f i

43、n e r r i n t so fG C M Sh a v eb e e n g p g p A b s t r a c t AG C M St e c h n i u ef o ri d e n t i f i n o t e n t i a lb i o m a r k e r si nv o l a t i l eo i l se x t r a c t e db i v e q y gp yf a c c o r d i n oV I Pv a l u e a n ds i n i f i c a n t t e s t . T h e e l e v e no f t h eb i o m a r k e r sw e r e i d e n t i f i e da sb u t r o l a c