药用植物组培技术之一---配制母液PPT课件

1、组织培养组织培养技术技术2021/6/71实验 药用植物组织培养技术 实验一实验一 培养基母液配制培养基母液配制 实验二实验二 诱导愈伤培养基配制和灭菌诱导愈伤培养基配制和灭菌 实验三实验三 外植体接种技术外植体接种技术 实验四实验四 接种效果观察，分化培养基配制接种效果观察，分化培养基配制 实验五实验五 分化接种分化接种组织培养组织培养技术技术2021/6/72植物组织培养：植物组织培养： 在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组在无菌和人为控制外因条件下，将离体器官、组织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基上，使其脱分化产生愈伤组织，

2、进而分化出器官并长上，使其脱分化产生愈伤组织，进而分化出器官并长成完整植株的方法。成完整植株的方法。组织培养组织培养技术技术2021/6/732021/6/74组织培养组织培养技术技术2021/6/75实验一培养基母液的制作实验一培养基母液的制作实验目的：实验目的： （一）掌握培养基的化学组成；掌握（一）掌握培养基的化学组成；掌握MS培养基的配方组培养基的配方组成；成； （二）熟练掌握常用培养基母液的制备方法。（二）熟练掌握常用培养基母液的制备方法。组织培养组织培养技术技术2021/6/76实验原理实验原理水分水分无机物质无机物质有机物质有机物质植物生长调节物质植物生长调节物质固相支持物固相支

3、持物 培养基提供植物生长所需的营养成分，满足植物培养基提供植物生长所需的营养成分，满足植物正常生长发育的需要。主要包括正常生长发育的需要。主要包括组织培养组织培养技术技术2021/6/77大量元素大量元素 所需浓度大于所需浓度大于0.5mmol/L0.5mmol/L大量元素包括大量元素包括N, P, S , N, P, S , Ca, K, MgCa, K, Mg。培养基中加入量最多的是。培养基中加入量最多的是N N，一般以硝酸盐或氨，一般以硝酸盐或氨盐。盐。1. 1. 无机化合物无机化合物微量元素微量元素 植物所需的微量元素有植物所需的微量元素有FeFe、CuCu、ZnZn、B B、 MnM

4、n、Al Al Mo Co Mo Co 组织培养组织培养技术技术2021/6/782. 2. 有机化合物有机化合物 有机物质主要指维生素类物质、糖类物质。有机物质主要指维生素类物质、糖类物质。a a、维生素类物质、维生素类物质 维生素类物质在酶系统中有催化功能。维生素类物质在酶系统中有催化功能。 硫胺素（硫胺素（VB1VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关，是所有植与愈伤组织的产生和生活力有关，是所有植物组织培养初期需要的维生素。物组织培养初期需要的维生素。 盐酸吡哆醇（盐酸吡哆醇（VB6VB6）促进根的生长。促进根的生长。 烟酸（烟酸（VB3VB3，又称维生素，又称维生素PPPP）促进胚的发育

5、。促进胚的发育。 泛酸钙（泛酸钙（VB5VB5）、生物素（）、生物素（VHVH）、钴胺素（）、钴胺素（VB12VB12）、叶酸）、叶酸（VBcVBc），），VcVc等。等。 组织培养组织培养技术技术2021/6/79b b、糖类、糖类 糖在培养基的作用：糖在培养基的作用：1 1）、为细胞提供合成新物质的碳骨架）、为细胞提供合成新物质的碳骨架 2 2）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3 3）、维持渗透压）、维持渗透压 蔗糖蔗糖是广泛应用的一种是广泛应用的一种碳源，碳源，一般浓度一般浓度1-5%1-5%。 葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳

6、源。组织培养组织培养技术技术2021/6/710C.C.天然有机物天然有机物 一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的促进作用。促进作用。组织培养组织培养技术技术2021/6/711 无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化。胞分裂、脱分化和再分化。植物生长调节剂植

7、物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。是外源的调节植物生长发育的物质。植物激素植物激素是在植是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物。物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物。 主要是生长素和细胞分裂素，有时用主要是生长素和细胞分裂素，有时用GA3GA3，ABAABA。3 3、植物生长调节物质、植物生长调节物质组织培养组织培养技术技术2021/6/712生长素类：生长素类： 诱导细胞分裂和根的分化诱导细胞分裂和根的分化1 1）吲哚类：）吲哚类：IAAIAA（吲哚乙酸）（吲哚乙酸）、 IBAIBA（吲哚丁（吲哚丁酸）、酸）、IPAIPA（吲哚丙酸）（吲哚丙

8、酸）2 2）萘酸类：）萘酸类： NAANAA（萘乙酸）（萘乙酸）3 3）苯氧羧酸类：）苯氧羧酸类：2,4-D2,4-D（2,4-2,4-二氯苯氧乙酸）二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T2,4,5-T（ 2,4,5-2,4,5-三氯苯氧乙酸）、三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T2,4,5-TP P（ 2,4,5-2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。三氯苯氧丙酸）等。 其中其中IBAIBA和和NAANAA广泛用于生根，并能与细胞分裂素广泛用于生根，并能与细胞分裂素互作促进芽的增殖。互作促进芽的增殖。2.4-D 2.4-D 对于愈伤组织的诱导对于愈伤组织的诱导和生长有效。和生长有效。组织培养组织培养技术技术20

9、21/6/713A A：NAA 0mg/LNAA 0mg/L，芽（少），根（无），芽（少），根（无） B B：NAA 0.1mg/LNAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量），芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C C：NAA 5.0mg/LNAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量) )A B C组织培养组织培养技术技术2021/6/714b. 细胞分裂素分裂素 是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 6-糠基氨糠基氨基嘌呤基嘌呤KT）、）、6-苄基氨基嘌呤（苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉

10、米素和玉米素（ZT）等。其中最）等。其中最常用的是常用的是6BA。 功能：功能：1、促进细胞的分裂和分化、促进细胞的分裂和分化2、诱导芽的分化、诱导芽的分化3、促进侧芽的萌发和生长、促进侧芽的萌发和生长4、抑制衰老、抑制衰老组织培养组织培养技术技术2021/6/715A BA：6-BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量），芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量）B：6-BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量），芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量）组织培养组织培养技术技术2021/6/716如何控制植物细胞分化如何控制植物细胞分化 分裂素分裂素/

11、 /生长素的比例是控制芽和根形成的生长素的比例是控制芽和根形成的一个重要条件一个重要条件 比例高时比例高时产生芽产生芽, ,比例低时比例低时产生根产生根组织培养组织培养技术技术2021/6/717c.c.赤霉素（赤霉素（GAGA3 3）1 1、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效，、诱导茎的细胞伸长，对矮生型植物恢复成高生型特别有效，对根无效对根无效2 2、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用、对生长素和细胞分裂素的活性有增效作用 注：不耐热，应采用过滤灭菌加入注：不耐热，应采用过滤灭菌加入d. d. 脱落酸（脱落酸（ABAABA）生理作用：生理作用：1 1、抑制蛋白质的合成、抑

12、制蛋白质的合成2 2、抵消和抑制生长素、细胞分裂素、抵消和抑制生长素、细胞分裂素、GAGA的作用的作用3 3、诱导休眠、促进衰老和脱落、诱导休眠、促进衰老和脱落 组织培养组织培养技术技术2021/6/718 （4 4）固化剂和悬浮剂）固化剂和悬浮剂a a、固化剂、固化剂 琼脂、琼脂糖（用于原生质体、细胞培养及某些作物的花琼脂、琼脂糖（用于原生质体、细胞培养及某些作物的花药培养）药培养） 琼脂的用量一般在琼脂的用量一般在4-10g/4-10g/L L。 琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。琼脂以颜色浅、透明度好、洁净的为上品。b b、悬浮剂、悬浮剂 FicollFicoll（聚蔗糖）（聚蔗糖）

13、组织培养组织培养技术技术2021/6/719（三）、培养基的配制（三）、培养基的配制 试验课上讲试验课上讲1.1.贮备液（母液）的配制贮备液（母液）的配制 为什么要配制母液？为什么要配制母液？ 1 1）、方便）、方便 2 2）、准确（有些成分量太小）、准确（有些成分量太小） 以以MSMS培养基配制为例，包括培养基配制为例，包括大量元素、微量元素、铁盐、大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、生长调节物质母液。有机物质、生长调节物质母液。组织培养组织培养技术技术2021/6/720组织培养组织培养技术技术2021/6/721组织培养组织培养技术技术2021/6/722组织培养组织培养技术技术2021/6/723注意：注意： 所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有母液都要贴上标签，注明名称、配制倍数、日期，所有的母液都应