蛋白质定量试剂盒-超敏型BCA法

1、 技术咨询电话：400-607-9999蛋白质定量试剂盒-超敏型BCA法Micro BCA Protein Assay Kit货号：P040004产品及特点本产品是在BCA 法蛋白定量试剂盒基础上改进的超敏蛋白定量试剂盒，尤其适合对低浓度的蛋白质溶液进行定量分析。它具有下列特点。1. 超敏感，最低检测浓度为 0.5 ug/mL。2. 线性范围在 0.520 g/mL，尤其适用于低浓度的样品。3. 对大多数离子型和非离子型去污剂不敏感，但对 Cu 的还原剂和螯合剂敏感。4. 比 Lowry 法更加简单快捷，45 分钟内完成测定。5. 试剂稳定，室温可以放置两年，工作液 1 天内有效。6. 终产物

2、稳定，检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。7. 最短可以检测双肽，所以适合于分子量较小的蛋白质，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白质。8. 有常规（普通试管）和微量（96 孔板）两种检测模式。规格及成分成份 500次包装溶液 A 250 mL 溶液 B 250 mL 溶液 C 10 mL BSA标准品（2 mg/mL） 1 mL×4使用手册 1份运输及保存 常温运输和保存（但BSA 标准品需要-20保存），有效期一年。使用方法一：96 板操作模式1、取一块 96 孔板，先进行编号（编号可以根据样品数增加），并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品

3、的缓冲液（将BSA 稀释到0.04ug/uL）：编号BSA 标准（0.04 ug/uL）（uL）待测样品（uL）样品缓冲液（uL）总体积（uL）蛋白含量（ug）00015015001501451500.221001401500.432001301500.844001101501.65600901502.46800701503.271000501504.01 号样品0？uL补到150150未知N号样品0？uL补到150150未知2、计算 BCA 工作液需要量：根据样品数量（包括制备标准曲线的样品的数量）和每个样品需要0.15 mL BCA 工作液的比例，计算所需BCA 工作液的用量。3、配制 B

4、CA 工作液：先将溶液A、溶液B 和溶液C 按50：48：2 的比例混合，所得溶液即BCA 工作液。比如：5 ml 溶液A + 4.8 mL 溶液B +200uL 溶液C。4、将 1 倍体积（即150 uL）的BCA 工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96 孔板放在振荡器上振荡30 秒混匀。5、60放置 1 小时。6、冷至室温，10 分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，光吸收值会慢慢升高，每10 分钟会升高2.5%左右。7、在 562 nm 下比色测定其余样品的光吸收。如酶标仪没有562 nm 的设定，可用接近的波长检测，如570 nm。8、将编号为 0 号

5、的样品（对照）的读数从其余所有样品（包括0 号样品，其读数变成零）中扣除。9、以 0-7 号样品的BSA 含量（ug，见上表最右行）为横坐标，以上一步得到的这几个样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA 的标准曲线。10、再将待测样品的吸光值（减去0 号样品的读数后）标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量（ug）就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积（20 uL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：ug/uL）。二：试管测定模式1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时 BSA 标准品的使用量从低到高改为0、25、50、100、200、300、400、500 uL，样

6、品的总体积从200 uL 改为1 mL，BCA 工作液的用量从0.15 mL 改为1 mL。三：注意事项1、加工作液后也可以在室温放置 2 小时，或60放置30 分钟。BCA 法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60孵育60 分钟。2、待测样品浓度在 202000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。3、在一定浓度范围内 BCA 法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：名称 在此浓度下不受影响 Ammonium Sulfate 1.5 M Brij-35 5.0% CHAPS 5.0% EDTA 10 mM Hepes 100 mM Glycine, pH 2.8 100 mM Guanidine HCl 4.0 M Tween 20、60、 80 5.0% SDS 5.0% Sodium Acetate pH 5.5 200 mM Sodium Chloride (NaCl) 1.0 M Sucrose 40% Sodium Hydroxide (NaOH) 0.1 M NP-40 5.0% Triton X-100 5.0% Urea 3.0 M 4、本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA 浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1m