超声波法碱水提取叶下珠黄酮的研究(一)

1、超声波法碱水提取叶下珠黄酮的研究(一)    作者：刘榕城，胡炜，邓光辉，罗兆学，黄树坚，崔连艳【摘要】 目的研究超声波法碱水提取叶下珠黄酮的工艺。方法以pH、处理时间、料液比为主要考察因素，以浸取样品中总黄酮的含量为主要考察指标，确定最佳提取条件。结果最佳提取工艺为：Ca(OH)2的pH值为11，超声波提取时间为40 min，料液比为150。结论与传统的乙醇提取法进行对比显示，用超声波提取法具有快速、高效等特点。 【关键词】 超声波；叶下珠；黄酮Abstract：ObjectiveTo determine total flavone in Phylla

2、nthus urinaria L. by VIS Spectrophotometry. Methods Using the content of flavone as indexes, the effects of pH, extraction time, w/v were eva luated by orthogonal experiments. ResultsThe optimum conditions were as follows: pH=11, 40 min, w/v=1/40. ConclusionThe method of ultrasonic extraction has a

3、higher extraction rate and efficiency than traditional ethanol extraction.Key words：Ultrasonic waves; Phyllanthus urinaria L.; Flavone叶下珠(别名珍珠草)为大戟科叶下珠属中的一种草本植物，具有清肝明目、解毒消肿的功效，常用于治疗腹泻下痢、尿路感染、小儿疳积、肝炎、肾炎等疾病1。叶下珠中含有多种黄酮类化合物。黄酮类成分有降压、降血脂、增加冠脉流量、强心、抗心律不齐等药理作用2。目前对中草药中黄酮成分的提取广泛使用的乙醇提取法，采用索氏提取器回流提取3。但此方法存在

4、提取温度较高、提取时间长、得率不高等缺点。超声技术应用于提取叶下珠中黄酮的研究尚未见报道。本文在超声波条件下，采用正交实验设计考察了碱性水溶液提取叶下珠中黄酮的提取工艺。1 材料与方法1.1 材料与仪器JP600型变辐杆式超声波萃取器（武汉嘉鹏电子有限公司）；916型紫外-可见分光光度计（澳大利亚GBC公司），离心沉淀器，分析天平（上海第三分析仪器厂），循环水式多用真空泵。叶下珠购自广西南宁。芸香叶苷即芦丁（中国生物制品鉴定所）。1.2 方法1.2.1 芦丁标准曲线的绘制采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法4。精密称取芦丁42.5 mg，用乙醇溶解并稀释至250 ml，作为芦丁标准液。精确量取1，2

5、，3，4，5，6 ml芦丁标准液，分别置于25 ml容量瓶中，各加水至6 ml，加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀,放置6min，加10%硝酸铝溶液1 ml，混匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以试剂空白作参比，用1 cm比色皿在500 nm波长处测定吸光度。所得数据经回归处理，回归方程为Y=10.231A+0.0053，r=0.999 3。芦丁浓度在0.0201.212 mg/ml范围内具良好的线性关系。1.2.2 叶下珠中总黄酮含量测定将干燥剪碎的叶下珠5.0 g置于索氏提取器中，加入300 ml乙醇索氏提取3 h，将提取液过滤，残渣用乙醇洗

6、涤3次，合并滤液，定容于250 ml，放置2 h后，离心沉淀20 min。取上层清液1 ml按亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度，计算叶下珠中总黄酮含量为1.32%(即每100 g叶下珠中含总黄酮1.32 g)。1.2.3 超声波碱水提取叶下珠中黄酮的方法称取5.0 g剪碎的叶下珠于400 ml烧杯中，按一定的料液比加入一定pH值的碱性Ca(OH)2溶液提取剂，浸泡24 h，超声波提取一定时间后过滤，残渣用相应的提取剂洗涤3次，合并滤液，定容于250 ml，放置2 h后，离心沉淀20 min，取上层清液1 ml亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度，计算总黄酮提取率。2 结果2.1 提取剂对黄

7、酮提取率的影响常温下，料液比1/40，分别用乙醇、水、碱性水溶液（pH=11）浸泡24 h，超声波处理30 min，结果表明，用碱性水溶液有较高的提取率。对比了Ca(OH)2和其他碱性水溶液，因为植物中的果胶、黏液和酸性多糖等水溶性物质能与Ca(OH)2中钙离子生成难溶于水的沉淀被除去，对黄酮的提取能够收到较好的效果。所有采用碱性Ca(OH)2溶液作为提取剂。2.2 pH值对黄酮提取率的影响常温下，料液比1/40，不同pH值条件下，超声波处理30 min。结果见图1。从图1可知，在pH为11时，有较高的提取率。pH小于7，黄酮提取率较低。pH大于13，黄酮的母体产生裂解，提取率也大幅度降低。2

8、.3 超声波处理时间对黄酮提取率的影响常温下，pH为11的碱水液，料液比1/40，搅拌条件下做不同超声波处理时间对黄酮提取率的影响实验。结果见图2。提取时间在2040 min之间提取率随时间的延长而提高，40 min后逐渐趋于平衡。2.4 超声波处理正交实验结果与最佳提取条件的确定为了获得以碱性Ca(OH)2溶液作为提取剂时，超声波提取叶下珠中黄酮的最佳工艺条件，利用正交法“均衡分散”的特点，以不同的pH，不同的处理时间，不同的料液比为主要考察因素，以浸取样品中总黄酮的提取率为主要考察指标，确定最佳提取条件。表1 正交因子水平（略）按表1的正交因子水平设计L9(34)正交实验，实验设计与结果见

9、表2。表2 正交实验方案及实验结果（略）从表2的正交实验数据及计算结果可知，极差值反映的因子影响顺序为A>C>B，pH对提取率影响最大，其次是料液比，超声波提取时间的影响最小。对于A因素有K3>K2> K1，对于B因素有K2=K3> K1，对于C因素有K3>K2> K1，由此可确定最佳条件为A3B2C3，即pH为11，料液比为1/50，超声波作用时间40 min。按A3B2C3条件进行3次平行实验。结果见表3。表3 A3B2C3条件时超声波作用下黄酮提取率（略）由表3知：A3B2C3条件下黄酮提取率确实高于表2中每一项实验结果，A3B2C3为最佳选择。

10、2.5 超声波提取法与常规索氏提取法的比较A3B2C3优化条件下超声波提取与传统索氏回流提取结果见表4。表4 索氏提取与A3B2C3下超声波提取结果比较（略）由表4可知，超声波提取40 min得率比常规索氏提取高，处理时间比索氏提取大大减少。上述结果说明，利用超声波提取，可以大量节省提取时间，且能达到较高的提取率。因此，用超声波提取法是一种较为理想的方法。它与目前公认效果较好的索氏提取法相比，具有省时、高效的优点。3 结论超声波能够提高提取黄酮的效率，达到省时、高效的目的。实验范围内，超声波提取叶下珠中黄酮的最佳工艺条件为：碱性Ca(OH)2溶液pH为11，超声波作用时间40 min，料液比为1/50。此时提取率为1.95%。【参考文献】1罗文继,阮细发,杨义雄.