黄芩总黄酮提取技术及其抑菌活性研究(一)

1、黄芩总黄酮提取技术及其抑菌活性研究(一)    【摘要】 目的研究黄芩中的黄酮提取方法和抗菌活性。方法利用超声波技术通过正交实验提取黄芩中的黄酮，杯碟法对其进行抗菌活性的研究。结果超声波最佳的提取条件为功率235 W，60%乙醇，料液比为120，提取时间为9 min，黄酮提取率为10.35%。该提取液对金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉都有明显的抑菌效果，最低抑菌浓度分别为：1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小杀菌浓度为：1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。结论超声波技术是提取黄

2、芩黄酮的高效方法，黄芩具有较强的抗菌活性。 【关键词】 超声波提取 黄芩 黄酮 抑菌活性黄芩Scutellaria baicalensis Georgi为常用中药之一，是唇形科植物黄芩的干燥根1。其有效成分主要为黄酮类化合物。据报道，黄芩黄酮是一类生物活性较强的天然产物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、降血压等作用2，3。超声波具有加速药材中有效成分溶解、缩短提取时间、提高有效成分的提取率等优点4，因此，本文通过正交实验探讨超声波提取黄芩黄酮的最佳提取条件，为大规模高效生产黄芩黄酮提供了有力的理论依据。黄芩黄酮的体外抗菌的研究较少，本研究将最佳提取条件下的黄酮提取液对一些细菌和真菌进行

3、了抑菌实验，旨在开发一种天然的抑菌剂，并为临床用药提供理论依据。1 材料黄芩购于湖南长沙康尔佳药店，粉碎过40目筛，80烘干备用。芦丁对照品购于中国上海医药化学试剂公司；供试菌种金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉由本实验室保存并培养。2 方法2.1 提取方法超声波提取法：称取黄芩粉5.0 g，采用L9（34）按表1方法进行超声波提取，提取液过滤，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。表1 因素水平（略）对比实验：煎煮法：称取黄芩粉5.0 g，加水100 ml，浸泡30 min，煮沸后，文火煎60 min，过滤，共煎煮两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。连续回流提取法：称

4、取黄芩粉5.0 g，加60%乙醇100 ml，水浴回流90 min，过滤，共提取两次，合并滤液，定容至100 ml，摇匀备用。2.2 标准曲线的制作称取在105下干燥恒重的芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml使之成为浓度为1 mg·ml-1的芦丁标准品溶液，作为储备液备用。量取上述溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 ml，分别加水至3 ml，加5%的亚硝酸钠溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 ml，摇匀，放置6 min，后加5%的氢氧化钠溶液2.5 ml，混匀，放置15 min后蒸馏水定容10 ml，用紫外分光

5、光度计在510 nm处测其吸光度，得到回归方程为：A9.933 9C0.001 73（R2=0.997 5）。2.3 黄芩黄酮的抑菌实验采用杯碟法测定其抑菌作用，取浓度106107CFU/ml的各种待试菌悬液0.2 ml，与相应灭菌培养基15 ml混合制成混菌平板，凝固后，在平板上等距离放入4个灭菌牛津杯，每个菌设置3个重复，一个无菌生理盐水为对照，取0.1 ml黄酮提取液加入牛津杯中，细菌37，真菌28培养1824 h后，移去牛津杯，量取抑菌圈直径，直径越大抗菌活性越强。2.4 最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定用无菌水将黄芩黄酮提取液稀释，终浓度分别为4，2，1，0.5，

6、0.25 mg·ml-1。取2 ml提取稀释液至15 ml培养基，混匀后，倒入平板，凝固后加入100 l 106107 CFU/ml的菌液，涂布均匀，放至37/28培养24 h后观察结果。菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度即MIC。培养48 h后，菌落被完全抑制的最高稀释度提取物浓度为MBC。表2 正交实验结果（略）利用L9（34）正交实验法优化黄芩黄酮提取条件结果（见表2），各因素对实验结果影响顺序为C>A>B>D，即乙醇浓度对黄酮提取率的影响效果最为显著，其次是超声波功率。最佳提取条件为A3B3C2D3，即在功率为235 W，料液比为120，60%乙醇，提取时

7、间为9 min条件下黄芩提取液黄酮含量最高。以该最佳提取条件进行验证实验，黄芩黄酮提取率为10.35%，RSD0.70%（n6），因此该最佳提取条件是可行的。2.5 提取方法的比较结果见表3。由表3可知，超声波提取方法的提取率明显高于其它两种方法，且提取时间最短，提取溶剂用量最少。表3 不同的提取方法与黄酮含量的关系（略）2.6 抑菌圈的确定结果见表4。由表4可以看出黄芩黄酮提取液对金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉都有较强的抑菌效果。而且对细菌的抑制效果强于真菌。表4 黄芩黄酮提取液的抑菌效果（略）2.7 最低抑菌浓度和最低杀菌浓度的确定结果见表5。由表5可知，黄芩黄酮对金色葡萄

8、球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉的最低抑菌浓度分别1.0，2.0，1.0，0.5，1.0 mg·ml-1；最小杀菌浓度为1.0，2.0，2.0，2.0，1.0 mg·ml-1。表5 黄芩黄酮最低抑菌浓度和最小杀菌浓度（略）3 讨论目前，黄芩总黄酮的提取方法有水煎煮法、乙醇提取法、超声波法、超滤法、微波提取法、高速逆流色谱法、亚临界水提取法等多种方法5。本实验用水煎煮法、乙醇回流提取法、超声波提取法比较黄芩总黄酮的提取率，结果表明，超声波提取法的效率最高，达10.35%，提取时间最短。黄酮类化合物是药用植物的一大类有效成分，具有多种生物活性，主要的作用之一是抑菌或杀菌。本实验结果表明，黄芩黄酮对真菌的有一定的抑制作用，是一种天然的抑菌剂，有望用于食品保藏，抗菌消炎等，为黄芩的综合利用开辟了新的途径。【参考文献】1宋双红,张媛.HPLC测定不同产地黄芩中黄酮化合物的含量J.中国中药杂志,2006,31(7):598.2关晓燕,杨 洁.黄芩药理研究概况J.中国医药信息,2006,23(4):21.3姚干,何宗玉,方积年.黄芩总黄酮提取及纯化工艺的研