冠心病论文门冬氨酸钾镁的抗心律失常作用及其可能的抗氧化损伤机

1、冠心病论文|门冬氨酸钾镁的抗心律失常作用及其可能的抗氧化损伤机制的临床探索-写手联盟    来源:摘要目的：探讨门冬氨酸钾镁（潘南金）对冠心病心绞痛和冠心病心律失常病人的氧化应激态及脂质氧化损伤的保护效应，及其对心律失常的影响及可能的机制。方法：应用单盲法将98例冠心病心绞痛和冠心病心律失常病人随机分为治疗组（65例）和对照组（33例），实验组在心血管病常规治疗的基础上加用门冬氨酸钾镁，而对照组只应用心血管病常规治疗，分别在用门冬氨酸钾镁前和用药1周时检测患者血浆中还原型谷胱甘肽（GSH），氧化型谷胱甘肽（GSSG），丙二醛（MDA）及氧化型低密度脂蛋白

2、（OxLDL）的含量。所有心律失常病人佩戴Holter连续监测心律。结果：和对照组相比，实验组的GSH含量及GSH/GSSG明显升高（P<0.001）,而GSSG、MDA及OxLDL的含量明显下降（P<0.001）。实验组早搏总数减少了86.5，而对照组早搏总数只减少了47.4；且病人氧化应激态指标的改善与早搏总数的减少呈现显著的直线相关关系。连续应用门冬氨酸钾镁1周，未发现有药物不良反应事件发生。结论：门冬氨酸钾镁能显著改善冠心病心绞痛和冠心病心律失常病人机体的氧化应激态，降低脂质氧化损伤程度；并对频发早搏有良好的治疗效应。门冬氨酸钾镁对频发早搏的治疗效果与其抗氧化损伤效应间具显

3、著的相关性，提示氧化应激可能是冠心病心律失常的发生机制之一。写手联盟 专业代写代发表职称论文、专业论文，推荐刊物均为同时具有CN和ISSN双刊号正规期刊，以优惠的价格，优良的服务，为您打造最优质的原创论文代写和职称论文发表服务! 可提供论文加急发表。 门冬氨酸钾镁（潘南金）；氧化应激态；谷胱甘肽；丙二醛；氧化型低密度脂蛋白心律失常的发生基础在于心肌电活动的紊乱，其与心肌细胞膜上的各种离子通道功能障碍有密切的关系，因此，心律失常也可被视作为一种膜疾病。目前有关膜损伤的一个重要分子机制为氧化损伤，各种活性氧基团常通过自由基链反应，引起细胞膜脂质分子及膜镶嵌蛋白的损伤和功能紊乱，导致包括膜通透性、膜

4、电生理特性异常等在内的一系列病理损害。本课题组在前期的实验研究中发现：门冬氨酸钾镁可改善细胞的能量代谢，提升线粒体琥铂酸脱氢酶和细胞色素氧化酶的活性，增加ATP生成，增强心脏的抗缺氧能力，并对胞膜Na+ K+-ATP酶活性具有明显的促进效应，促进K、Mg2离子进入细胞1。门冬氨酸钾镁对细胞膜的功能似乎显示出良好的保护效应，而且，门冬氨酸钾镁在临床已广泛用于急性心肌梗死、多种类型心律失常及急、慢性肝炎的辅助治疗，因此，门冬氨酸钾镁是否能拮抗膜的氧化应激性损伤？并与其抗心律失常效应相关？目前，尚未见类似的研究报导。本研究旨在冠心病、心律失常的临床层面对该问题做一个前瞻性的探讨。资料与方法1.病例选

5、择：本研究选择河南省人民医院老干部病房心内科2005.72006.2入院的冠心病心绞痛和冠心病心律失常病人共98例，所有病人对本研究都享有知情权。男性64例，女性34例，年龄在4394（70.97&plusmn;10.63）岁，体重指数为 17.1132.28（25.36&plusmn;3.04）；随机(单盲)分为实验组和对照组，实验组：共65例，男42 例，女 23例，年龄4692（70.31&plusmn;9.84）岁，体重指数17.1132.28（25.22&plusmn;3.00）；对照组：共33例，男22例，女11 例，年龄4394（72.24&

6、;plusmn;11.76）岁，体重指数20.9931.44（25.63&plusmn;3.06）,两组间年龄，体重指数经统计学分析无显著性差异（P>0.05）。1.1 入选标准:入选心律失常皆为冠心病心肌缺血引起的频发室性和(或)室上性早搏，冠心病早搏诊断参照1979年全国中西医结合防治冠心病、心绞痛及心律失常研究病因座谈会修订的常见心律失常、严重程度及疗效参考标准2. 入选冠心病不稳定性心绞痛的诊断参照中华医学会心血管分会和中华心血管病杂志编委会制定的不稳定性心绞痛诊断标准3。1.2 排除标准：三度房室传导阻滞，病窦综合征，严重窦性心动过缓（心率<50次/分），正在服用

7、抗心律失常药物及影响心脏电生理的药物或停服该药物不足5个半衰期;心脏神经官能症、颈椎病所致胸痛者；合并严重高血压（ 收缩压&ge;180mmHg，舒张压&ge;110mmHg）、重度心肺功能不全及其他严重疾患而限制运动者；心脏瓣膜病及其他心脏疾病导致心绞痛；合并严重肝脏、肾脏（血肌酐>2.0mg/dl）、造血系统,内分泌代谢疾病，结缔组织疾病和肿瘤等；血钾>5.5mmol/l；研究者认为有不适于参加试验的其他因素.2. 药品与仪器：2.1 药品门冬氨酸钾镁注射液：本研究所使用的门冬氨酸钾镁注射液为匈牙利吉瑞大药厂生产的潘南金（Panangin），针剂：每支10ml含

8、无水门冬氨酸钾0.452g（相当于103.3mg的钾离子），含无水门冬氨酸镁0.4g（相当于33.7mg的镁离子）。GSH和GSSG标准品：Sigma公司产品N-乙基马来酰亚胺（NEM）：瑞士Fluka公司产品邻苯二甲醛（OPA）：瑞士Fluka公司产品其余均为国产分析纯试剂。各种溶液配制：偏磷酸（MPA）用去离子三蒸水配成10%MPA磷酸盐液：内含0.1M/L的磷酸氢二钠以及0.005M/L的EDTA-Na2(pH 8.0)NaOH:用蒸馏水配成0.1M/L（pH 12.0）NEM：配成0.04M/LOPA：用甲醇配成1mg/ml实验过程中用水均为去离子三蒸水。2.2 主要仪器SORVALL

9、 RC-3B 低温离心机岛津RF-540型荧光分光光度计Sartorius BP-61型电子天平（感量0.1mg）722分光光度计酶标仪3.研究方法3.1.用药方法：将符合入选标准的患者随机分入实验组和对照组，对照组只给予常规心血管病用药，不使用门冬氨酸钾镁液；试验组病人除常规心血管病用药外，每天给予潘南金30 ml加入250ml的5葡萄糖中静滴；如果病人同时伴有糖尿病则用250ml的盐水代替5葡萄糖。所有病人研究过程中均避免应用维生素C，维生素E，辅酶Q等对氧化还原态有影响的药物。而且在常规用药上尽量保持试验组与对照组的均衡性，以确保试验与对照的可比性。3.2.血标本采集、贮存及MDA、Ox

10、LDL测定：入选病人于用药前、用药1周时分别采集清晨空腹肘静脉血3ml加入备有预冷肝素（187.5u/0.3ml）抗凝管中，试管放在2-8冰箱保存,并在30min内低温（4）5000转/分离心,离心5分钟：（1）取0.5 ml血浆超低温（-30）保存在EP管中，备测丙二醛（MDA），MDA 测定用硫代巴比妥酸比色法; 所用试剂为南京建成生物研究所提供,所有测定步骤均按说明书严格执行。（2）取0.5 ml血浆超低温保存在EP管中，备测氧化型低密度脂蛋白（OxLDL），测定采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法，试剂盒由大连泛邦化工技术开发有限公司提供，所有操作严格按试剂说明书进行。（3）取0.5

11、ml血浆加入10%偏磷酸0.5 ml,低温(4)5000转/分,离心20分钟,取上清液0.5 ml,超低温保存在EP管中,备测还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）。3.3谷胱甘肽还原型和氧化型的测定3.3.1 标准曲线制备：由于GSH在pH8.0时同荧光物质结合最好，而GSSG在pH12.0时同荧光物质结合最好，因而配制GSH的稀释液为0.1M磷酸氢二钠-0.005M EDTA液（pH8.0）；配制GSSG的稀释溶液为0.1M/L氢氧化钠。GSH标准液具体制备方法见表1。GSSG标准液配制方法同GSH，但是加入的稀释液为0.1M/L氢氧化钠。17号管为配制好的浓度依次为0.5、

12、1、2、4、6、8、10ug/ml的GSH标准溶液。0号管为空白管。加入浓度为1mg/ml OPA-甲醇溶液后，混匀，室温下静置30分钟, 在激发波长334.4nm，发射波长422.4 nm处测荧光强度，以标准品浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线。结果见图1：3.3.2 样品测定：将制备好的血浆100&mu;l，测定GSH时加入0.1M/L磷酸氢二钠-0.005M/LEDTA稀释液900&mu;l，测定GSSG 时加入稀释液0.1M/L NaOH 900&mu;l，混匀后取100&mu;l 样品稀释样品再加入相应缓冲液1900&mu;l,最后加

13、入100&mu;l OPA-甲醇,充分混匀放置30 分钟后，在激发波长334.4nm，发射波长422.4nm 处测荧光强度。3.4.临床观察指标：用药前及用药1周除检测氧化应激态指标外，同时还检测血压及各种实验室检查（血尿粪常规、电解质、肝功能、血肌酐、尿酸、血糖、血脂、心肌酶谱等）。所有心律失常患者皆佩戴Holter监测心律。4.统计学处理标准品及所有样品均用平行管，取其均值作为该样品的测量值。应用SPSS12.0统计软件进行统计分析，计量资料以均数&plusmn;标准差（X&plusmn;S）表示，采用两均数比较的t检验及直线相关分析。以P<0.05为统计学差

14、异有显著性，以P>0.05为统计学差异无显著性。结 果1. 门冬氨酸钾镁对氧化应激态指标的改善效应实验组和对照组用药前的GSH，GSSG，GSH/GSSG比值，MDA，OxLDL统计学上无显著性差异（P>0.05），实验过程中对照组只应用心血管病常规用药，而实验组在常规用药的基础上加用了门冬氨酸钾镁。1周后，实验组GSH升高13.52，GSSG降低11.59，GSH/GSSG比值升高28.71，MDA降低19.69，OxLDL降低27.02，与治疗前相比有显著性差异（P0.000）。对照组经常规治疗，各项检测亦略有改善，但改善幅度显著低于加用潘南金的实验组，GSH仅升高了0.42，

15、GSSG降低1.93，GSH/GSSG比值升高2.56，MDA降低5.02，OxLDL降低6.47。各项氧化应激态指标测定的结果见表2。2. 门冬氨酸钾镁对频发早搏的改善效应冠心病心律失常频发早搏病人用药前实验组和对照组早搏数统计学上无显著性差异，应用门冬氨酸钾镁液1周后，两组早搏数均明显减少，但减少幅度相差很大，试验组早搏总数减少了86.5；室性早博总数减少了86.2；室上性早博总数减少了86.0。而对照组在同等条件下未应用门冬氨酸钾镁，早搏总数只减少了47.4；室性早博总数减少了52.8；室上性早博总数减少了40.6 。见表3。3. 门冬氨酸钾镁对频发早搏的改善效应与对氧化应激态指标改善效

16、应的相关性分析从上述结果各项指标变化的趋势看，门冬氨酸钾镁对频发早搏的改善效应与对氧化应激态指标的改善效应呈现高度一致性，两者是否有某种内在的相关联系？为此，我们（写手联盟 )对两类指标的变化进行了相关分析，结果见图2、3、4。讨 论1. 氧化应激态检测指标的选择活性氧可造成各种组织结构和成份的广泛损伤，脂质、蛋白质、核酸、维生素等各种生命成份都是活性氧的攻击靶标，并进而生成相应的氧化应激产物。以何种指标能最有效地反映机体氧化应激的状态及其损伤效应一直是个悬而未决的问题，这通常取决于研究的目标。如研究基因的氧化应激损伤，常需检测8-羟基鸟嘌呤脱氧核苷(8-OHdG)，因嘌呤的C8位最易被氧化修

17、饰为羟基，成为8-羟基鸟嘌呤或8-羟基腺嘌呤，其与脱氧核糖构成的8-OHdG 成为DNA氧化损伤的重要检测指标。蛋白质分子的侧链氨基酸，如赖氨酸、精氨酸、脯氨酸和苏氨酸等易被氧化生成相应的蛋白羰基衍生物，蛋白羰基在氧化应激早期即可形成，且有较高的稳定性，因而在氧化应激早期常采用羰基测定作为判断蛋白质氧化损伤的指标4。晚期氧化蛋白产物(advanced oxidation protein products：AOPP)和蛋白晚期糖基化终产物（Advanced glycation endproducts：AGE）常作为蛋白氧化损伤的晚期标志物5。脂质的氧化损伤常发生于多不饱和脂肪酸的双键位上，并产生

18、一系列的链式反应而生成醛、酮、羧酸等小分子产物，丙二醛(MDA)是目前检测脂质氧化损伤的代表性产物。OxLDL是反映血脂氧化应激态的公认指标，oxLDL的升高被认为与动脉粥样硬化的发病有密切的关系6，也是反映病人整体脂质氧化应激损伤的主要指标之一。由于膜的脂质双分子层构成特点，因此，本研究选择MDA、oxLDL作为膜的氧化损伤检测指标。机体的氧化应激态取决于机体的氧化-抗氧化(还原)能力间的平衡，被称为Redox status(氧化还原态)7，目前发现，许多生物大分子的结构和功能皆与氧化-还原态(Redox state)的平衡相关。如蛋白质，其分子中的巯基(-SH)保持还原态是许多蛋白质分子活

19、性的必备条件；但同时，许多蛋白质分子中的链内、链间二硫键(-S-S-)又是维持其构型的必需结构，对其活性同样必不可少，因此，蛋白质分子中巯基的氧化(-S-S-)还原(-SH)态必须有一个精细的平衡。事实上，由于氧化-还原的互根性质，一个物质的氧化必伴另一物的还原，过多的偏离平衡态的氧化或还原性物质终会促进别的物质被氧化或被还原，而自身则被还原或被氧化。这种活跃的氧化-还原反应伴随的电子转移是自由基产生的重要来源，从而诱发链式反应，产生氧化应激性损伤。因此，Redox status的平衡态偏移可反应机体氧化应激态的基础状况。由于GSH/GSSG是机体最主要的内源性氧化-还原态调控因子，GSH在细

20、胞内的含量远高于其它抗氧化物质；且GSH/GSSG具双向调控能力，-SH和-S-S-间的转换调控着许多生物大分子的活性，被称为“分子开关”(molecular switch)8，因此，本研究选择GSH/GSSG的平衡态作为反应机体氧化应激态的主要指标。2. 门冬氨酸钾镁改善氧化应激态指标的可能机制门冬氨酸钾镁的抗氧化损伤机制可能主要和镁离子相关。铁离子(Fe2+)过负荷是机体氧化应激的最重要原因之一，Fe2+催化Fenton反应生成羟自由基，后者是机体最主要的损伤性氧自由基，而铁离子的过负荷目前被认为主要经由L型钙通道(L-type voltage-dependent calcium chan

21、nel LVDCC), 镁离子恰是该通道的天然阻滞剂9。Kostellow等10观察了细胞外Mg2+对铁催化的大鼠大动脉条及人大动脉平滑肌细胞的影响，发现含Fe2+培养基中血清Mg2+浓度从生理浓度（0.7-0.96mM）降低到病理生理浓度（0.3-0.5 mM）时，磷脂氧化产物MDA和4-HA升高2-3倍，而细胞外谷胱甘肽减少；相反，Mg2+增多时，MDA/4-HA降低，伴有细胞外谷胱甘肽增多。这说明Mg2+在Fe2+催化的大动脉细胞膜脂质过氧化中起保护作用，同时也证明了Mg2+在心血管疾病中的保护效应。细胞外镁的保护作用与其能够维持谷胱甘肽水平，升高GSH有关。GSH可防止离子催化的脂质过氧化；降低细胞内神经鞘脂类及神经酰胺水平，抑制NF-kappaB的激活，减轻心血管疾病中的炎症反应11。有关镁抗心肌氧化应激的研究报导颇多。镁缺乏增加与心肌梗塞有关的自由基生成，加剧氧化损伤至心肌层12。镁缺乏延长心肌顿抑，加重氧化损伤，降低心功能13，镁缺乏时，血清超氧阴离子和神经肽增多，神经肽经超氧阴离子介导机制刺激心脏纤维母细胞增殖，导致心肌纤维化14。镁抑制NADPH氧化酶，使超氧阴离子生成减少，其作用与NADPH氧化酶的其他强效抑制剂相当。镁治疗可使超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性显著增强（10-50%），谷胱甘肽浓度显著增加，自由基清除增多。另外，镁在内皮源性舒张因子EDRF或